PML—RARa融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲａ）肯定了２例与急淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ，１５例缓在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型，８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此     

急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因异构体的临床意义

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因异构体及其临床关系。方法：用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测２１例初诊ＡＰＬ患者细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因转录本，并分析其对临床特征的可能不同影响。结果：在ＡＴＲＡ诱导治疗过程中，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体ＡＰＬ组的早期死亡和复发率（４／８）（５０％）高于长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组（２／１３）（１５．４％）；与长型异构体相反，存活期２月至２年患者含短型异构体的比例（７５％）大于存活期２年以上组（３３．３％）；未观察到患者血液学参数改变与不同ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体有关。结论：与长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组ＡＰＬ患者相比，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组的预后可能更差。     

急性早幼粒细胞白血病分化疗法中PML—RARα融合基因的变化及意义

目的研究ＰＭＬ－ＲＡＲα基因测定在急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）诊治中的临床意义。方法７４例ＡＰＬ患者，其中初诊４４例；完全缓解后３０例。运用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）方法对ＡＰＬ患者进行融合基因测定。结果（１）４４例初诊ＡＰＬ患者ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因测定全部阳性，并有Ｌ与Ｓ两种亚型，Ｌ型占５６．８％，Ｓ型占４３．２％，Ｓ型患者预后比Ｌ型的要差；（２）其中１５例在缓解后（化疗和维甲酸交替）治疗中定期测定的结果，阳性率完全缓解６个月４６．７％，１２个月３３．３％，１８个月３０．８％，２４个月２６．７％，３０个月２７．３％，３６个月１１．１％，４８个月８．３％；（３）对完全缓解后长期存活的３０例测定结果，２例在５９个月和６０个月转为阳性以后均复发；１例持续阳性但血象与骨髓象无复发依据；另１例连续３年检查均为阴性，到５９个月时脊髓浸润复发但仍为阴性。其他２６例均持续阴性完全缓解，完全缓解期中位数６６（４７～１１４）个月。结论本测定对ＡＰＬ的诊断、预后评估以及复发的预报有重要的临床意义。     

NB4细胞PML—RARα融合基因表达对维甲酸诱导分化作用的影响

目的研究急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞ＰＭＬ－ＲＡＲα（早幼粒细胞白血病基因－维甲酸受体基因α）融合基因的表达对维甲酸诱导分化作用的影响，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因与维甲酸治疗作用间的关系。方法用反义核酸来阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达并用逆转录－聚合酶链式反应检测。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能。通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ（硝基四氮唑蓝）还原试验进行判定，细胞周期应用流式细胞仪进行分析。结果反义核酸阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα表达后使维甲酸对ＮＢ４细胞的生长抑制作用增强，Ｓ期细胞由５２％降至２９％，同时ＮＢＴ还原能力提高，细胞表面标志变化明显，提示对维甲酸敏感性增加。结论ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达不仅与ＡＰＬ的发病有关，而且钝化了维甲酸对ＡＰＬ细胞的诱导分化作用。     

RT-PCR检测急性早幼粒白血病 bcl-2 mRNA表达

应用聚合酶链反应方法，测定２０例急性早幼粒白血病患者的抗调亡基因ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平，并分析基因与急性早幼粒白血病ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因异构体的关系。结果表明，异构体之间的ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。提示ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本构型不影响临床特征和预后     

RT-PCR检测氧化砷治疗APL复发患者的PML-RARα融合基因

目的：探讨急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）患者在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗过程中，ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的变化。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术动态观察１４例ＡＰＬ复发患者在Ａｓ２Ｏ３治疗过程中，骨髓单个核细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本的改变。结果：检测的１１例诱导缓解患者中，９例存在阳性ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本，随访的６例患者中，３例呈现ＰＭＬ－ＲＡＲα转阴，但２例分别在缓解后５、７个月转阳。结论：ＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本可能在一定程度上为氧化砷的疗效及预后判断提供依据     

RT—PCR检测急性早幼粒白血病bcl—2mRNA表达

应用聚合酶链反应方法，测定２０例急性早幼粒白血病患者的抗凋亡基因ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平，并分析基因与急性早幼粒白血病ＰＭＬ－ＰＡＲα融合基因异构体的关系。结果表明，异构体之间的ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平差异性无显著性（Ｐ〉０．０５），提示ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本构型不影响临床特征和预后。     

PML-RARα反义核酸对早幼粒白血病细胞株NB4细胞生长的影响

ＰＭＬ┐ＲＡＲα反义核酸对早幼粒白血病细胞株ＮＢ４细胞生长的影响于文强１孙秉中１陈竺２（１第四军医大学西京医院血液内科西安７１００３３２上海第二医科大学瑞金医院血液病研究所）关键词ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸早幼粒细胞白血病中图号Ｒ５７５急性早幼粒细胞白...     

急性髓细胞性白病融合基因异构体分型与bcl—2表达,临床预 …

采用免疫组化、原位杂交方法,测定２８例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）患者的抗凋亡基因ｂｃｌ－２蛋白／ｍＲＮＡ表达水平,并分析ＡＰＬ融合基因异构体分型与ｂｃｌ－２基因表达、临床预后的关系。结果表明,异构体之间的ｂｃｌ－２蛋白／ｍＲＮＡ表达水平差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。提示ＰＭＬ－ＲＡＰα转录构型不影响临床特征和预后。     

二次PCR检测HL60细胞系PML—RARα融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲα。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｓｔｅｒ－ＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ６０细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ６０细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０＾－６个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测     

双诱导联合蒽环类抗生素治疗初治急性早幼粒细胞白血病疗效观察

目的观察以全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）和亚砷酸（As2O3）双诱导,联合蒽环类抗生素（anthracycline,ATC）为主的治疗方案治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的疗效。方法对初治APL患者以ATRA和Asz03进行双诱导,联合DA方案化疗,达完全缓解（CR）后,以ATC为主的方案巩固化疗6疗程,以后以化疗、ATRA、As2O3交替序贯维持治疗,化疗方案中仍以ATC为主。总治疗时间3年。14例患者接受了PML／RARα融合基因监测。结果21例初治APL患者中,除2例早期死亡外,其余19例诱导治疗后均达CR,经巩固、维持治疗,此19例患者至今均为持续完全缓解（CCR）状态,其中CCR5年以上2例,3年以上6例。无患者出现严重或不可逆的毒副反应。接受PML／RARα融合基因检测的14例患者,初诊时均为阳性,巩固治疗结束时均转为阴性,在以后监测中无一例转阳。结论双诱导联合ATC治疗初治APL,疗效可靠,毒副反应小。     

早幼粒细胞白血病-维A酸受体融合基因的研究进展

急性早幼粒细胞白血病是急性粒细胞白血病的一个亚型。它的分子生物学特征为15号染色体上的早幼粒细胞白血病（PML）基因与17号染色体上的维A酸受体仅（RARα）基因发生易位,表达PML-RARα融合蛋白。PML—RARα融合蛋白在急性早幼粒细胞白血病的发生、发展、诊断和治疗中发挥着重要作用。本文主要综述PML蛋白的结构和生物学功能．PML—RARα的结构、功能及其降解途径。     

早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α融合基因及其在急性早幼粒细胞白血病临床中的应用

正常情况下,早幼粒白血病基因与维甲酸受体α基因均存在于正常的细胞中,其表达产物对细胞的生长发育均具有十分重要的调控作用。在绝大多数急性早幼粒细胞白血病发病过程中,由于某种原因引起17号染色体与15号染色体之间产生移位,从而导致早幼粒白血病基因与维甲酸受体α基因融合形成早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α融合基因,它与急性早幼粒细胞白血病的发生、发展、诊断、治疗以及预后判断等临床关系十分密切。     

基于数据分析探索APL中内含子microRNA与PML-RARα组成的调控环路

目的:探索急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)中microRNA、PML-RARα与下游靶基因组成的调控模式。方法:应用基于染色质的免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation on chip,ChIP-on-chip)技术并结合数据分析方法对miRNA和PML-RARα与下游靶基因形成的调控环路进行研究。结果:在PML-RARα所调节的基因中,相当一部分同时也在转录后被PML-RARα潜在调节的miRNAs所调节,从而组成特定的调控环路。对于不同的内含子miRNAs,类型I的调控环路模式在白血病细胞分化过程中更为普遍存在。结论:APL中microRNA与PML-RARα通过特定的调控环路调控下游靶基因的表达。     

维甲酸和三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的现状

急性早幼粒细胞白血病 (APL)是具有生物学和临床特点的一种特殊类型急性髓细胞白血病。近年来全反式维甲酸 (ATRA)的应用极大地提高完全缓解率和减少了治疗相关死亡率。ATRA与化疗联合应用有助于降低复发率和延长生存期。三氧化二砷 (As2 O3 )治疗初治和复发APL已取得巨大成功。持续分子缓解是APL的治疗目标。早期发现分子复发并给予补救治疗 ,可取得更好的临床治疗效果     

荧光原位杂交技术在急性早幼粒细胞白血病诊断及治疗中的应用价值

目的探讨FISH法检测PML-RARa融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的临床应用价值。方法对21例疑诊APL患者应用FISH技术检测PML-RARa融合基因。结果 21例疑诊患者中最后确诊为APL 15例,排除APL 6例。15例APL患者中PML-RARa融合基因阳性14例,PML-RARa融合基因阴性者1例,该患者经最后确诊为APL变异型,经诱导治疗后效果不佳。6例疑诊患者PML-RARa融合基因均为阴性,确诊为急性髓细胞白血病-M2。结论 FISH法检测PML-RARa融合基因敏感、可靠,对APL的确诊及指导治疗有重要价值。     

激活骨髓自体移植治疗急性早幼粒细胞白血病

目的　探讨激活骨髓 (ABM)自体移植作为急性早幼粒细胞白血病 (APL)缓解后巩固强化治疗的意义。方法　 31例病人 ,第一次完全缓解 (CR1) 2 7例、CR2 3例、第二次复发部分缓解 (PR) 1例 ;移植预处理方案 :2 7例接受MACC(马法兰、阿糖胞苷、环磷酰胺、环己亚硝脲 )方案 ,5例用TBI +CY(全身放疗 +环磷酰胺 )方案 ;荧光原位杂交测定PML/RARα融合基因 ;用Kaplan Meier生存曲线评估移植后无病生存率 ,COX回归模型分析性别、PML/RARα阳性、移植前状态 (CR1与CR2和PR)、初治时白细胞 (WBC)和血小板 (PBC)值对无病生存的影响。结果　CR1病人移植后无一例复发 ,移植后无病生存期 3～ 113个月、中位无病生存期 4 6个月 ,5年无病生存率为 10 0 % ;CR2病人 1例于移植后 19个月复发 ,另 2例分别无病生存为 7与 4 8个月 ;PR患者在移植后获CR 8个月复发。移植后全部病人均获得造血重建 ,无一例死于移植相关并发症。多因素分析长生存与移植前状态相关 (P <0 .0 5 ) ,而与性别、PML/RARα阳性、初诊时WBC和PBC数无关 ;诱导缓解后PML/RARα阳性与初诊时WBC和PBC数相关。结论　激活骨髓自体移植治疗CR后的APL病人能降低复发率和提高无病生存率、尤是CR1后的APL病人。     

实时定量聚合酶链式反应与巢式聚合酶链式反应在 289例白血病融合基因检测中的比较

 目的 比较实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）与巢式聚合酶链式反应（nPCR）在白血病融合基因BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO检测中结果。方法 分别应用RT-PCR与nPCR对289例急慢性白血病初诊和完全缓解的患者BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO融合基因进行检测,结合患者骨髓细胞形态学及临床转归予以分析。结果 46例初诊慢性粒细胞白血病（CML）患者中,RT-PCR法与nPCR法检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为95.7%和93.5%（P=0.997）;69例完全缓解CML患者中,RT-PCR法与nPCR法检测阳性率分别为78.4%和58.1%（P<0.005）。32例初诊急性早幼粒细胞白血病（APL）患者中,RT-PCR法与nPCR法检测PML/RARa融合基因阳性率分别为93.8%和90.6%（P=0.996）;114例完全缓解APL患者中,RT-PCR法与nPCR法检测阳性率分别为12.3%和7.0%（P<0.025）。12例初诊急性粒细胞白血病M2（ANLL-M2）患者中,RT-PCR法与nPCR法检测AML1/ETO融合基因阳性率分别为50.0%和50.0%（P=1.0）;16例完全缓解ANLL-M2患者中,RT-PCR法与nPCR法检测阳性率分别为50.0%和12.5%（P<0.05）。结论 RT-PCR较nPCR更为敏感而准确,应用RT-PCR可以提高微小残留病的检出率,为临床诊断和治疗提供更为有效的分子生物学依据。