饮食脂肪对小鼠脑聚集长链多不饱和脂肪酸的影响

目的探讨高脂饮食状态下不同脂肪酸种类对脑聚集二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(AA)的影响。方法采用C57BL/6J雌性小鼠,在成年期和幼年期分别给予不同种类高脂饲料(18%脂肪,供能比为36%)喂养,分为高脂豆油饲料、高脂鱼油饲料和高脂豆油∶鱼油(5∶1)混合饲料组,以正常饲料(6%脂肪来自豆油,供能比为12%)为对照,时间为4个月。然后采用气相色谱法对小鼠脑组织脂肪酸进行测定。结果4组不同饲料对脑组织中DHA和AA水平的影响在成年期和幼年期小鼠之间无差异。与高脂豆油饲料组相比,高脂鱼油饲料组小鼠脑组织中DHA的含量无显著变化,但AA及其前体亚油酸(LA)含量均显著降低,导致DHA/AA比值升高;高脂豆油∶鱼油混合饲料组小鼠脑组织中DHA、AA及其前体LA含量均无显著变化,但DHA/AA比值升高。结论饮食中鱼油n-3脂肪的摄入增加不影响脑DHA水平,但减少了AA的聚集,使得DHA/AA比值升高。     

膳食多不饱和脂肪酸构成对小鼠淋巴细胞功能及脂肪酸构成的影响

目的观察膳食n-6/n-3PUFA比值对淋巴细胞脂肪酸构成和细胞功能的影响。方法48只BALB/c小鼠随机分为4组,即n-6/n-3比值分别为1,7.5,15,30;基础饲料采用AIN-93G配方,S:M:P为1:1.5:3.7。饲养12周。测定小鼠T淋巴细胞功能、IL-2水平和淋巴细胞脂肪酸构成。结果n-6/n-3比值接近1时,小鼠T淋巴细胞增殖活性及培养上清IL-2水平显著降低;淋巴细胞C18:3,C20:6,n-3PUFA中含量显著减少;淋巴细胞C22:6含量与淋巴细胞增殖活性显著负相关,C18:3,C20:5,C22:6含量与CD4 T淋巴细胞比例显著负相关;淋巴细胞脂肪酸构成的改变基本与膳食脂肪酸的改变基本一致。结论膳食S:M:P为1:1.5:3.7时,n-6/n-3比值为1时,小鼠T淋巴细胞增殖活性受到抑制,其作用可能与IL-2的降低有关;小鼠脾淋巴细胞的脂肪酸构成受膳食脂肪酸构成的影响。     

PMSG或FSH同期发情处理对小鼠卵巢、输卵管和子宫中孕激素受体分布的影响

目的探讨孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)和促卵泡激素(folliclestimulating hormone,FSH)同期发情处理的小鼠卵巢、输卵管和子宫中孕激素受体(progesterone receptor,PR)分布的差异。方法 10只8周龄KM系雌鼠,随机分为PMSG和FSH两个组,第一次处理后48 h取其卵巢、输卵管、子宫进行固定,免疫组织化学法观察各组织中PR的分布。结果两组小鼠卵巢、输卵管和子宫内膜中均有PR表达;其中PMSG组初级卵泡、次级卵泡和输卵管的阳性率均显著高于FSH处理组(P<0.05);PMSG组各级卵泡的平均吸光度值均显著高于FSH处理组(P<0.05);PMSG处理组子宫内膜上皮与腺上皮中的阳性率显著高于FSH组(P<0.05),而基质和子宫内膜上皮中的平均吸光度值显著低于FSH组(P<0.05)。结论 PMSG和FSH同期发情处理不同程度影响小鼠卵巢、输卵管和子宫中PR的表达分布;其中PMSG处理组小鼠卵巢、输卵管和子宫上皮中PR表达普遍显著高于FSH处理组。     

添加n-3PUFAs的饲料喂养孕期及哺乳期小鼠,对子代成年期小鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:观察给予母孕期及哺乳期小鼠添加不同含量n-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)饲料喂养,对成年期仔小鼠脑神经细胞凋亡的影响。方法:使用6-8周龄清洁级C57BL/6J雌性小鼠,随机分为5组,每组10只,分别给予小鼠缺乏n-3 PUFAs的饲料、n-6/n-3 PUFAs比值为15:1、5:1、1:1的饲料和高含量鱼油的n-3 PUFAs饲料(n-6/n-3 PUFAs比值为1:5)喂养。小鼠12-14周龄时进行雌雄合笼交配繁殖,仔小鼠断乳后继续行母小鼠相同饲料喂养,选取生后3 m成年仔小鼠用于实验。取小鼠脑进行组织固定,采用免疫组织化学技术对脑组织海马区神经细胞凋亡情况进行分析。结果:与缺乏n-3 PUFAs组小鼠相比,n-3 PUFAs饲料喂养组,尤其是n-6/n-3 PUFAs比值(5:1)和(1:1)组小鼠海马CA3区神经细胞抗凋亡蛋白Bcl2表达明显增加,而致凋亡蛋白Bax表达则显著降低。但高含量鱼油的n-3 PUFAs喂养组小鼠(即n-6/n-3 PUFAs 1:5组)与缺乏n-3 PUFAs组小鼠相比,未表现出显著性差异。结论:孕期及哺乳期小鼠饲料中添加n-3 PUFAs,尤其是n-6/n-3 PUFAs比值在5~1:1时有助于减少成年仔小鼠脑组织神经细胞凋亡的发生,而过高含量n-3 PUFAs摄入则未对小鼠脑凋亡发生起到促进作用。     

哈蟆油对免疫力低下小鼠体内脂肪酸含量的影响

目的：观察不同剂量哈蟆油水溶液对小鼠脾脏中脂肪酸含量的影响。方法：20只小鼠随机分为4组（高、低剂量组、模型对照组及正常对照组）,分别灌胃不同剂量哈蟆油水溶液及生理盐水,10d后,高、低剂量组及模型对照组深部X射线照射,造成免疫力低下模型,24h后,断头处死,取脾;皂化法提取脾中脂肪酸,气相色谱测定含量。结果：与模型组比较,高、低剂量组中的两种单不饱和脂肪酸n-7与模型组含量均有极显著性差异,n-3及n-6系脂肪酸与模型组有显著性差异。结论：在小鼠免疫力低下时,哈蟆油具有调节其免疫器官中脂肪酸含量的作用,从而提高其免疫功能。     

苓桂术甘汤对瘦素缺陷肥胖ob/ob小鼠卵巢SR-B1蛋白表达影响

目的观察苓桂术甘汤对瘦素缺陷肥胖ob/ob小鼠生殖功能的影响,探讨其作用机制是否与其干预卵巢SR-B1蛋白有关。方法选用雌性肥胖ob/ob小鼠24只,雌性野生型(WT)小鼠8只,实验分为WT组、ob/ob组、苓桂术甘汤大剂量组(LGZGH)、苓桂术甘汤小剂量组(LGZGL),灌胃给药4周。观察子宫和卵巢形态,称取子宫重量,计算子宫指数;采用HE染色法检测卵巢组织形态学改变;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织SR-B1蛋白表达。结果与WT组比较,ob/ob组小鼠子宫管腔狭窄,管壁变薄,弹性差;子宫重量和子宫重量指数减少(P0.01),卵巢组织结构破坏,可见卵泡闭锁,卵巢组织SR-B1蛋白表达降低;与ob/ob组比较,苓桂术甘汤小剂量组可以增加子宫重量和子宫重量指数(P0.01),苓桂术甘汤可以减轻卵巢组织结构的破坏,显著上调卵巢组织SR-B1蛋白表达。结论苓桂术甘汤可以部分改善瘦素缺陷肥胖ob/ob小鼠生殖功能障碍,作用机制可能与其调控卵巢组织SR-B1蛋白表达有关。     

自体卵巢冷冻后移植治疗卵巢早衰的实验研究

目的 研究卵巢早衰小鼠自体冷冻卵巢移植后移植卵巢的存活、生长及功能恢复情况.方法 将60只雌性昆明鼠分为化疗组、放疗组、化疗+移植组、放疗+移植组、正常组、去势组,每组10只.取出小鼠单侧卵巢经液氮冷冻后,利用环磷酰胺、白消安或60Coy照射处理小鼠,使其卵巢功能衰竭,随后将解冻后自体卵巢植入部分小鼠肾脏包膜下.观察冻融后卵巢组织学变化,移植后卵巢、子宫内膜组织学变化及雌二醇(E2)水平.结果 解冻后卵巢中卵泡的数量与新鲜卵巢相似,但卵泡体积变小,卵母胞与周嗣颗粒细胞之间的空隙增大.化疗、放疗组卵巢呈典型的早衰样组织学改变:表现为卵巢明显萎缩,卵泡闭锁,卵母细胞及透明带退行性改变,黄体及间质纤维化、坏死等.冷冻卵巢移植后,可见不同阶段的发育卵泡,并可见间质腺和黄体,移植组小鼠阴道上皮细胞及子宫内膜有雌激素效应.血清学结果显示,移植组血清E2水平[化疗+移植组(27.47±1.98)pg/L,放疗+移植组(25.89±2.78)Pg/L]明显高于未移植组[化疗组(16.88±2.06)]pg/L,放疗组(15.50±1.17)P孚/L,P<0.05],而与正常组[(30.93±4.05)pg/L]之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 卵巢早衰小鼠自体冷冻卵巢移植后能在异位存活、生长发育并具有内分泌功能.     

米非司酮对垂体移植诱发小鼠子宫腺肌症的影响

目的 :了解米非司酮 (RU486 )治疗对SHN系小鼠子宫腺肌症的影响。方法 :2 0只 7周龄未受过孕的雌性小鼠开腹行脑垂体子宫内移植手术 ,用来促使子宫腺肌症的发病。术后 17周 ,将 2 0只小鼠随机分为两组。治疗组投予含RU486 (2 0mg·kg-1)的饲料 ,对照组给予不含RU486的相同饲料。 4周后处死小鼠 ,取出子宫和卵巢称重 ,计数子宫表面突出的腺肌症结节。结果 :治疗组和对照组相比 ,子宫较细、颜色较浅。子宫湿重治疗组明显低于对照组。治疗组和对照组各有 8只小鼠子宫表面可见突出的腺肌症结节 ,结节发生率两组比较 ,差异无显著性 ,但治疗组的结节数量明显少于对照组。显微镜检查证实 ,子宫表面的突出结节均为子宫腺肌症。治疗组子宫内膜间质细胞致密化 ,腺肌症组织的腺体分泌明显受到抑制。腺肌症发生率两组相同 (8/ 10比 8/ 10 )。结论 :RU486治疗 4周虽不能治愈小鼠子宫腺肌症 ,但可以缩小子宫和腺肌症病灶 ,减轻病变程度     

花生四烯酸人皮肤炎症模型

目的建立花生四烯(arachidonic acid,AA)人体皮肤炎症模型。方法在12名健康志愿者前臂屈侧做0.16%AA、0.8%AA、4%AA、20%AA、100%AA浓度的点刺试验,分别记录其30min红斑面积、风团面积。并在其服用咪唑斯汀后1h进行AA点刺试验,记录点刺试验30min后的红斑面积和风团面积。结果炎症模型中以20%AA产生的红斑、风团表现较为稳定,且服用咪唑斯汀前与服用后1h红斑面积及风团面积变化显著(P<0.01)。结论通过点刺试验可建立稳定的AA人体皮肤炎症模型。     

不同浓度气态甲醛慢性染毒对小鼠卵泡发育影响的研究

目的:研究不同浓度气态甲醛慢性染毒对小鼠卵泡发育的影响,探讨环境污染导致卵巢性不孕的相关因素。方法:将40只性成熟SPF级雌性昆明小鼠随机分为空白对照组和3个不同浓度(0.1mg/m3、1.0mg/m3、10mg/m3)气态甲醛染毒组(模型组),每组10只。模型组采用不同浓度气态甲醛动态吸入式染毒,6h/d,连续14d,对照组给予吸入过滤的新鲜空气,时间同前。造模成功后处死小鼠,取出卵巢,计算卵巢脏器系数,光学显微镜下观察卵巢组织形态学改变,计数始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡、排卵前卵泡和闭锁卵泡数。结果:不同浓度气态甲醛慢性染毒均可使小鼠一般状况差,动情周期延长且不规则,卵巢脏器系数降低。各染毒组闭锁卵泡数量增多,中、高浓度染毒组窦前卵泡、窦状卵泡和排卵前卵泡数明显减少,各组间始基卵泡和总卵泡数无明显差异。结论:不同浓度气态甲醛慢性染毒均可影响小鼠发育期卵泡,中、高浓度染毒可导致卵泡不可逆的损害,发育期卵泡数量明显减少。环境污染会诱发不孕症的发生。     

育泡饮对小鼠自身免疫性卵巢损伤保护作用的实验研究

目的探讨中药复方育泡饮对实验性自身免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵巢功能的影响。方法以成熟的SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点注射免疫BALB/C雌性小鼠,建立卵巢早衰模型。在3次免疫后连续灌服中药复方,以强的松为阳性对照,酶联免疫法检测外周血雌二醇水平(E2)、卵泡刺激素(FSH)、外周血抗卵巢抗体(AoAb),IL-4、IL-10,观察卵巢的形态学变化,并计数各级卵泡及黄体数目。结果POF小鼠外周血E2下降,FSH升高,AoAb阳性,IL-4、IL-10明显提高,卵巢内有大量淋巴细胞浸润,各级卵泡及黄体数目减少。育泡饮能提高体内E2水平,减缓POF小鼠外周血FSH升高,抑制AoAb产生,降低IL-4与IL-10水平,减轻卵巢内淋巴细胞浸润,使各级卵泡及黄体数增加,育泡饮高剂量组比中剂量、低剂量组作用显著。结论育泡饮能减轻卵巢自身免疫性炎症损伤,对自身免疫性卵巢早衰具有治疗作用。     

Increased Oocyte Production after Acupuncture Treatment during Superovulation Process in Mice

Objective To investigate whether acupuncture treatment during superovulation process improves ovarian response and increases egg production. Methods ICR female mice aged 12 -5 weeks were divided into control group, anaesthesia group and acupuncture group. Female mice were injected intraperitoneally with pregnant mare＇s serum gonadotropin （PMSG）, followed by human chorionic gonadotropin （hCG） injection 56 h later. Anaesthesia group and acupuncture group were anaesthetized three times by injecting 10% nembutal solution according to 7.5-10.0μl/g weight. Acupuncture group was treated three times with puncture Sanyinjiao Points（SP6） under anaesthesia. After 17 h of hCG injection, eggs were recovered and ovaries were isolated. Matured eggs were counted, ovarian histology and expression of follicle stimulating hormone receptor（FSH-R） in ovary were analyzed. Results Acupuncture treatment statistically increased the number of ovulated eggs. Histological section showed that some matured follicles left in the ovaries of control and anaesthesia groups after ovulation. On the contrary, all matured follicles ruptured and converted into corpus lutea in Acupuncture group. Expression of FSH-R in ovary was decreased in acupuncture group compared with those of the two others. Conclusion Acupuncture treatment during superovulation process improves ovarian response so as to increase egg production. The positive effect of acupuncture may be associated with regulated FSH-R expression.     

利用不同浓度D(+)半乳糖建立卵巢早衰动物模型

目的:评价不同浓度半乳糖代谢建立小鼠卵巢早衰模型的方法及其可行性。方法:选择8-12周龄SPF级昆明小鼠60只,分为高浓度实验组,低浓度实验组,正常对照组,各20只,给予35%、28%半乳糖食物丸和标准食物丸。在饲养的第70天,取血检测小鼠体内半乳糖、E2、FSH、总蛋白、清蛋白水平,并行促排卵检查卵巢功能,光镜观察卵巢和肝组织形态学变化。结果:与对照组及低浓度实验组相比,高浓度实验组卵巢重量显著降低(P<0.001);光镜下,高浓度实验组小鼠肝组织呈变性、坏死,卵巢组织可见大量初级卵泡,但生长卵泡和黄体数量减少;血清总蛋白和清蛋白浓度下降,血清半乳糖、FSH水平明显高于对照组(P均<0.001),E2水平明显低于对照组(P<0.001),促排卵后检查小鼠输卵管中成熟卵母细胞数目,明显低于对照组(P<0.001)。结论:利用35%半乳糖代谢作用建立卵巢早衰动物模型是可行的,可为解决卵巢早衰患者生育问题提供研究之手段。     

卵巢胰岛素抵抗对卵巢糖代谢及功能影响的实验研究

目的 探讨卵巢内胰岛素信号分子缺失对卵巢自身功能影响,为阐明卵巢局部胰岛素抵抗对生殖功能作用提供理论支撑.方法 (1)分别选择蛋白激酶B2(AKT2)基因缺失的(AKT2-)和其同窝出生的有完整AKT2基因(AKT2+)的雌性小鼠评估卵巢糖摄取情况,并进行卵巢交互移植,构建AKT2基因型组合个体分别为A组(躯体+,卵巢+)12只,B组(躯体+,卵巢-)15只,C组(躯体-,卵巢+)8只.(2)监测动情周期,随机分组,对刺激组小鼠采用卵泡刺激素(0.75 IU/g)进行干预后取材.评估各组小鼠卵巢组织形态与生殖激素指标,并且采用RT-PCR检测卵巢内ERK-1胰岛素信号分子和甾体激素合成酶的表达.结果 (1)AKT2-卵巢的葡萄糖摄取能力显著下降.(2)B组动情周期显著延长,卵巢内黄体数量明显减少,而卵泡的数量明显增多,同时17-OH和T的水平显著升高.(3)基础状态下,B组卵巢内ERK-1和CYP17的表达明显增强.刺激状态下,B组卵巢内ERK-1、CYP17、CYP19和GSK3β均显著升高.结论 (1)AKT2-小鼠卵巢存在胰岛素抵抗,出现动情周期延长,卵巢多囊性改变和雄激素及其合成酶水平增高,类似PCOS表现.(2)卵巢局部胰岛素抵抗使卵巢自身糖代谢异常,细胞分裂增殖功能亢进,卵巢对促性腺激素反应性增高,卵巢功能放大,可能是PCOS发病的关键因素.     

GnRH拮抗剂和激动剂联合应用对环磷酰胺化疗中卵巢功能保护的实验研究

目的：探讨GnRH拮抗剂（GnRH-ant）与激动剂（GnRH-a）联合应用对环磷酰胺（CTX）化疗中卵巢功能保护作用。方法：选取36只8～9周成年雌性Balb/c小鼠,随机分为对照组、CTX组、GnRH-ant＋GnRH-a组和GnRH-ant＋GnRH-a＋CTX组,每组各9只。用药后比较各组小鼠体重、子宫和卵巢湿重、各级卵泡数量的变化,以及促卵泡生成素（FSH）、雌二醇（E2）水平。结果：与GnRH-ant＋GnRH-a＋CTX组比较,CTX组小鼠子宫及卵巢湿重显著减轻,卵泡总数减少,血清E2浓度下降及FSH浓度升高,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论：GnRH-ant和GnRH-a联合应用对环磷酰胺化疗诱导的小鼠卵巢损伤具有一定的保护作用。     

哈蟆油胶囊对衰老模型小鼠生殖器官的保护作用

目的 以D-半乳糖所致雌性衰老模型小鼠为实验对象,观察哈蟆油胶囊(OR)对其生殖器官的保护作用.方法 采用雌性昆明小鼠48只,随机分为OR高、低剂量组和阳性药对照组、模型对照组,每组12只.D-半乳糖颈背部皮下注射6周.另设一组12只,同样部位每日注射生理盐水,作为正常对照组.第3周开始灌胃给药,模型对照组和正常对照组灌胃植物油.最后2周逐只进行阴道脱落细胞涂片,使用瑞氏-姬姆萨染液染色后观察其阴道角化细胞变化,计数动情期天数.给药结束后收集标本,采用放免法测定血清雌二醇水平,测定卵巢和子宫指数,观察卵巢和子宫病理变化,检测卵巢子官中SOD以及MDA的水平.结果 OR明显提高老年小鼠体内雌激素水平,延长小鼠动情期:增加其卵巢和子宫指数,改善卵巢和子宫的病理改变,降低卵巢子宫中MDA含量,提高其SOD活力.结论 OR能够延缓雌性小鼠生殖衰老,增强生殖器官抗氧化作用,从而改善其萎缩和衰老程度.     

雌孕激素替代治疗雷公藤多甙致雌性大鼠生殖系统损害的实验研究

目的通过雌、孕激素序贯性（HPT）干预治疗，探讨雌孕激素对雷公藤多甙（TWP）所致大鼠生殖系统损害的保护作用及卵巢早衰（POF）的防治方法。方法选择30只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、自然恢复组（B组）及雌孕激素干预组（C组），前12周B组、C组每天均给予TWP灌胃，A组给予等量溶媒；后4周C组给予HPT治疗，A、B组给予等量溶媒。为期16周。分别观察3组大鼠动情周期，生殖器官质量及组织形态学变化，性激素水平改变。结果与A组相比：B组大多动情周期缺失、不完整或延长；子宫及卵巢质量明显下降（P〈0．05），结构受损。血清雌激素（E2）水平明显降低，、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平则明显升高（P〈0．05）。而C组动情周期规律；子宫、卵巢的质量无下降（P〉0．05）；子宫各结构未见异常，E2、FSH及LH水平无明显改变（P〉0．05）。结论TWP可致雌性大鼠生殖系统的损害，HPT对卵巢功能有较好的保护作用，可促进所致损害的恢复，是防治TWP所致POF的有效方法之一。     

“痰湿型”不孕症的病因病机及其生物学基础研究

目的通过对db/db小鼠生殖功能障碍的基础研究,探讨中医"痰湿型"不孕症的病因病机——"痰瘀胞宫"的现代生物学基础,证明其理论的正确性。方法①雌性B6.Cg-m+/+Leprdb小鼠和其同窝出生的雌性野生型C57BL/6J小鼠于12周龄进行卵巢交互移植,构建实验小鼠的LR基因型组合分别为A组(躯体LR+,卵巢LR-,n=10)、B组(躯体LR+,卵巢LR+,n=5)、C组(躯体LR-,卵巢LR+,n=5)、D组(躯体LR-,卵巢LR-,n=5)共4组。②术后恢复两周,进行阴道脱落细胞涂片,连续观察两个周期。③取材,检测全身糖脂代谢指标和生殖激素水平,HE染色法检测卵巢、子宫组织形态学变化。结果①C、D组与A、B组比较,其体重增加约1倍(P0.01),性腺周围脂肪垫重量增加约10倍(P0.01),血清葡萄糖、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和胰岛素水平增加2～3倍(P0.01)。②阴道细胞涂片发现,A、B组小鼠均出现正常的动情周期,而C、D组则始终处于动情间期;C、D组与A、B组比较,卵巢重量及E2、P、FSH、LH水平显著下降(P0.05)。HE染色可见A、B组小鼠的卵巢及子宫组织形态正常,而C、D组小鼠的卵巢及子宫均萎缩变小。结论 db小鼠生殖功能障碍主要是高糖脂血症累及生殖器官导致其脂质化所引起,"痰湿型"不孕症的中医病因病机为"痰瘀胞宫",其生物学基础是糖脂代谢异常。