豚鼠气道及肺组织原癌基因表达与哮喘的相关研究

目的:为研究原癌基因在哮喘发病中的作用.方法:以卵白蛋白致敏豚鼠建立哮喘模型,用Dot-blot,Northern-blot分子杂交及免疫组化技术,分别观察正常及哮喘发作后豚鼠气道上皮及肺组织中原癌基因c-fos,c-myc的表达水平.结果:正常豚鼠气     

豚鼠哮喘模型气道中炎症细胞浸润与c—jun表达相关性研究

探讨豚鼠哮喘模型气道中炎症细胞的浸润和活化与原癌基因ｃ－ｊｕｎ表达的关系。应用免疫组织化学技术和肺的组织学检查方法，观察豚鼠哮喘模型致敏原激发后，４，１２，２４ｈ气道中炎症细胞的浸润及炎症细胞内ｃ－ｊｕｎ表达情况。     

诱导型一氧化氮合酶在哮喘大鼠肺组织的表达

目的　观察哮喘大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)活性的表达 ,探讨一氧化氮在哮喘大鼠气道炎症中的作用。方法　用卵白蛋白作为致敏原制备哮喘大鼠模型 ,用 SP免疫组化染色方法检测肺组织 i NOS的表达并观察 i NOS在气道组织分布的改变。结果　哮喘大鼠肺组织 i NOS的表达阳性率 (90 % )明显高于正常对照组 (2 0 % ) (P<0 .0 0 1)。哮喘大鼠气道组织 i NOS表达阳性细胞主要位于气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、血管内皮和平滑肌细胞、浸润的中性粒细胞和巨噬细胞 ,而淋巴细胞表达不明显。用甲基强的松龙处理后哮喘大鼠肺组织i NOS表达阳性率 (30 % )明显降低。结论　以上结果提示一氧化氮在哮喘气道炎症中起重要作用 ,用甲基强的松龙治疗哮喘可以使哮喘大鼠肺组织中 i NOS表达阳性率降低 ,提示哮喘时产生过多的一氧化氮可能有加重气道炎症的作用     

黄芪对过敏性哮喘豚鼠核因子-κB表达的影响

目的:探讨黄芪对过敏性豚鼠哮喘模型中核因子-κB(nuclear factor-kappa B , NF-κB)表达的影响.方法:将30只豚鼠随机分为3组(正常组、哮喘组、治疗组),每10只.用10%卵清蛋白(OVA)溶液1 ml腹腔注射致敏,2周后哮喘组及治疗组用1%OVA溶液超声雾化吸入致其哮喘发作,1次/d,共2周;正常组则喷入生理盐水.治疗组每次诱喘后给予腹腔注射黄芪注射液5 g/kg,1次/d,共2周.然后分别测定3组肺功能并观察气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况;用免疫组织化学染色方法观察NF-κB在豚鼠肺组织中的表达变化.结果:NF-кB主要表达在气道壁内的细胞中,3组胞核阳性的细胞数占气道上皮细胞数百分比分别为(14.3±2.6)%、(32.5±5.8)%和(20.4±3.3)%.哮喘组NF-кB胞核阳性的细胞比例显著高于正常组(P<0.01),治疗组NF-кB胞核阳性的细胞比例显著低于哮喘组(P<0.01).结论:黄芪能显著抑制过敏性哮喘豚鼠气道壁内细胞NF-κB的表达,提示黄芪抑制NF-κB的表达可能是黄芪治疗哮喘的作用机制之一.     

哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1的表达与气道炎症关系的研究

目的研究哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1(STAT1)的表达及动态变化,探讨STAT1蛋白与哮喘气道炎症的相关性及地塞米松的影响.方法 48只豚鼠随机分为6组,卵白蛋白腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作,在激发后0 h、24 h、72 h、5 d,以及地塞米松治疗后第5 d,测定哮喘豚鼠支气管粘膜周围肺组织嗜酸粒细胞(EOS)浸润与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞数量, 酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中γ-干扰素浓度,免疫组化测定哮喘豚鼠气道上皮细胞中STAT1表达.结果豚鼠在诱喘后各个时相(0 h、24 h 、72 h及5 d) BALF中嗜酸粒细胞的变化与支气管粘膜肺组织EOS浸润密度正相关(r=0.815,P＜0.001).气道上皮细胞中STAT1表达与支气管粘膜周围肺组织EOS浸润及BALF中EOS数量均呈正相关(r=0.752,P＜0.001; r=0.692,P＜0.01) .地塞米松能抑制上皮细胞STAT1表达(5 d与治疗组相比,P＜0.01).BALF中γ-干扰素浓度与气道上皮细胞STAT1表达呈负相关(r=-0.499,P＜0.05).结论支气管哮喘存在支气管上皮细胞STAT1的持续活化及过度表达,并与嗜酸粒细胞聚集增多有密切关系.     

黄芪对过敏性哮喘豚鼠核因子—kB表达的影响

目的 :探讨黄芪对过敏性豚鼠哮喘模型中核因子 - κB(nuclear factor- kappa B,NF- κB)表达的影响。方法 :将 30只豚鼠随机分为 3组 (正常组、哮喘组、治疗组 ) ,每 10只。用 10 %卵清蛋白 (OVA)溶液 1ml腹腔注射致敏 ,2周后哮喘组及治疗组用 1% OVA溶液超声雾化吸入致其哮喘发作 ,1次 / d,共 2周 ;正常组则喷入生理盐水。治疗组每次诱喘后给予腹腔注射黄芪注射液 5 g/ kg,1次 / d,共 2周。然后分别测定 3组肺功能并观察气道壁嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润情况 ;用免疫组织化学染色方法观察 NF- κB在豚鼠肺组织中的表达变化。结果 :NF- к B主要表达在气道壁内的细胞中 ,3组胞核阳性的细胞数占气道上皮细胞数百分比分别为 (14 .3± 2 .6 ) %、(32 .5± 5 .8) %和 (2 0 .4± 3.3) %。哮喘组 NF- к B胞核阳性的细胞比例显著高于正常组 (P <0 .0 1) ,治疗组 NF- к B胞核阳性的细胞比例显著低于哮喘组 (P <0 .0 1)。结论 :黄芪能显著抑制过敏性哮喘豚鼠气道壁内细胞 NF- κB的表达 ,提示黄芪抑制 NF- κB的表达可能是黄芪治疗哮喘的作用机制之一     

银杏叶提取物对哮喘豚鼠气道上皮E-钙黏素的影响

目的研究银杏叶提取物（GBE）对哮喘豚鼠气道上皮E-钙黏素（E-cadherin）水平的影响，以探讨银杏叶提取物治疗哮喘的机制。方法将32只豚鼠随机分成正常对照组（A组）、哮喘未治疗组（B组）、哮喘地塞米松治疗组（C组）、哮喘GBE治疗组（D组）。通过苏木精-伊红染色观察气道壁嗜酸性粒细胞（EOS）浸润情况，利用免疫组织化学检测气道上皮的E-钙黏素蛋白水平，利用Western blot检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中可溶性E-钙黏素胞外段的水平，利用RT-PCR检测气道上皮细胞内E-钙黏素mRNA水平。结果C组、D组气道上皮的E-钙黏素水平明显高于A组，低于B组；C组、D组气道壁EOS计数及BALF中E-钙黏素胞外段的水平则显著高于A组，低于B组；各组上皮细胞内E-钙黏素mRNA水平无显著性差异。结论GBE可抑制气道上皮E-钙黏素的胞外段裂解、脱落，从而维持E-钙黏素水平，保护上皮细胞的屏障功能，减轻气道炎症。这很可能是GBE治疗哮喘的机制之一。     

哮喘平冲剂对哮喘豚鼠模型肺组织形态学的影响

目的:探讨哮喘平冲剂对哮喘豚鼠模型肺组织的形态学影响。方法:采用卵蛋白致敏哮喘豚鼠模型,观察实验过程中哮喘豚鼠的一般情况及肺组织形态学变化。结果:各治疗组豚鼠的一般情况明显优于模型组,且经哮喘平冲剂治疗后哮喘豚鼠气道炎症细胞明显减少;支气管平滑肌未肥厚;哮喘平冲剂能明显改善支气管上皮损伤,粘液腺增生等病理改变。结论:哮喘平冲剂治疗哮喘的作用机理与改善肺组织形态学变化有关。     

YKL-40在哮喘小鼠外周血、肺泡灌洗液、气道上皮中的表达及其与气道嗜酸性粒细胞炎症的关系

目的:探讨YKL-40在哮喘小鼠外周血、肺泡灌洗液以及气道上皮中的表达及其与气道嗜酸性粒细胞炎症的关系。方法:以卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立BALB/C小鼠哮喘模型,对照组以同等剂量的生理盐水代替OVA。造模成功后留取小鼠外周血、肺泡灌洗液、肺组织,HE染色观察肺组织嗜酸性粒细胞浸润情况,免疫组化法观察气道上皮YKL-40的表达,ELISA法定量检测外周血、肺泡灌洗液中YKL-40浓度。结果:(1)哮喘组气道周围有明显的嗜酸性粒细胞浸润,气道上皮杯状细胞增生肥大,并有大量黏液分泌。对照组气道未见明显炎症细胞浸润及粘液高分泌。(2)哮喘组外周血和BALF中YKL-40均明显高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。哮喘组外周血和BALF中Eos数均明显高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。(3)哮喘组气道上皮细胞胞浆中可见YKL-40表达,而对照组未见明显YKL-40表达。结论:(1)哮喘组小鼠外周血、肺泡灌洗液中YKL-40的表达均高于对照组,提示YKL-40可以作为哮喘诊断指标之一。(2)肺泡灌洗液中YKL-40浓度明显高于血液YKL-40浓度,结合免疫组化气道上皮YKL-40的表达,提示哮喘状态下YKL-40主要来源于气道上皮。(3)YKL-40表达水平与Eos数变化趋势一致,提示YKL-40水平可在一定程度上反映气道嗜酸性粒细胞炎症情况。     

组蛋白去甲基化酶KDM2A在支气管哮喘大鼠气道炎症和气道重塑中的作用

目的 研究组蛋白去甲基化酶—赖氨酸特异性的去甲基化酶2A(KDM2A)在支气管哮喘大鼠气道炎症及气道重塑中的作用。方法 通过腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)致敏雾化激发哮喘大鼠模型。将18只6～8周龄SPF级SD雌性大鼠随机分为3组：对照组、哮喘4周组、哮喘8周组。哮喘模型成功后,通过HE染色观察肺组织气管及血管周围炎性细胞浸润;PAS染色观察杯状细胞增生及黏液分泌;Masson染色观察气道壁纤维化;荧光免疫组织化学法观察气道平滑肌增殖情况;Western blot法检测KDM2A蛋白表达水平。结果 哮喘4周组、哮喘8周组大鼠炎症评分、炎症细胞计数均高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,哮喘组气道上皮中杯状细胞增生和黏液分泌、肺组织中胶原纤维沉积及气道平滑肌细胞增生均增加(P<0.01),随着OVA致敏时间延长,哮喘8周组较哮喘4周组气道炎症及气道重塑改变更严重。Western blot结果显示,哮喘4周组、哮喘8周组大鼠肺组织KDM2A表达高于对照组,哮喘8周组KDM2A表达亦高于哮喘4周组,差异均有统计学意义(P<0.01);各组大鼠肺组织KDM2A蛋白表达与气道...     

Proto-oncogenes expression in the process of asthma airway remodeling

Objective: To observe the expression of proto-oncogenes in the process of airway remodeling in asthma. Methods: Guinea pig was used as an asthma model challenged by ovoglobulin. Dot-blot, Northern-blot molecular hybridization and immunohistochemistry techniques were used to detect the expression of c-fos, c-myc, c-jun and c-sis. Results: Expression of c-fos and c-myc mRNA could not be detected or detected at very low level in the control group. There were greatly increased expression of c-fos and c-myc mRNA after guinea pigs were challenged by ovoglobulin. Thirty minutes after the challenge, the expression of c-fos and c-myc mRNA reached to the peak and returned to normal level 4 h after the challenge. Immunohistochemistry studies showed that Fos, Myc, Jun and Sis expressed at low level in control group and increased after ovoglobulin stimulation. Immunohistochemically positive cells laid in the plasma of airway epithelium, in cell nucleus of bronchial epithelium and in the inflammatory cells. Pathologic     

Ras-MAPK信号转导系统在哮喘气道重塑中的作用

目的 探讨Ras-MAPK信号转导系统在哮喘气道重塑中的作用。方法 以卵蛋白诱导并激发的豚鼠哮喘模型为研究对象，选择末次诱喘后即刻至240min间数个时间点，采用Dot-blot分子杂交法检测气道ras mRNA水平。免疫组化ABC研究气道Ras和MAPK蛋白的表达情况。结果 与正常对照组相比，哮喘组豚鼠气道上皮水肿、脱落，平滑肌层及基底膜显著增厚。诱喘后ras mRNA的表达水平明显上调，30min达高峰并维持至120min。各级气道的上皮和平滑肌细胞Ras表达量显著增加，而MAPK只在气道平滑肌层呈现高表达现象。结论 Ras-MAPK信号转导系统在哮喘气道重塑早期发挥重要作用，阻断这一途径有望延缓重塑的病理过程。     

致敏豚鼠气道及肺组织c—myc基因的表达与哮喘发病的关系

研究原癌基因在哮喘发病中的作用。方法以卵蛋白致敏诱发豚鼠哮喘建立实验模型。用分子杂交技术分别观察正常及哮喘发作后ｃ－ｍｙｃ在豚鼠气道及肺组织中的表达水平。结果：原癌基因ｃ－ｍｙｃ在豚鼠哮喘发作后即刻表达增强，且呈时间依赖关系，并可被糖皮质激素部分抑制。     

8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤细胞系癌基因和抑癌基因作用的研究

目的 :为探讨 8 Br cAMP对人视网膜母细胞瘤之HXO Rb44细胞系的生长作用机理 ,我们观察了 8 Br cAMP对该细胞的癌基因和抑癌基因表达的体外效应。方法 :将体外培养的HXO Rb44细胞系等分为两组 ,一组为加 2× 10 5mol/L 8 Br cAMP的实验组 (EG) ,另一组为不加 8 Br cAMP的对照组 (CG)。将两组的细胞悬液滴于硝酸纤维素膜 (NCM) ,应用完整细胞RNA斑点印迹和蛋白质斑点印迹免疫组化技术分别检测c fos ,N mycp2 1ras ,野生型 (w)p5 3 ,突变型 (m)p5 3 ,Rb ,p16的mRNA和PCNA的蛋白表达。结果 :wp5 3 ,Rb ,p16及p2 1waf1的mRNA信号为EG >CG(P <0 0 5～ 0 0 1) ;c fos ,N myc ,p2 1ras的mRNA信号和PCNA IR则为EG 相似文献   

二甲双胍抑制哮喘模型大鼠气道重塑的研究

目的观察二甲双胍对哮喘气道重塑的影响及其可能作用机制。方法 28只B/N大鼠随机分为对照组、哮喘组、二甲双胍干预组和雷帕霉素干预组;制备哮喘模型,以二甲双胍、雷帕霉素进行干预;末次激发48小时后测定大鼠气道阻力及气道反应性,收集肺组织标本,采用组织病理学方法观察气道炎症细胞浸润、气道壁杯状细胞增生、气道壁纤维化和重塑情况以及气道平滑肌增殖情况,采用蛋白印迹法检测AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。结果与哮喘组相比,二甲双胍和雷帕霉素干预可显著降低乙酰胆碱气道反应性(P<0.05);减轻大鼠肺组织中炎细胞浸润以及气道壁结构的变化(P<0.05);减少气道上皮中杯状细胞增生、肺组织中胶原纤维沉积、支气管平滑肌增生(均P<0.05)。进一步研究发现,二甲双胍和雷帕霉素的作用与AMPK/mTOR通路相关,与哮喘组相比,二甲双胍和雷帕霉素干预可显著降低p-mTOR、p-p70s6k1、SKP2的表达,而p21蛋白表达明显增加(P<0.05)。两种干预措施具有相似效应(P>0.05)。结论二甲双胍可以通过激活AMPK、进而抑制mTOR通路来缓解气道高反应性和气道重塑,可能是治疗哮喘和预防气道重塑的潜在药物。     

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖

目的 观察反义c-myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌增殖的抑制作用。方法 大鼠气道平滑肌细胞原代培养，4－12代用于实验。利用Lipofectin将正义、反义及错配c-myc寡核苷酸导入大鼠气道平滑肌细胞，MTT法检测不同寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用，RT－PCR检测c-myc mRNA的表达，免疫组织化学染色检测c-myc蛋白的表达。结果 反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖，且这种抑制作用呈浓度依赖性；反义c-myc寡核苷酸可降低c-myc mRNA的表达，同时降低了c-myc mRNA的翻译。结论 反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌的增殖。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c－fos，c－myc异常表达的实验研究

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程中原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达。结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ数目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成；胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均存在着剂量－效应关系。这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生、发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ增殖而实现的。这也许是某些基因治疗ＡＳ的基础。     

银杏苦内酯B对哮喘豚鼠气道反应性和嗜酸性粒细胞的影响

作利用豚鼠哮喘模型观察豚鼠吸入卵蛋白（ＯＡ）或血小板激活因子（ＰＡＦ）后引起的气道反应，血浆和支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中溶血－ＰＡＦ（Ｌｙｓｏ－ＰＡＦ）含量和肺组织中嗜酸性粒细胞（Ｅ０）改变，及ＰＡＦ拮抗剂银杏苦内酯Ｂ（ＧＢ）的影响。结果提示致敏豚鼠ＯＡ激发和正常豚鼠ＰＡＦ激发后，与对照组相比，豚鼠血浆和ＢＡＬＦ中Ｌｙｓｏ－ＰＡＦ含量增高（Ｐ〈０．０１），肺组织中Ｅ０数增多（Ｐ〈０．０１），     

哮喘大鼠模型肺组织平滑肌肌动蛋白-αmRNA的表达

目的　探讨平滑肌肌动蛋白 (SMA) -α m RNA的表达 ,以了解其在哮喘发病机制中的作用。方法　以卵蛋白雾化复制哮喘模型 ,在激发后 3d、1周及 2周用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)检测肺部α- SMA m RNA表达 ,同时用图象分析法测量大鼠气道形态学参数。结果　大鼠哮喘激发后 2周开始出现气道平滑肌肌层增厚 ,而α-SMA m RNA在哮喘激发 1周表达升高 ,2周后更加明显 ,α- SMA m RNA表达与气道平滑肌肌层增厚具有一定相关性。结论　哮喘气道重构中既有气道平滑肌的增生肥大 ,又可能有平滑肌表型改变     

反义c-myc重组腺病毒载体的构建及其对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:观察反义c-myc重组腺病毒载体对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用. 方法:构建大鼠反义及正义c-myc细菌质粒,并将所得细菌质粒及腺病毒E1缺失质粒导入293细胞系,经共转染得到正义及反义重组腺病毒载体. MTT法检测重组腺病毒载体对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用,免疫组织化学染色检测重组腺病毒载体对c-Myc蛋白的表达. 结果:反义c-myc重组腺病毒载体可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖,降低气道平滑肌细胞c-Myc蛋白的表达. 结论:反义c-myc重组腺病毒载体可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖.