转导白细胞介素2基因的B16细胞对机体免疫反应的影响

应用XM6逆转录病毒载体将人IL-2cDNA转入小鼠B16黑色素瘤细胞。丝裂霉素C处理的转染前后B16细胞作为瘤苗对小鼠进行免疫接种。结果显示，接种B16-IL-2细胞可明显排斥再移植黑色素瘤的生长。对脾淋巴细胞检测的结果表明，MLTR引起的淋巴细胞增殖与特异性CTL杀伤活性，以及NK、LAK活性与诱生的IL-2水平几项指标，B16-IL-2细胞免疫组均明显高于B16免疫组及对照组。提示转基因肿瘤细胞在体内分泌IL-2增强了机体的特异性与非特异性免疫功能。     

氩氦刀冷冻治疗对浸润T淋巴细胞的影响

目的探讨氩氦刀冷冻治疗肝癌的细胞免疫反映。方法采用新西兰大白兔剖腹,肝脏接种VX2瘤细胞建立兔肝癌模型,将25只荷瘤兔随机分成两组:冷冻治疗组和对照组,氩氦刀冷冻治疗后3,7,14 d后,应用免疫组化和图像分析系统技术半定量观察癌旁组织的CD4+和CD8+细胞的浸润密度。结果氩氦刀治疗后3,7,14 d,冷冻治疗组癌旁组织内CD4+和CD8+细胞数量明显高于对照组。结论氩氦刀冷冻治疗肝癌可促进凝固性坏死灶周围组织的细胞免疫反应。     

经皮穿刺氩氦刀靶向治疗非小细胞肺癌 50例临床疗效观察

目的探讨已丧失手术机会的中晚期非小细胞肺癌经皮肺穿刺氩氦刀靶向冷冻消融术的可行性及其临床疗效。方法在CT引导下，根据影像资料提示的肿瘤大小，方位选用不同大小及数目的氩氦刀靶向刺入不能手术切除的非小细胞肺癌瘤体内进行同步冷冻消融，并根据随机的原则将50例非小细胞肺癌分为A组（单纯氩氦刀组）14例，B组（氩氦刀＋化疗组）16例，C组（氩氦刀＋化疗＋放疗组）20例进行治疗。结果经氩氦刀冷冻消融治疗后，CT值较术前下降超过30HU占66．0％。术后1周、1、3、6及12个月经复查CT示，术后1周肿瘤体积增大占100％（50／50），1、3,6及12个月有效率（RR=CR＋PK）分别为57．1％、56.3％和70％；71．4％、75％、80％；78．5％、81．3％、85％；64．3％、81．3％和85％。3组病人经不同方案治疗后症状、体征的有效率分别为：A组：-40％、57．14％、71．42％、88．57％和71．79％；B组：-40．91％、59．09％、77．27％、92．68％和88．64％；C组-36．21％、68．97％、84．48％、94、82％和89．66％。3组病人经不同方案治疗后KPS评分提高20分者A、B、C3组分别为：64．28％、25．5％和20％。结论经皮穿刺氩氦刀靶向冷冻消融治疗中晚期非小细胞肺癌是一种方法可行，临床疗效确切，副作用小的有效方法。结合放、化疗可进一步提高有效率。     

冷冻免疫瘤苗激活的TIL对恶性黑色素瘤患者T淋巴细胞亚群的影响

[目的]观察冷冻免疫瘤苗激活的TIL对恶性黑色素瘤患者T淋巴细胞亚群的影响。[方法]将42例恶性黑色素瘤患者分为A、B两组,A组单纯回输TIL,B组在A组基础上应用恶性黑色素瘤冷冻瘤苗来激活TIL,观察两组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的变化。[结果]两组回输TIL后外周血T淋巴细胞亚群提高,但经冷冻瘤苗激活的TIL较单回输TIL外周血T淋巴细胞亚群提高(均P<0.05)。[结论]经恶性黑色素瘤冷冻瘤苗激活的TIL具有提高机体细胞免疫功能的作用。     

氩氦刀冷冻治疗非小细胞肺癌对患者免疫功能的影响

目的探讨非小细胞肺癌患者经氩氦刀治疗前后免疫力的变化。方法选取2003年7月-2009年12月的患者,均经病理诊断非小细胞肺癌48例。病例选择标准:患者预期生存期大于3个月,实验期间均未接受氩氦刀以外的其他治疗。氩氦刀治疗前1周及治疗后1周收集标本,测T淋巴细胞核仁银染面积与核周银染面积的比值。结果术后3-12个月复查CT示肿瘤明显缩小,部分患者肿瘤消失。非小细胞肺癌患者在氩氦刀治疗后外周血T淋巴细胞核仁银染面积与核周银染面积的比值比治疗前明显升高(P0.05)。结论非小细胞肺癌患者经氩氦刀治疗后可以增强机体免疫功能,提高抗肿瘤能力。     

氩氦刀治疗恶性肿瘤对细胞免疫功能的影响

目的:探讨105例恶性肿瘤患者经氩氦刀治疗前后T细胞亚群的变化.方法:采用流式细胞术对氩氦刀治疗前后T细胞亚群变化进行分析.结果:恶性肿瘤患者在治疗前外周血CD3 、CD4、CD4/CD8均降低,在氩氦刀治疗后CD3、 CD4、CD4/CD8均有明显升高(p＜0.01).结论:恶性肿瘤患者经氩氦刀治疗后可以增强免疫功能,提高抗肿瘤能力.     

氩氦刀冷冻与TACE协同治疗无手术指证肝癌的临床分析

目的 探讨无手术指证肝癌TACE与磁共振手术系统氩氦刀消融协同治疗的临床意义.方法 90例肝癌患者随机分为两组,A组行单纯T A C E治疗,B组顺序行T A C E及氩氦刀治疗协同治疗.对病灶直径、A F P值变化、及1、2、3年生存率进行比较分析.结果 肝癌联合顺序治疗方法明显好于单纯TACE治疗方法,统计有显著差异.结论 TACE与氩氦刀有序结合治疗肝癌对提升患者的预后有临床意义.     

异种黑色素细胞疫苗诱导小鼠抗恶性黑色素瘤免疫反应的机理研究

目的　研究异种黑色素细胞疫苗诱导小鼠抗恶性黑色素瘤免疫反应的机理。方法　制备异种黑色素细胞疫苗 ,免疫小鼠。采用间接 EL ISA法检测小鼠抗肿瘤抗体滴度及抗体亚型 ,纯化免疫球蛋白及进行体外抗肿瘤增殖 ,采用 Western blot法分析交叉抗原蛋白质。接种恶性黑色素瘤 ,观察肿瘤生长 ,采用免疫细胞去除法分析NK细胞及 T细胞亚群对疫苗抑瘤效应的影响。结果　异种疫苗免疫后 2周小鼠体内出现抗自身肿瘤抗体 ,产生的抗体以 Ig G为主 ,抗体认别的猪眼黑色素细胞及恶性黑色素瘤细胞交叉抗原为相对分子质量达 180× 10 3的蛋白质 ,纯化的免疫球蛋白在体外能抑制恶性黑色素瘤细胞增殖。异种疫苗诱导特异性保护性免疫反应使 90 %小鼠恶性黑色素瘤生长受到抑制 ,去除 NK细胞不影响疫苗抑瘤效应 ,去除 CD4 + T细胞使疫苗抑瘤效应消失 ,去除CD8+ T细胞 70 %小鼠恶性黑色素瘤生长仍受到抑制。结论　异种黑色素细胞疫苗诱导特异性体液免疫及细胞免疫反应 ,抑制恶性黑色素瘤的生长 ,CD4 + T细胞在这一过程中发挥了关键性作用。     

肝动脉栓塞化疗结合氩氦刀治疗中晚期肝癌的 临床疗效

目的 研究分析肝动脉栓塞化疗结合氩氦刀冷冻消融对中晚期肝癌的治疗的临床效果.方法 选择120例中晚期肝癌患者.随机分为3组,每组40例.A组单纯用氩氦刀冷冻消融治疗;B组单纯用肝动脉栓塞化疗(TACE)治疗;C组用氩氦刀冷冻消融联合TACE治疗.观察各组在治疗前后AFP、肿瘤复发率及生存期情况.结果 A、B、C组肿瘤完全坏死率分别为52.5%、27.5%和87.5%;1年生存率分别为62.5%、42.5%和82.5%;C组患者血清AFP下降的程度明显低于其他两组(P<0.05).结论 氩氦刀冷冻消融联合TACE治疗中晚期肝癌安全、有效,临摘要:目的研究分析肝动脉栓塞化疗结合氩氦刀冷冻消融对中晚期肝癌的治疗的临床效果.方法 选择120例中晚期肝癌患者.随机分为3组,每组40例.A组单纯用氩氦刀冷冻消融治疗;B组单纯用肝动脉栓塞化疗(TACE)治疗;C组用氩氦刀冷冻消融联合TACE治疗.观察各组在治疗前后AFP、肿瘤复发率及生存期情况.结果 A、B、C组肿瘤完全坏死率分别为52.5%、27.5%和87.5%;1年生存率分别为62.5%、42.5%和82.5%;C组患者血清AFP下降的程度明显低于其他两组(P<0.05).结论 氩氦刀冷冻消融联合TACE治疗中晚期肝癌安全、有效,临床效果明显优于单纯用氩氦刀冷冻消融肝动脉和单纯栓塞化疗.     

氩氦刀联合全身化疗治疗中晚期非小细胞肺癌的Meta分析

目的:系统评价氩氦刀联合全身化疗治疗中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的可行性和应用价值. 方法:采用Cochrane系统评价方法,系统检索PUBMED、EBMASE、OVID、CNKI等数据库及相关试验的5.0软件进行Meta分析.共纳入4个研究,423例中晚期NSCLC患者,分为氩氦刀联合全身化疗组(188例)和氩氦刀组(235例). 结果:氩氦刀组与氦刀联合全身化疗组比较,治疗NSLCL近期有效率合并OR值为2.09,95%CI为[1.40～3.14],1年生存率合并RR为1.30 (0.98, 1.72).氩氦刀联合全身化疗的近期疗效与氩氦刀比较,可提高近期临床缓解率,但不能改善1年生存率. 结论:氩氦刀联合全身化疗治疗中晚期NSCLC患者可提高近期疗效,但远期疗效有待观察.需多中心大样本随机对照试验进一步证实.     

大豆异黄酮对老龄大鼠雌激素水平和子宫雌激素受体表达的影响

目的将白细胞介素2（IL-2）基因修饰树突状细胞（DC）,观察其和对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法将IL-2基因转染单个核细胞来源的DC后,用于激发自体细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,检测其对CTL的增殖和人胰腺癌PC3细胞杀伤性的影响：检测CTL对荷人胰腺癌PC3细胞肿瘤裸鼠肿瘤生长情况影响和对肿瘤细胞分裂指数和端粒酶活性的影响。结果IL-2基因修饰的DC细胞所激发的CTL对胰腺癌PC-3细胞有较强的抑制作用,并能抑制荷瘤裸鼠肿瘤细胞的分裂指数和端粒酶活性。结论IL-2基因修饰DC细胞激活的CTL抗PC-3肿瘤免疫作用明显增强,能明显抑制人胰腺癌PC3细胞种植瘤的生长。     

人免疫重建NOD/SCID小鼠模型的建立

目的探讨NOD/SCID（nonobese diabetic/severe combined immunodeficien）t小鼠人免疫重建模型的建立方法和免疫特性.方法 16只NOD/SCID小鼠随机分成实验组和对照组,每组8只.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,通过腹腔注射移植给实验组小鼠,空白对照组小鼠每只腹腔注射无菌PBS,第4、8和12周时,流式细胞术检测小鼠外周血中人的CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞,ELISA法测定小鼠血清中人IgG含量,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏和肝脏中人CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞浸润情况.结果移植PBMC 4周后,实验组NOD/SCID小鼠外周血中人CD3＋T、CD19＋B的细胞分别为85.6%、76.7%,并且在小鼠脾脏组织中也可以检测到人CD3 T、CD19 B淋巴细胞.移植4、8及12周后小鼠血清中人IgG含量分别达到（863±12.5）μg/mL、（1217±16.7）μg/mL、（958±13.1）μg/mL.结论用人外周血PBMC经腹腔注射可以成功建立人免疫重建NOD/SCID小鼠模型,方法简便可靠.     

T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

目的体外制备供体特异性T细胞疫苗（T cell vaccine）,探讨T细胞疫苗免疫（T cell vaccination）诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立Balb／c小鼠Ⅰ型糖尿病模型,用酶消化法和密度梯度离心法无菌分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞。制备Balb／c小鼠针对Wistar大鼠的T细胞疫苗：实验随机分为三组,G1：糖尿病小鼠对照组;G2：胰岛细胞移植组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞移植＋1640培养液（对照组）;G3：胰岛细胞移植加T细胞疫苗免疫组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞＋T细胞疫苗（实验组）,于d1,d7,d14,d21实验组Balb／c小鼠接种TCV（1×107／mL）,对照组用1640替代。接种前和每次接种后第5d分别进行混合淋巴细胞反应。胰岛细胞移植：将Wistar大鼠的胰岛按1200。1500IEQ／kg经肝门静脉导入小鼠体内,移植后观测血糖和体重变化。结果异种胰岛细胞移植可以诱导I型糖尿病小鼠血糖降至正常水平且维持一段时间,对照组小鼠移植后（5．12±1．36）d即发生排斥,实验组移植物存活时间达（20．25±3．45）d。结论TCV能够有效延长异种胰岛移植物的存活时间,是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。     

昆明山海棠提取物预防急性移植物抗宿主病的实验研究

目的观察昆明山海棠（THH）提取物在急性移植物抗宿主病（aGVHD）中的作用及其可能的作用机制。方法建立aGVHD模型,BALB/c受鼠清髓性预处理后分别用生理盐水、环孢素A（CsA）、THH及CsA＋THH混合物灌胃。观察移植后受鼠aGVHD、生存时间、CD4^＋/CD8^＋比率、CD4^＋CD25^＋T细胞比率及脾细胞Foxp3 mRNA水平。结果生理盐水组出现典型aGVHD,20天内全部死亡。其余3组aGVHD临床、病理表现及生存时间均改善,组间无差异;CD4^＋/CD8^＋比率、受鼠CD4^＋CD25^＋T细胞比率及脾Foxp3 mRNA表达较生理盐水组升高,以联用组明显。结论THH可减轻小鼠aGVHD,延长其生存时间。机制可能与增加CD4^＋CD25^＋T细胞比率,上调Foxp3 mRNA表达,调节CD4^＋/CD8^＋比率有关。THH和小剂量CsA联合有协同作用。     

黄芪多糖调节黑色素瘤小鼠PD-1/PD-Ls分子表达的研究

目的:研究中药黄芪提取物黄芪多糖在黑色素瘤B16-F10细胞荷瘤小鼠体内的抑瘤效应及对共刺激分子PD-1/PD-Ls通路的调节作用,阐明相关的抗肿瘤免疫调节机制。方法:对荷瘤小鼠进行黄芪多糖干预,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;CCK-8法检测荷瘤小鼠外周T淋巴细胞增殖活性;ELISA法检测荷瘤小鼠外周血IL-2、IFN-γ的分泌水平;Real-time PCR法检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1、PD-L2在mRNA水平的表达;Western Blot法检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1、PD-L2在蛋白水平的表达。结果:黄芪多糖可显著抑制B16-F10细胞在C57BL/6小鼠腋部皮下移植形成肿瘤的生长(P0.01);促进荷瘤小鼠外周T淋巴细胞的增殖(P0.01);升高荷瘤小鼠外周血IL-2、IFN-γ的分泌水平(P0.01);抑制荷瘤小鼠脾组织PD-1mRNA和蛋白的表达(P0.05,P0.01);抑制小鼠肿瘤组织中PD-L2的mRNA表达和PD-L1、PD-L2的蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪多糖能抑制荷瘤小鼠皮下黑色素瘤的生长,其机制可能与黄芪多糖调节PD-1、PD-Ls分子的表达及相互作用,进而增强小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫活性有关。     

C57BL/6J小鼠及鸡胚B16细胞移植瘤血管生成拟态的观察及其MMP7和MMP9的表达

[目的]探讨黑色素瘤B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤组织中MMP7和MMP9的表达与血管生成拟态形成的关系,初步探讨宿主微环境对肿瘤细胞的影响.[方法]分别建立黑色素瘤B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤模型,通过HE切片观察血管生成拟态的分布情况,利用免疫组化方法检测MMP7和MMP9的表达.[结果]B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤组织中均可见血管生成拟态,并且前者显著多于后者.鸡胚移植瘤组织和小鼠移植瘤组织中MMP7的阳性细胞百分比分别为34.55±8.98和15.27±4.21,前者显著高于后者(P＜0.01),MMP9的阳性细胞百分比分别为16.38±3.34和10.53±1.95,前者显著高于后者(P＜0.01).[结论]鸡胚移植瘤可用于研究肿瘤生长早期的生物学行为,MMP7和MMP9的表达可能与肿瘤生长早期血管生成拟态的形成有关.     

三氧化二砷对小鼠恶性黑素瘤抑制机制的探讨

目的:探讨三氧化二砷(As₂O₃)对小鼠B₁₆细胞实体瘤的生长抑制作用及对端粒酶活性表达的影响,旨在为临床治疗黑素瘤提供理论和实验依据。方法:以不同浓度As₂O₃作用的鼠黑素瘤B₁₆细胞荷瘤小鼠,用TRAP-PAGE-银染法检测药物作用后瘤体组织端粒酶活性的表达;通过测定荷瘤小鼠瘤体大小和肿瘤组织内微血管密度来反映不同剂量As₂O₃的抑瘤作用。结果:As₂O₃能抑制鼠B₁₆细胞实体瘤的生长,破坏肿瘤组织微血管的形成(P<0.01);As₂O₃能明显抑制鼠B₁₆细胞实体瘤端粒酶的活性。结论:As₂O₃对于B₁₆细胞实体瘤的生长有显著的抑制作用,这可能与其抑制肿瘤组织内微血管的形成和端粒酶表达活性有关。     

穿心莲内酯滴丸抗小鼠黑色素瘤作用的研究

目的 研究穿心莲内酯滴丸的抗肿瘤作用.方法 采用C57BL/6小鼠作为实验动物于右腋下皮下接种小鼠黑色素瘤细胞B16,建立小鼠B16皮下移植瘤模型,用穿心莲内酯滴丸(0.143 mg·20 g-1)和对照药物氢化穿心莲内酯滴丸(0.143 mg·20 g-1)灌胃治疗,观察肿瘤体积、肿瘤质量、小鼠生存率的变化,分析穿心...     

CD3AK和黄芪多糖联合治疗荷瘤动物的实验研究

目的　探讨CD3AK和黄芪多糖 (APS)对荷瘤动物的治疗作用。方法　将黑色素瘤B1 6细胞移植到C57BL/ 6小鼠腹腔建立动物模型 ,分别用APS、CD3AK及二者联合治疗荷瘤鼠 ,检测荷瘤鼠脾NK细胞活性和脾淋巴细胞IL - 2诱生水平以及荷瘤鼠生存期。结果　单纯APS和单纯CD3AK细胞能延长荷瘤鼠的生存期 ,分别为 1 8.64± 1 .2 1天和 2 5 .34± 3 .68天 (荷瘤鼠对照组为 1 4 .67± 2 .82天 ,P <0 .0 1 ) ;二者联合应用 ,APS能显著增强CD3AK细胞的抗肿瘤作用 ,延长荷瘤鼠的生存期 ,其生存期为 35 .65± 3 .74天 (P <0 .0 0 1 )。通过对荷瘤鼠进行细胞免疫功能观察发现 ,CD3AK细胞和APS均具有抵抗荷瘤鼠NK细胞活性、IL - 2产生能力下降的作用 ;APS对CD3AK仍有显著增强效应。结论　APS是一种实用而有效的生物反应调节剂 ,CD3AK和APS联合应用对晚期肿瘤有一定治疗效果     

融合蛋白G3G6和HST1致敏DC疫苗抗黑色素瘤的药效学研究

探究促性腺激素释放激素(GnRH)与胃泌素释放肽(GRP)偶联的融合蛋白(G3G6)和热休克蛋白65(HSP65)与六跨膜前列腺上皮抗原(STEAP1)偶联的融合蛋白(HST1)致敏树突状细胞(DC)的效果和致敏后DC对B16F10黑色素瘤的抑制杀伤作用。利用实验室现存工程菌表达融合蛋白G3G6和HST1,按未致敏DC(US-DC)组,G3G6融合蛋白致敏DC(G3G6-DC)组,HST1融合蛋白致敏DC(HST1-DC)组和G3G6及HST1联合致敏DC(GH-DC)组致敏小鼠骨髓来源的DC分化成熟,获得融合蛋白致敏的相应DC疫苗。将B16F10黑色素瘤细胞以1×10⁶个/只移植于C57BL/6J雄性小鼠构建黑色素瘤模型,DC疫苗免疫治疗,体内外实验探究DC疫苗的抗肿瘤药效。流式细胞术分析证明,融合蛋白有效刺激DC分化成熟;动物实验显示,与US-DC组相比,G3G6-DC黑色素瘤抑制率为35.75%,HST1-DC组为34.03%,GH-DC组为55.74%。研究结果初步证明,G3G6-DC和HST1-DC均可有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长(P<0.05),且联合用药优于单独用药(P<0.01)。