大肠埃希菌临床分离菌株喹诺酮类抗生素耐药机制研究

目的探讨我院临床分离的大肠埃希菌株耐药基因的分布及其在耐药中的作用机制。方法选择我院临床分离的大肠埃希菌菌株,采用纸片扩散法进行喹诺酮类药物药敏试验,筛选耐药菌株并测定环丙沙星MIC,对喹诺酮耐药菌株进行qnrA、qnrB、aac-（6’）-Ib-cr、GyrA及ParC检测,并进行基因扩增测序。结果 84株临床分离的大肠埃希菌菌株中有24株对喹诺酮类药物耐药,耐药率为28.4%。其中对2种药物耐药4株,对3种药物耐药6株,对5种药物耐药14株。耐药菌株MIC值为对照菌株148～596倍,24株耐药菌中检出qnrA质粒基因12株、qnrB质粒基因4株、aac-（6’）-Ib-cr基因4株、GyrA基因喹诺酮决定区突变11株、ParC基因决定区突变4株。结论我院存在大肠埃希菌喹诺酮耐药菌株,且耐药菌株耐药机制复杂,耐药基因的产生及酶类耐药突变是主要原因,临床要加强对耐药菌株的检测。     

肠道杆菌耐药基因的研究

目的检测肠道杆菌对抗菌药物的敏感性及其耐药基因。方法选取16株临床分离的肠道杆菌,用纸片扩散法检测其对14种抗菌药物的敏感性。PCR法检测TEM型β-内酰胺酶基因、DHA和ACT-1型AmpC酶基因、aac(6′)-Ⅰb型氨基糖苷类修饰酶基因、qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因。结果多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢噻吩全部耐药,其余药物显示不同程度的耐药。TEM型β-内酰胺酶基因检测均为阳性。对卡那霉素耐药的志贺菌和大肠埃希菌aac(6′)-Ⅰb基因检测阳性,大肠埃希菌qacEΔ1-sul1基因检测均为阳性而志贺菌均为阴性。AmpC酶基因检测结果有2株菌ACT-1阳性而DHA全阴。结论多重耐药细菌存在多种耐药基因。     

铜绿假单胞菌耐药基因突变与抗菌药物的关系研究

目的 了解铜绿假单胞菌在抗菌药物的诱导和选择性压力下,其耐药突变株的耐药相关基因的突变情况.方法 对临床分离的40株铜绿假单胞菌采用PCR法检测β-内酰胺酶基因、喹喏酮类耐药基因、整合子基因.然后分别用头孢他啶、头孢吡肟联合左氧氟沙星对以上铜绿假单胞菌进行诱导和选择,传代1周后,重新测定耐药基因的阳性率,对耐药相关基因的变化情况分析研究.结果 40株铜绿假单胞菌在抗菌药物选择和诱导前,耐药基因的检出率为染色体型AmpC 90.0%、β-内酰胺酶TEM 45.0%、耐消毒剂及磺胺类基因与β-内酰胺酶CARB均为30.0% 、AmpC β-内酰胺酶DHA7.5%、其他耐药基因检测均为阴性,OprD2缺失率37.5%;在抗菌药物选择与诱导之后,在所检测的耐药基因中只有TEM检出率变化较大,从45.0%增至55.0%,由染色体型AmpC基因突变产生的高产AmpC酶菌株由原来的25.0%增加到47.5%.其他耐药基因检测结果与诱导和选择前相比无变化.结论 临床分离铜绿假单胞菌携带多种耐药基因,应用抗菌药物诱导和选择后主要是β-内酰胺类耐药基因改变较明显.     

铜绿假单胞菌氯霉素耐药相关基因研究

目的了解铜绿假单胞菌（PAE）氯霉素耐药相关基因的携带状况。方法采用K-B法分别对山东（A院）、江苏（B院）二家医院PAE菌临床分离株进行抗菌药物的敏感试验。采用聚合酶链反应法（PCR）对氯霉素耐药相关基因（catB、cmlA）进行检测，并对相关基因进行序列分析。结果A院30株PAE对16种抗菌药物多药耐药；B院20株PAE对16种抗菌药物均耐药；二家医院PAE对氯霉素均不敏感。A医院30株多药耐药PAE菌catB、cmlA基因均阴性；B医院20株泛耐药PAE菌cmlA基因阳性18株（阳性率90．0％），并经测序证实；catB基因均阴性。结论不同医院PAE氯霉素耐药机制可不相同，氯霉素耐药率高的原因需进一步研究。     

B族溶血性链球菌孕期感染分离株的耐药基因检测

目的了解孕期感染的B族溶血性链球菌（GroupBStreptococci,GBS）的耐药基因谱与耐药的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法对分离自孕期感染的92株GBS进行多种红霉素耐药基因的检测;采用K—B法、D试验法方法检测多种抗菌药物及克林霉素诱导型（MLSA）耐药表型。结果孕期感染的GBS未发现对青霉素、氨苄青霉素、替考拉宁、万古霉素耐药菌株,但青霉素、氨苄青霉素的中介率较高,分别是29．7％、26．2％;红霉素、克林霉素耐药率分别为52．2％、50．8％。耐药表型以结构型耐药（红霉素耐药、克林霉素耐药,cMLSa）为主,红霉素耐药基因以ermB为主,未发现ermC、ermM、ermTR基因。结论孕期感染的GBS对红霉素耐药的重要基因是ermB基因。对青霉素、氨苄青霉素仍可作为预防和治疗孕期感染的首选药物;对青霉素过敏的患者,红霉素和克林霉素作为预防和治疗孕期GBS感染的药物应用价值应给予重新评价。     

多重耐药德尔卑沙门菌临床株耐药基因的研究

目的检测临床分离的多重耐药德尔卑沙门菌对抗菌药物的敏感性及其耐药机制。方法选取8株多重耐药的德尔卑沙门菌,用微量肉汤稀释法检测对12种抗菌药物的敏感性。质粒指纹图谱分析耐药质粒分布。聚合酶链反应(PCR)检测TEM、CTX-M型β内酰胺酶基因、I型整合子相关的整合酶intI基因和qacEΔ12sul1耐消毒剂和磺胺基因,染色体和质粒介导喹诺酮耐药基因gyrA,parC,qnrA/qnrB/qnrC/qnrS,aac(6')-Ⅰb-cr,oqxAB等12种耐药基因。结果8株多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、头孢西丁、卡那霉素、庆大霉素、复方磺胺甲唑、四环素及氯霉素等9种抗菌药物全部耐药,2株对头孢曲松耐药。所有菌株对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟敏感。质粒电泳显示,8株菌均携带1~4种大小不等质粒,其中约182kb大小质粒可发现于3株菌中。所有8株菌都携带TEM编码基因,intI和qacEΔ12sul1、aac(6')-Ⅰb-cr基因。有2株菌携CTX-M-14型耐药基因。在喹诺酮耐药相关基因中,5株菌的GyrA发生了D87S的氨基酸突变,5株菌的ParC发生了T57S的氨基酸突变。5株菌携带oqxAB基因,4株菌携带qnrS基因。所有菌株都未携带qnrA/qnrB/qnrC耐药基因。结论多重耐药沙门菌同时存在多种耐药基因,耐药质粒与I型整合子系统共存是导致菌株同时对多种结构各异的抗菌药物耐药的原因。     

广州地区艰难梭菌耐药检测与耐药机制分析

目的：了解广州地区腹泻患者中分离的艰难梭菌（ CD）耐药情况及耐药发生的可能机制。方法收集广州3 家医院的腹泻患者粪便标本467 份。PCR 方法直接检测粪便中CD 种特异性tpi 基因,对tpi 基因阳性的粪便标本富集芽孢后,采用厌氧培养法用CCFA 培养基进行CD 的分离培养,然后PCR 鉴定可疑菌株的CD 种特异性tpi 基因;采用Etest 法测定CD 对常用抗菌药物的MIC 值并判定菌株对这些药物的敏感性;对耐药菌株,通过PCR 和基因测序方法检测相关的耐药基因如克林霉素耐药相关基因ermB 及喹诺酮类耐药主要相关DNA 旋转酶基因gyrA 和gyrB 的突变情况。结果 467 份粪便标本共检测出tpi 阳性标本29 份,从中共培养出22 株CD。药敏结果显示,所有菌株对甲硝唑、万古霉素、阿莫西林／克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林／他唑巴坦均敏感,未检测到对上述5 种抗菌药物耐药和中介的菌株。测试菌对克林霉素、青霉素、莫西沙星的耐药率分别是90畅9％（20／22）、27畅3％（6／22）和13畅6％（3／22）。所有耐药菌株中,有2 株同时对克林霉素、莫西沙星、青霉素耐药。20 株对克林霉素耐药的CD 中,有40％（8／20）的菌株ermB 基因阳性,3 株莫西沙星耐药菌株中均检出gyrA、gyrB 基因发生突变。结论 广州地区CD 对临床常用抗菌药物耐药率不高,但对克林霉素有较高的耐药率,ermB 基因的存在是CD 对克林霉素耐药的原因之一,而gyrA、gyrB 基因的突变与CD 对喹诺酮类耐药有关。另外,已出现同时耐3种抗菌药物的多重耐药CD 菌株。     

不同国家、地区细菌耐药性差别与抗感染治疗对策

致病菌耐药性的快速发展使临床抗感染治疗面临越来越大的困难。在生长繁殖过程中 ,细菌可通过自发突变产生耐药基因 ,也可以通过质粒、噬菌体、转座子等可移动的遗传物质获得外源性耐药基因 ,在耐药基因存在的前提下 ,抗菌药物所产生的选择压力可以使细菌中的耐药亚群逐渐发展成为优势菌群。过多或不当地使用某些抗菌药物使致病菌长时间地暴露于这些抗菌药物的选择压力之下 ,会导致对这些抗菌药物耐药的细菌大量出现。因此 ,抗菌药物的使用是导致细菌耐药性发展的关键因素之一。由于各国、各地区的社会经济发展水平参差不齐 ,抗菌药物的生产…     

孕晚期妇女B族链球菌携带情况及耐药机制研究

目的研究孕晚期妇女B族链球菌（GBS）携带情况及大环内酯类等抗菌药物的耐药表型和耐药机制。方法收集848份孕晚期妇女阴道/肛门拭子样本,采用哥伦比亚血琼脂培养基和GBS显色培养基进行培养。采用纸片扩散法进行GBS红霉素、克林霉素、左氧氟沙星及万古霉素药敏试验。聚合酶链反应（PCR）检测大环内酯类抗菌药物耐药基因ermA、ermB、ermC、ermTR、mefA/E及林可酰胺抗菌药物耐药基因lnuB。结果848份标本共筛查出95株GBS,阳性率11.2%。红霉素、克林霉素和左氧氟沙星耐药率分别为78.9%、82.1%、30.5%,万古霉素全敏感。95株GBS经D环试验检测,69株为结构耐药表型cMLSB,5株为诱导耐药表型iMLSB,1株为红霉素耐药克林霉素敏感M表型,3株为红霉素敏感克林霉素耐药L表型。PCR检测到59株GBS携带ermB基因,29株携带mefA/E基因,19株携带lnuB基因,2株携带ermTR基因,未检测到ermA和ermC基因。48株GBS仅含一种耐药基因,27株GBS含两种及以上耐药基因。结论温州地区孕晚期妇女GBS携带率高,需要对所有孕晚期妇女进行GBS筛查试验;GBS红霉素和克林霉素耐药率高,并且以cMLSB耐药表型为主。大环内酯类耐药基因以ermB为主;lnuB基因携带率高于其他地区。     

恩替卡韦是肾脏及骨骼安全性更高的一线药物

正慢性乙型肝炎的治疗关键是抗病毒。目前国内外指南均提出,要选择高效、低耐药的药物,最大限度地长期抑制乙肝病毒复制。核苷(酸)类药物相当于为乙肝病毒设置了一道"屏障",耐药基因屏障高的药物,耐药发生率低。恩替卡韦和替诺福韦酯都属于高耐药基因屏障药物,且副作用小,目前被国内外的指南推荐为抗乙肝病毒治疗的一线药物。恩替卡韦的耐药率较低,5年耐药率仅有1.2%;     

株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因存在状况和遗传学背景。方法聚合酶链反应法对多重耐药的肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、质粒AmpC酶基因、qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因、整合子遗传标记（整合酶基因）、Tn21／Tn501转座子遗传标记（汞离子还原酶基因）检测。结果TEM、SHV型β-内酰胺酶基因，DHA型质粒AmpC酶基因，aac（6’）-I型氨基糖苷类修饰酶基因，qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因，整合子遗传标记（intIl整合酶基因），Tn21／Tn501转座子遗传标记（merA汞离子还原酶基因）检测阳性。结论多重耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因和I类整合子、Tn21／Tn501转座子。     

腹透相关性腹膜炎革兰阳性致病菌及相关耐药基因的检测分析

目的 通过探讨腹膜透析相关性腹膜炎(PDAP)革兰阳性致病菌药敏结果并检测相关耐药基因,了解本地区PDAP革兰阳性球菌相关耐药基因携带情况,以指导临床用药。方法 收集2014年1月至2015年10月入住安徽医科大学第一附属医院的PDAP患者腹透液标本,进行传统培养并进行药敏试验,以革兰阳性球菌为研究分析对象,应用多重聚合酶链反应检测样品中4种耐药基因,分别为万古霉素耐药基因vanA/vanB/vanC,一代头孢耐药基因mecA。结果 44份培养结果为革兰阳性球菌的标本中4份含有vanA基因,37份携带vanC基因,未检出vanB基因,12份携带mecA基因,携带mecA基因的样本耐药率高于未携带基因的样本,两组差异有统计学意义(P<0.05);所选样本对头孢唑林的耐药率达63.63%,对万古霉素均敏感。结论 本地区PDAP患者中以革兰阳性菌为主,携带相关耐药基因的样本表现出多重耐药,相关耐药基因在耐药机制中发挥着重要作用,因此,检测样本是否携带相关耐药基因对临床抗菌药物的选择有一定指导作用。     

基因芯片在白念珠菌耐药基因研究中的应用

近年来,临床上白念珠菌耐药现象日趋增多,利用基因芯片来绘制基因表达图谱是目前研究白念珠菌酎药基因最常用的手段.通过基因芯片对菌株在不同药物处理或经不同途径产生耐药表型后大量差异表达基因进行分析,可用来寻找耐药相关基因,并阐明其功能,更有助于多基因协同作用机制的深入研究.     

顺铂耐药卵巢癌的差异表达基因和信号通路富集分析

目的 分析顺铂耐药卵巢癌的差异表达基因和信号通路.方法 用美国国立信息中心NCBI的GEO数据库获得顺铂耐药卵巢癌基因集GSE15372, 通过R与Bioconductor软件进行差异表达基因分析;再利用DAVID在线工具对顺铂耐药卵巢癌差异表达基因进行GO本体分析、KEGG通路分析.结果 差异倍数在2倍以上、FDR值小于0.05为标准, 筛选出上调差异表达基因和下调差异表达基因获得差异表达基因211个, 其中上调基因120个, 下调基因91个;基因富集分析发现差异表达基因集中在黏着斑、TGF-β信号通路等生物过程 (P<0.05) .结论 顺铂耐药卵巢癌存在一些特异的差异表达基因, 有部分信号通路在顺铂耐药卵巢癌中明显富集.     

结核分枝杆菌对氨基水杨酸耐药相关基因的筛选及鉴定

目的筛选二线抗结核药物对氨基水杨酸(para-aminosalicylic acid,PAS)的耐药相关基因。方法构建H37Rv转座子文库,筛选PAS耐药克隆,随机引物PCR扩增转座子插入突变基因。在PAS耐药菌株中鉴定耐药相关基因的突变情况。结果构建了较完整的H37Rv转座子文库,并筛选出201个PAS耐药克隆,经测序找到4个可能的PAS耐药相关基因,分别是Rv1534、pknF、ndh、papA1。papA1基因检测到一个无义突变,为papA1基因339位C→T点突变。结论酰基转移酶基因papA1可能为PAS耐药相关基因。     

高通量测序筛选结核分枝杆菌耐药株差异基因

目的比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异,为进一步针对耐药菌株的研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各1株,提取菌株RNA,然后构建cDNA文库,使用Genome Analyzer IIx高通量测序仪进行全基因组测序,经过筛选比对后得到测序结果 ,再比较3个菌株间的基因表达差异。结果高通量测序后共得到基因3 968个。将耐药株与敏感株的基因进行比较,选取表达差异高于10倍的基因,筛选得到多耐药株差异基因16个、广泛耐药株差异基因10个。这些表达差异基因大部分与毒素-抗毒素系统、PE/PPE家族蛋白、金属转运蛋白相关。还在多耐药株中发现了一系列高表达的前噬菌体基因及噬菌体整合相关的基因。结论通过高通量测序筛选得到一系列耐药株差异表达基因,为未来对耐药菌株的研究提供依据。     

阴沟肠杆菌的耐药性及对喹诺酮类耐药基因的检测

目的研究临床分离的阴沟肠杆菌的耐药性和其对喹诺酮类抗生素耐药的分子机制。方法采用VITEK2型全自动微生物检测系统鉴定临床分离的细菌,用K—B法测定阴沟肠杆菌对25种抗生素的敏感性,用聚合酶链反应检测耐环丙沙星的阴沟肠杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因,包括qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac（6’）-Ib,并对阳性的aac（6’）-Ib结果进行测序分析。结果71株阴沟肠杆菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为46．5％和40．8％,对第一、二、三代头孢菌素类药物的耐药率在50％以上,对青霉素类药物的耐药率在70％以上,对含β－内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率在50％以上,对氨基糖苷类药物（庆大霉素、妥布霉素）的耐药率在46．5％以上,对碳青霉烯类药物的敏感性最好,对亚胺培南、美罗培南的耐药率为0。37株耐环丙沙星的阴沟肠杆菌中1株检出qnrA基因（2．7％）,4株检出qnrS基因（10．8％）,qnrB基因全阴性,qnr基因的总阳性率为13．5％。2株检出qepA基因（5．4％）。25株捡出aac（6’）－Ib基因（67．6％）,经测序证实其中5株为aac（6’）－Ib—cr（13．5％）。1株菌同时携带qnrs和aac（6’）－Ib—cr基因。质粒介导的喹诺酮类耐药基因的总携带率为29．7％。结论临床分离的耐喹诺酮类药物的阴沟肠杆菌携带qnrA、qnrS、qepA和aac（6’）-Ib—cr基因,未检出qnrB。qnr、qepA和aac（6’）－Ib—cr基因引起质粒介导的阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药。     

Detecting drug resistant genetic mutation among pneumoconiosis patients complicated with tuberculosis in Mycobacterium tuberculosis L-forms application of PCR-SSCP technique in Huainan mining district

Objective： To study the relationship between drug resistant genetic mutation and drug resistance in Mycobacterium tuberculosis L-form, discuss the internal relationship between drug resistances and drug-resistant related genes and explore the value of PCR- SSCP to clinical application. Methods： A total of 52 clinically isolated strains of tuberculosis L-form were collected among 97 pneumoconiosis patients complicated with tuberculosis. The gene mutations of katG, rpoB and rpsL were detected by PCR-SSCP, and the results were compared with those analyzed by traditional antimicrobial susceptibility test（AST）. Results： The gene muta- tion rates of katG, rpoB and rpsL by PCR-SSCP were respectively 57.70% （30/52）, 65.38% （32/52） and 40.38% （21/52）. The rate of reversion was 78.85%（41/52） and the result of drag-resistant genes was invariable. The results of AST showed that there were 40 （76.92%） multi-drug resistant strains in 52 clinically isolated strains. The number for three-drug resistant strain was 21 （40.38%） and that of two-drug resistant was 19（36.54%）, but only 12（23.08%） strains were one drug resistant. The rate of total drug-resistance was 100%, but there were 15 strains of allied mutation of three genes, 16 of two mutations and 6 of only one by PCR-SSCP. The coincidences were respectively 71.43%, 84.12% and 50.00%. Then there was no significant difference between the allied mutations of multi-drug resistant gene and the mutations of only one drug resistant gene （P 〉 0.05）. Conclusion： PCR-SSCP technique has a higher sensibility and specificity to detect the genes of katG, rpoB and rpsL in tuberculosis L-form among pneumoconiosis complicated with tuberculosis,and the detecting rate of two drug resistant strains and three drug resistant strains was higher. The combined application of PCR-SSCP and AST has advantages at earlier diagnosis and guidance of clinical medications.