维拉帕米对高糖与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞，观察维拉帕米对高浓度葡萄糖与去甲肾上腺素共同诱导的肥大心肌细胞的影响，并推测其作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后，用[^3H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成；利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积。结果 一定浓度的维拉帕米在对高糖和去甲肾上腺素诱导的肥大心肌细胞的蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。结论 维拉帕米能有效抑制高糖与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大。     

葛根素对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大及凋亡的影响

\[摘要\]目的利用体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞,探讨葛根素(puerarin,Pue)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)所致心肌细胞肥大和心肌细胞凋亡的影响。方法新生大鼠心肌细胞培养,除对照组外,分别给予ISO(10-5mol/L)、Pue(10-6mol/L)、ISO(10-5mol/L)+Pue(10-6mol/L)、ISO(10-5mol/L)+普萘洛尔(propranolol,Pro, 2×10-6 mol/L),检测培养心肌细胞蛋白质含量、细胞体积、蛋白质的合成及细胞凋亡率。结果和对照组相比,ISO可使心肌细胞总蛋白含量、体积和凋亡率明显增加(P<0.01);Pue可以抑制由于ISO诱导所出现的上述情况,结果与Pro相近。结论Pue能对抗ISO引起的心肌肥大及细胞凋亡,此效应可能是葛根素抑制心肌肥厚发生的保护机制之一。     

美托洛尔对异丙基肾上腺素诱导心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨美托洛尔对充血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 实验选用清洁级雄性SD 大鼠60 只,随机分为空白组(n=15),模型组(n=45)皮下注射异丙基肾上腺素2次(170 mg/kg),6周后应用超声心动图检测,以左室射血分数(LVEF)小于或等于45%确定造模成功,将心力衰竭大鼠模型随机分为对照组(n=13)、美托洛尔治疗组(n=14)8 mg·kg-1· d-1,18周使用左心导管进行血流动力学检查,并利用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA断片化和免疫印迹分析法检测Bcl-2、Bax、caspase-9和caspase-3的表达.结果 (1)与空白组相比,对照组血流动力学指标明显恶化,心室质量指数(VWI)、左心室质量指数(LVWI)显著升高,心肌细胞凋亡率增加;(2)与对照组比较,美托洛尔组心率(HR)、左心室舒张末压力(LVEDP)、VWI及LVWI 明显降低(P<0.05)和±dp/dtmax明显升高(P<0.05),左心室重量指数明显降低(P<0.05),心肌细胞凋亡率下降.结论 美托洛尔能抑制心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡,改善心功能,逆转心室重构.     

肾上腺素致心肌细胞肥大的机制

目的：探讨肾上腺素致心肌细胞肥大中的机制。方法：在培养新生大鼠心肌细胞上,通过测量心肌细胞表面积和[^3H]—Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果：肾上腺素能明显增加心肌细胞表面积和[^3H]—Leu的掺入量,α受体阻滞剂(酚妥拉明)、β受体阻滞剂(心得安)、百日咳毒素(FIX)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂(calphostin C)均可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和[^3H]—Leu的掺入量增加。结论：肾上腺素诱导的心肌细胞肥大与肾上腺能受体(α受体和β受体)激动有关,并通过G蛋白和PKC介导。     

17β-雌二醇对肾上腺素诱导的心肌细胞肥大及原癌基因c-fos表达的影响

目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观察17β雌二醇(17βestradiol)对肾上腺素(phenylephrine)诱导的心肌细胞肥大及其原癌基因cfos蛋白表达的影响。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药后,用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积,免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因cfos的蛋白表达。结果17β雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积增大,同时减弱肥大心肌细胞原癌基因cfos的蛋白表达。结论17β雌二醇可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能和抑制原癌基因cfos的蛋白表达有关。     

神经肽Y与去甲肾上腺素促心肌细胞肥大效应

目的 观察神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）与去肾上腺素（NE）对心肌细胞生长、细胞内蛋白质合成的影响及二者的相互作用。方法 进行原代乳鼠心肌细胞培养，以^3H-亮氨酸掺入率的变化来反映NPY、NE对心肌细胞内蛋白质合成的影响。结果 （1）NPY组、NE组^3H-亮氨酸掺入率显著高于对照组（P〈0．01）；（2）NPY与NE合用可使心肌细胞^3H-亮氨酸掺入率进一步升高，与二者单独使用组相比差异有非常显著性（P〈0．01）。结论 （1）NPY、NE均可促进心肌细胞内蛋白质的合成；（2）NPY与NE在促进心肌细胞内蛋白质合成过程中有明显的协同效应。     

肾上腺素诱导培养新生大鼠心肌细胞肥大的实验研究

目的 :探讨肾上腺素诱导心肌细胞肥大的作用。方法 :在培养新生大鼠心肌细胞上 ,通过测量心肌细胞表面积和[3H] -Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果 :肾上腺素能明显增加心肌细胞表面积和[3H] -Leu的掺入量 ,并呈量效关系。结论 :肾上腺素有诱导心肌肥大作用     

三七总皂苷对去甲肾上腺素诱导的心肌肥大的影响

目的:研究三七总皂苷(PN S)对去甲肾上腺素(NE)诱导的新生大鼠心肌肥大的作用,并探讨其作用机制。方法:用NE诱导培养新生大鼠心肌细胞制作心肌肥大模型。经G iem sa染色后用图像分析仪测定细胞表面积,B rad ford法测细胞蛋白质含量,观察0.02、0.1、0.5 g.L-13个浓度的PN S对肥大心肌细胞的影响。结果:肥大组细胞表面积及蛋白质含量比对照组明显增加(P<0.01);PN S中、高剂量组与肥大组比较,细胞表面积及蛋白质含量均显著减少(P<0.01);低剂量PN S对细胞表面积及蛋白质含量无明显影响(P>0.05)。结论:PN S可浓度依赖性地拮抗NE诱导的大鼠心肌细胞的肥大反应。     

心衰大鼠心肌细胞对Ca2+和异丙肾上腺素的反应

目的观察异丙肾上腺素致大鼠心衰后心肌细胞对不同浓度的Ca^2＋和异丙肾上腺素的反应。方法用异丙肾上腺素制作大鼠心衰模型;测血流动力学指标验证;动物随机分为正常组和心衰组;分离心肌细胞测定细胞存活率和单个细胞在不同浓度Ca^2＋和异丙肾上腺素刺激下的收缩幅度。结果与正常对照组比较,心衰组大鼠血流动力学明显改变（P〈0.05）,心肌细胞存活率下降（P〈0.01）,对不同浓度的Ca^2＋和异丙肾上腺素的反应也较同浓度正常对照组心肌细胞收缩幅度下降（P〈0.01）。结论排除神经和体液因素的影响后,心衰大鼠心肌细胞自身对Ca^2＋和异丙肾上腺素的反应性下降。     

高糖条件下心脏成纤维细胞对心肌细胞肥大的影响

目的: 研究高糖条件下心脏成纤维细胞对心肌细胞肥大的影响。方法: 将体外分离培养的SD乳鼠心肌细胞、心脏成纤维细胞随机分为心肌细胞低糖组（A组）,心肌细胞高糖组（B组）,心肌细胞、心脏成纤维细胞共培养高糖组（C组）,心肌细胞、心脏成纤维细胞共培养加转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）中和抗体高糖组（D组）,心脏成纤维细胞低糖组(E组),心脏成纤维细胞高糖组（F组）。培养0,6,12,24,48,72 h后,倒置显微镜观察细胞形态、拍照并计算心肌细胞表面积,RT-PCR检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）、β-肌球蛋白重链（β-myosin heavy chain,β MHC）mRNA表达水平,ELISA检测各组培养液中TGF β1表达量。结果： 培养48 h时,B组心肌细胞表面积比A组显著增加（P<0.05）,而C组在培养24 h时心肌细胞表面积已显著高于A组（P<0.05）。RT-PCR显示B组和D组细胞在培养12 h时,ANP、β-MHC mRNA显著升高（P<0.05）,培养24 h时达高峰;而C组在培养6 h时ANP、β-MHC mRNA即显著升高（P<0.05）,培养12 h时达高峰。ELISA检测结果显示,培养12 h起B组、D组TGF-β1的表达均显著高于A组（P<0.05）,而在培养6 h时C组TGF-β1的表达即已显著高于A组（P<0.05）。F组各时间点成纤维细胞TGF-β1的表达均高于E组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论： 心脏成纤维细胞在高糖条件下可能通过旁分泌TGF-β1促进心肌细胞的肥大。     

ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响作用

目的：探讨体外培养中ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞的肥大是否具有抑制作用。方法：新生Wistar大鼠心肌细胞在含有10%小牛血清的DMEM中培养72h后，换用无血清培养基并分别加入高糖高胰岛素、高糖高胰岛素+ERK1/2抑制剂培养48h，未加入任何药物的心肌细胞在无血清培养基中继续培养48h作为对照。检测心肌细胞肥大指标：心肌细胞表面积、总蛋白含量的变化；并检测心肌营养素1（CT-1）mRNA的表达。结果：高糖高胰岛素可增加心肌细胞表面积、总蛋白含量以及CT-1 mRNA表达。ERK1/2抑制剂可部分抑制心肌细胞的肥大，降低心肌细胞表面积和总蛋白含量，但对CT-1 mRNA表达的影响不明显。结论：ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大具有一定的抑制作用，其作用机制可能是ERK1/2抑制剂通过作用于CT-1下游或独立于CT-1之外的信号分子而参与了高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大的过程。     

外源性精胺致大鼠乳鼠心肌细胞损伤机制的初步探讨

目的初步探讨外源性精胺损伤心肌细胞的可能机制.方法培养乳鼠原代心肌细胞,随机分为正常对照组,精胺(Sp)损伤组和异搏定(VP)、超氧化物歧化酶(SOD)、三磷酸腺苷(ATP)、地塞米松(DEX)保护组;倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化;生化法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;噻唑兰(MTT)法检测心肌细胞活力;电镜观察心肌细胞超微结构.结果 100μmol/L Sp可造成培养大鼠乳鼠心肌细胞损伤,表现为LDH漏出增多,心肌细胞活力明显降低,心肌超微结构损伤严重.预先在培养液中加入一定浓度VP、SOD、ATP、DEX后,与Sp损伤组相比,培养液中LDH水平下降,心肌细胞存活率升高,心肌超微结构损伤减轻.结论外源性精胺可造成培养乳鼠原代心肌细胞损伤,其机制可能与细胞内钙超载、自由基增加、能量障碍、炎症介质释放有关.     

COX-2信号通路参与高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大研究

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在高糖高胰岛素诱导的心肌肥大中的作用。方法用高糖高胰岛素刺激体外培养的乳鼠心肌细胞,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子(ANF)mRNA表达为心肌细胞肥大的反映指标,观察COX-2特异性抑制剂———赛来昔布对高糖高胰岛素致肥大作用的影响。利用real-time PCR检测细胞中mRNA的表达。结果高糖高胰岛素诱导细胞表面积、总蛋白含量以及ANF、COX-2 mRNA的表达增加(P<0.05);赛来昔布可以抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大(P<0.05),同时抑制COX-2的表达(P<0.05)。结论赛来昔布可以通过抑制COX-2的表达,从而对抗高糖高胰岛素诱导的心肌肥大。     

人参皂苷Rb1抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大

目的观察人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,Rb1)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响。方法利用培养的新生大鼠心肌细胞,以细胞直径、蛋白含量为心肌肥大标志,观察药物的抗心肌肥大效应。ANFmRNA的表达用Real-timePCR检测;用Fura-2/AM负载的培养心肌细胞检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)以探讨Rb1可能的作用机制。结果AngⅡ1×10-7mol.L-1使心肌细胞细胞直径明显增大,蛋白含量明显增加,心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)mRNA表达明显上调,并使细胞[Ca2+]i明显升高。Rb150、100和200μg/ml使经AngⅡ处理的心肌细胞直径分别缩短18.4%,32.7%和43.8%;心肌细胞蛋白含量分别减少8.4%、13.6%和17.2%;降低ANFmRNA的表达;Rb150、100和200μg/ml呈剂量依赖地抑制AngⅡ所致的[Ca2+]i升高,NO前体L-精氨酸L-arg10-3molμL-1具有相似的作用,NO合酶抑制剂L-NAME对Rb1的效应无明显影响。结论Rb1可抑制Ang...     

NF-кB/Ⅰ-кB在过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

目的探讨氧化应激损伤心肌细胞的分子机制.方法采用0.5 mmol/L过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞;末端标记检测细胞凋亡;Westernblot检测蛋白质含量;免疫组化检测NF-κB在细胞内的分布.结果①H2O2损伤3 h,心肌细胞死亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率均较对照组明显升高(P＜0.01);②H2O2损伤24 h,末端标记发现大量凋亡细胞;Westemblot示NF-κB内源性抑制蛋白I-KB(inhibitor KB,I-KB)在H2O2损伤5 min即减少,15 min时减至最低,而后逐渐恢复;免疫组化显示H2O2损伤0.5 h可引起心肌细胞中NF-κB从胞浆向胞核移位;与单纯损伤组比,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)能明显降低心肌细胞LDH释放率(P＜0.01).结论在H2O2所致心肌细胞损伤中,既有坏死,又有凋亡的发生,而NF-κB/I-κB信号通路的激活可能介导了H2O2所致的心肌细胞损伤.     

PI3K/Akt-NO信号通路在Ang Ⅳ诱导大鼠心肌肥大中的作用

目的研究PI3K/Akt-NO信号通路在血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法用乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大指标,观察不同浓度AngⅣ对心肌细胞的作用,并观察PI3K阻断剂LY294002和NO合成酶(NOS)抑制剂L-NAME对AngⅣ作用的影响;利用Real-time PCR和Western blot方法检测mR-NA及蛋白水平的表达;硝酸还原法和ELISA法分别检测NO和内皮型NOS(eNOS)含量。结果 AngⅣ浓度依赖地(0.01、0.1及1nmol/L)诱导心肌细胞肥大;使Akt mRNA和蛋白表达明显降低,eNOS mRNA表达以及细胞培养液中eNOS的含量减少,NO的释放下降(P<0.05);LY294002和L-NAME均使AngⅣ的作用加强(P<0.05)。结论 AngⅣ诱导的心肌肥大作用至少部分地与PI3K/Akt-NO信号通路被抑制有关。     

视神经萎缩症蛋白1通过抑制氧化应激减少高糖高脂诱导的心肌细胞凋亡

目的 研究高糖高脂对心肌细胞的影响及视神经萎缩症蛋白1(optical atrophy-1,OPA1)在其中的具体作用.方法 将高糖培养基培养的小鼠心肌细胞分为3组:高糖+0、200、400 μmol/L软脂酸钠组,并分别干预8h和16 h.采用siRNA敲低心肌OPA1表达,进一步将400 μmol/L软脂酸钠组分为对照组、OPAl siRNA干预组、Scra siRNA干预组、OPA1 siRNA+NAC干预组.通过流式细胞仪检测各组心肌细胞在不同时间点的凋亡水平,q-PCR法检测心肌细胞中OPA1mRNA的表达情况,DHE染色法与ELISA试剂盒测定心肌细胞中活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平.结果 心肌细胞凋亡水平随着软脂酸钠的浓度和干预时间逐渐增加(P＜0.05).与对照组相比,高脂干预明显抑制心肌细胞中OPA1的表达,同时显著地促进ROS生成(P＜0.05).通过OPA1 siRNA干扰OPA1的表达水平后,高脂诱导的心肌细胞凋亡与ROS生成进一步增加(P＜0.05);相反地,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)逆转了上述OPA1抑制所导致的心肌细胞凋亡.结论 高脂血症会进一步增加糖尿病心肌细胞的易损性,OPA1可以通过抑制氧化应激反应促进伴有高脂血症糖尿病条件下的心肌细胞存活.     

吡柔比星对大鼠心肌细胞的损伤作用及其模型建立

目的：探讨吡柔比星（THP）对大鼠心肌细胞的损伤作用,阐明THP诱导心肌细胞损伤模型的建立方法。方法：常规体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为空白对照组和不同浓度（1×10^-6 mol·L^-1、1×10^-5 mol·L^-1、1×10^-4 mol·L^-1、1×10^-3 mol·L^-1和1 μmol·L^-1、3 μmol·L^-1、5 μmol·L^-1、7 μmol·L^-1、9 μmol·L^-1和10 μmol·L^-1 THP组,采用不同浓度THP处理细胞,并在6、12、24、36和48 h时间点采用CCK-8法检测各组细胞存活率,DCFH-DA活性氧（ROS）探针法检测细胞中ROS水平,硫代巴比妥酸比色法检测各组细胞中丙二醛（MDA）水平,黄嘌呤氧化法检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性,二硝基苯肼显色法检测各组细胞中乳酸脱氢酶（LDH）活性,TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR法检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）和活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,1、5和9μmol·L^-1 THP组H9C2细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,细胞中ROS和MDA水平及LDH活性升高（P<0.05或P<0.01）,SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平降低（P<0.05）,Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论：THP对大鼠心肌细胞具有损伤作用,其中5 μmol·L^-1是THP诱导H9C2细胞损伤模型的最佳造模浓度。     

卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响

目的　观察卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响 .方法　采用培养的第 2代心肌细胞 ,随机分成 4组 :1正常对照组 :仅用 DMEM培养 ;2羟自由基组 :OH-终浓度为 10 - 4 m ol· L- 1 ;3卡托普利组 :卡托普利终浓度为 10 - 5mol· L- 1 ;4卡托普利 +羟自由基组 :卡托普利10 - 5mol· L- 1 +10 - 4 mol· L- 1 OH- .观察心肌细胞存活率和形态学 ,流式细胞仪双标法检测细胞凋亡率 .结果　 1羟自由基组心肌细胞存活率降低 ,和对照组比较有显著性差异(P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组细胞存活率较羟自由基组高 (P<0 .0 5 ) . 2 Annexin V+/PI- 细胞即凋亡细胞在羟自由基组有较高的发生率 ,明显高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组的细胞凋亡率显著低于羟自由基组 (P <0 .0 5 ) . 3羟自由基组凋亡心肌细胞呈特征性超微结构 .结论　卡托普利能减轻外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡