实验性骨延长区TGF-β_1的基因表达和细胞定位

目的　了解骨延长过程中TGF β1 基因在骨延长区组织细胞的表达和定位 ,从分子水平探讨延长区骨修复的机制。方法　采用胫骨上干骺端截骨延长 (1.0mm d)动物模型 ,14只山羊分 7个时相点取材。通过延长区组织冰冻切片 ,TGF β1 地高辛标记的cDNA探针原位杂交。结果　延长早期延长区阳性表达细胞逐渐增加 (15d)至最高峰 ,此阶段主要定位于增生的纤维细胞和血管内皮细胞 ;以后细胞阳性表达率迅速下降 ,定位于延长区骨小梁边缘的成骨细胞。结论　TGF β1 在延长区骨修复过程中具有重要作用 ,提高和维持延长区TGF β1 基因高水平有效表达 ,可能对促进和加快延长区骨愈合具有重要的意义。     

内源性成骨因子在兔硬脑膜再生骨中的表达

目的：用外源性重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导兔结论：硬脑膜再生骨，研究内源性成骨因子骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和转化生长因子-βl（TGF-β1）的表达。方法：在诱导区加入rhBMP-2，应用免疫组化方法检测硬脑膜内源性BMP-2和TGF-β1不同天数的表达。结果：术后早期聚集的大量间充质细胞即出现表达BMP-2和TGF-β1，且随着间充质细胞分化为前软骨细胞并不断成熟，两因子的表达水平迅速提高。BMP-2在术后11 d表达最活跃，之后开始下降，而TGF-β1表达高峰出现在术后17 d。结论：外源性rhBMP-2在诱导颅骨再生过程中，能增强内源性BMP-2及TGF-β1在硬脑膜的表达，且BMP-2表达高峰早于TGF-β1。     

Smad3选择性调节TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）成骨分化中的作用。方法采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3mRNA和蛋白表达的变化;脂质体介导稳定转染Smad3ΔC,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶（ALP）和核心结合因子（cbfa1）mRNA的表达,用对硝基苯磷酸盐（PNP）法检测细胞ALP活性,用茜素红染色法检测细胞矿化能力,观察Smad3ΔC对MSCs成骨分化的影响。结果在TGF-β1刺激后24h,MSCs中Smad3的mRNA和蛋白表达量明显减少（P〈0.01）,而整个刺激过程中,Smad2的mRNA和蛋白表达量无明显变化（P〉0.05）;稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSCs和V-MSCs（空载体转染组）中ALP、cbfa1mRNA的表达水平、矿化能力明显高于Smad3ΔC-MSCs;随TGF-β1刺激时间延长,Smad3ΔC-MSCs中ALP活性增加缓慢,仅于48h有明显增加（P〈0.05）,但与同时段MSCs和V-MSCs中ALP活性相比,差异有极显著性意义（P〈0.01）。结论TGF-β1促进MSCs成骨分化这一生物学效应的输出受Smad3特异性和选择性的调节。     

转化生长因子β1及其受体基因过量表达与进展期胃癌分化及临床预后的关系

目的明确转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体基因和下游Smad基因家族成员在肠型胃癌中的表达变化与临床病理学特征及其预后的关系。方法在建立胃癌差异基因表达谱的基础上,确定胃癌及癌旁形态学正常组织中TGF-β1的mRNA表达水平存在明显差异,进一步利用组织微阵列和免疫组化染色分别检测了胃癌及癌旁形态学正常组织中TGF-β1蛋白表达水平。结果TGF-β1蛋白主要以细胞质着色为主,在90例胃癌组织中32例（36％）阳性表达,58例（64％）为阴性表达。进一步对不同分化程度的胃癌组织中TGF-β1蛋白的表达进行分析,结果表明在39例高中分化组织中23例（59％）呈阳性表达,而51例低分化胃癌中9例（18％）为阳性表达,差异有统计学意义（P〈0．01）。进一步分析了TGF-βR-Ⅰ蛋白的表达,在74例胃癌组织中42例（57％）阳性表达,32例（43％）染色阴性。在38例高中分化组织中26例（68％）呈阳性表达,在36例低分化胃癌中16例（44％）阳性表达,差异有统计学意义（P〈0．05）。对有随访资料的肠型胃癌的TGF-β1及TGF-βR-Ⅰ蛋白的表达情况与临床病理学特征进行分析。应用Kaplan-Meier法分析蛋白阳性和阴性表达组病例的生存时间,确定TGF-β1蛋白阳性表达组病例生存和预后明显好于TGF-β1阴性表达组病例（P=0．0058）。而TGF-βR-Ⅰ蛋白表达与生存和预后无明显关系（P=0．8453）。结论TGF-β1表达水平与胃癌的分化程度有关,表达阳性组病例的预后明显好于表达阴性组的病例,提示TGF-β1表达对中晚期胃癌的再分型和分类具有重要的临床意义。     

转化生长因子-β与骨关节炎的软骨损伤修复

转化生长因子-β（TGF-β）具有广泛的生理效应：它在软骨细胞代谢中起着十分重要的作用，在体外．TGF-β可促进软骨基质分泌、细胞增生、骨软骨生成分化；在体内，短期关节腔内注射可增加骨和次级软骨细胞生成、骨软骨发生。体内TGF-β的诱导表达和基因转移给骨关节炎带来了新的治疗手段，     

转化生长因子β1在下颌压缩成骨过程中的表达研究

目的研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在下颌压缩成骨过程中的表达及意义。方法(1)山羊8只,单侧实验,口外进路,下颌角区保留骨松质连续性的颊舌侧骨皮质切开术,采用特制压缩器械,每3天加力1次,每次压缩0.5mm;(2)分别在压缩结束后0、7、14、28d处死2只动物,切取压缩区骨组织脱钙处理、切片,免疫组化观察TGF-β1在下颌压缩成骨过程中的表达强度。结果(1)颌骨长度被成功缩短;(2)TGF-β1在下颌压缩成骨过程中呈与时间相关的波形表达,主要定位于成纤维细胞、成软骨细胞和成骨细胞的胞浆中,其中以压缩结束第7天的表达最强,第14天逐渐下降,28d时仅有微弱表达。结论压缩成骨的过程中,机械压缩力刺激,可使局部压缩区TGF-β1持续较高表达;持续较高表达的TGF-β1还可能参与促进压缩区新骨的形成。     

应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达

目的通过动物实验,研究应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达。方法在32只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4 mm,分别于牵张完成后的第1、3、7、14 d处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及TGF-β1免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨生成的平均灰度值,利用SPSS软件采用方差分析方法进行统计分析。结果牵引区周围组织均愈合良好,牵引间隙新骨逐渐形成,应用rhBMP-2组中的新骨组织周围TGF-β1的表达比空白胶原组中的多。结论动物实验表明,应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达明显增强。     

应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF—β1的表达

目的通过动物实验,研究应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达。方法在32只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,分别于牵张完成后的第1、3、7、14d处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及TGF-βl免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨生成的平均灰度值,利用SPSS软件采用方差分析方法进行统计分析。结果牵引区周围组织均愈合良好,牵引间隙新骨逐渐形成,应用rhBMP-2组中的新骨组织周围TGF-β1的表达比空白胶原组中的多。结论动物实验表明,应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达明显增强。     

转化生长因子β1/Smad3促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad3信号促进大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）成骨分化的机制.方法：常规细胞培养、免疫细胞化学染色观察TGF-β1作用下MSC中Smad3的表达情况;脂质体介导稳定转染Smad3中部分C端功能域突变体（Smad3△C）,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶（ALP）和核心结合因子（cbfa1）mRNA的表达,用Gomori钙钴法定性检测ALP,用对硝基苯磷酸盐（PNP）法检测细胞ALP活性,观察Smad3△C对MSC成骨分化的影响.结果：MSC细胞表达Smad3,受TGF-β1刺激后,呈现出即刻由细胞质向细胞核转位的趋势.稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSC和空载体对照MSC（V-MSC）中ALP染色呈强阳性反应,而Smad3△C-MSC中阳性率仅为34.9%（P＜0.01）;MSC和V-MSC中ALP、cbfa1 mRNA的表达水平以及ALP活性明显高于Smad3△C-MSC（P＜0.05或P＜0.01）,而MSC和V-MSC之间无显著性差异（P＞0.05）.结论：MSC中的Smad3是作为TGF-β1信号转导通路下游转导介质而存在的;通过Smad3选择性调节,具有多重生物学效应的TGF-β1才得以实现其促进MSC成骨分化的功能.     

CTGF和TGF-β1在进行性肌营养不良中的表达及与肌肉纤维化的关系

目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）和转化生长因子β1TGF-β1）在进行性肌营养不良（PMD）中的表达及与肌肉纤维化的关系。方法：取杜氏肌营养不良（DMD）、Becker型肌营养不良（BMD）、先天性肌营养不良（CMD）患儿的肌肉活检标本，采用Western印迹分析及王免痰荧光标记法检测CTGF和TGF-β1的免疫表达和定位。结果：PMD的萎缩肌肉中CTGF和TGF-β1的免疫表达明显增强，但年长CMD患儿肌肉中CTGF弱表达；肌肉膜及肌柬膜中多数激活的成纤雏细胞表达CTGF和TGF-β1，而且三者共同定位。结论：CTGF和TGF-β1可能参与了PMD的发病，在肌肉纤维化中可能起重要作用。