Akt1/p27kip1途径介导脂氧素A4抑制TNF-α所致的系膜细胞增殖

目的：研究脂氧素A4(LXA4)是否抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所致的肾小球系膜细胞增殖，并探讨LXA4作用的信号转导机制。方法：用不同浓度的脂氧素A4预外理培养的大鼠肾小球系膜细胞，再加入TNF-α(10ng／m1)共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；用RT-PCR法检测细胞周期素E与mRNA表达；用Westemblot检测308位苏氨酸(Thr308)磷酸化的蛋白激酶Aktl及细胞周期负调控蛋白P27^kipl表达量。结果：LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的系膜细胞增殖。在系膜细胞增殖同时TNF-α引起的细胞周期素E的蛋白表达也被LXA4下调。LXA4减少TNF-α诱导的肾小球系膜细胞中308位苏氨酸磷酸化的Akt1蛋白。LXA4呈剂量依赖性地阻止TNF-α所致的P27^kipl表达下调。结论：LXA4能够抑制TNF-α所致的大鼠系膜细胞的增殖，其机制依赖于Akt1／P27^kipl信号转导途径。     

PI3K/Akt通路在UC-MSCs移植治疗新生大鼠HIBD中的作用机制

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B （PI3K/Akt）通路在脐带间充质干细胞（UC-MSCs）移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中的机制。方法 10日龄SD大鼠分为假手术组、移植组（MSCs组）、抑制剂组（LY组）及HIBD组,制作HIBD动物模型,5-溴脱氧嘧啶尿苷标记UC-MSCs后侧脑室移植,移植后24 h、48 h, TUNEL、Western blot分别检测细胞凋亡及caspase3、磷酸化Akt（P-Akt）蛋白表达。结果 移植后24 h、48 h, MSCs组细胞凋亡数及caspase3蛋白表达量较LY组及HIBD组减少（ P<0.05）,而P-Akt表达较LY组及HIBD组增加（ P<0.05）,且随移植后时间的延长,各指标的表达均呈下降趋势（ P<0.05）。结论 UC-MSCs移植治疗HIBD新生大鼠时,脑组织细胞凋亡减少,caspase3表达下调,P-Akt表达上调,PI3K/Akt信号通路可能为其重要机制。     

胎鼠、新生鼠和成年鼠神经干细胞的体外增殖和分化

目的比较个体发育不同阶段所得神经干细胞的体外增殖和分化情况。方法常规的神经干细胞分离培养方法，用免疫细胞化学方法鉴定细胞。结果从胎鼠所得的神经干细胞增殖能力最强，新生鼠的次之，成年鼠的较差。神经干细胞的分化更多地决定于培养条件。结论个体发育不同阶段所得的神经干细胞有不同的生物学特性。     

补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞增殖及ERK/CREB信号通路的影响

目的：探讨补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞（neural stem cells, NSCs）增殖及ERK/CREB信号通路的影响。方法采用双侧卵巢切除术(OVX)结合大脑中动脉阻塞（MCAO)法复制去势雌性大鼠脑缺血复合模型,将造模后的36只大鼠随机分为双假手术组、复合模型组、雌激素组、雌激素+G15组、补阳还五汤组及补阳还五汤+G15组6组,每组6只,术后24 h给予相应药物灌胃连续干预14 d,同时每天腹腔注射BrdU、G15分别标记增殖细胞和阻断GPER-1。采用免疫荧光BrdU/ Nestin双标法检测各组大鼠缺血侧海马齿状回NSCs增殖情况,免疫组化SP法检测ERK1/2、CREB1磷酸化蛋白表达水平。结果补阳还五汤组和雌激素组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均增加,与复合模型组比较有显著性差异(P<0.05）,但补阳还五汤组要多于雌激素组(P<0.05)。与补阳还五汤组比较,补阳还五汤+G15组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均减少（P<0.05）。结论补阳还五汤可以促进去势脑缺血雌性大鼠缺血侧海马 DG 区神经干细胞增殖,激活ERK/CREB信号通路,可能是其发挥类雌激素作用、促进内源性神经再生作用机制之一。     

体外培养大鼠胚胎脊髓神经干细胞的增殖和分化

目的探讨大鼠胚胎脊髓神经干细胞的体外培养生长及分化情况,为神经干细胞的临床应用提供实验依据。方法取孕13d SD大鼠胚胎脊髓,在条件培养基中培养获得神经干细胞,应用免疫荧光法鉴定。神经干细胞在含血清的培养基中传代培养,应用免疫细胞化学法检测神经干细胞的分化情况。结果从大鼠胚胎脊髓可获得具有自我增殖分化能力的神经干细胞,培养7d即可获得神经球。用免疫细胞化学和免疫荧光法鉴定干细胞分化,可检测到神经元和星形胶质细胞。结论从大鼠胚胎脊髓能分离获得神经干细胞,并可向神经元和星形胶质细胞方向分化。     

功能性电刺激对梗死大鼠室管膜下区神经干细胞/神经前体细胞增殖及神经再生的促进作用

背景：功能性电刺激(Functional electrical stimulation,FES) 可促进梗死后运动功能恢复,上调与神经再生有关生长因子的表达,但是关于FES是否直接影响缺血梗死后大鼠神经再生未见具体报道。 方法：成年雄性SD大鼠,制作永久性大脑中动脉梗死模型（middle cerebral artery occlusion, MCAO）成功后随机分为对照组,安慰刺激组,FES组,每组又随机分为治疗1d、3d、7d、14d四个亚组,模型成功48h后 FES组瘫痪侧前肢开始给予FES刺激,2次/d,10min/次,间隔10min。模型成功48h后给予腹腔注射BrdU（50mg/kg）,2次/d,间隔4h。采用mNSS评分量表行功能评定,免疫荧光双标法动态检测缺血侧SVZ的神经干细胞(neural stem cells, NSCs)增殖、迁移、分化的动态变化;Western blot检测缺血侧SVZ与NSCs增殖、分化密切相关的Wnt3蛋白表达变化。设置P <0. 05为差异有统计学意义。 结果：治疗第7d和14d,FES组的行为学评分与其他2组比较差异有显著性(P<0.05); FES组大鼠梗死侧SVZ的BrdU ,BrdU /GFAP 阳性细胞数目在FES治疗第7d及14d明显增加(P<0.05);BrdU /DCX 细胞数目随着时间延长增加,且逐渐趋向缺血纹状体,在治疗第14d时阳性细胞数目高于安慰刺激组和对照组(P<0.05);BrdU /NeuN 仅在治疗第14d时有少量表达,组间并无显著性差异。各组不同时间点脑梗死大鼠梗死侧SVZ的Wnt3蛋白表达随着时间点的推移均呈上升趋势,治疗第7d、14d时间点上FES组大鼠Wnt3蛋白表达量明显高于其他2组（P<0.05）。 结论：梗死后48小时开始给予FES治疗能够促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,这可能与其能够改善神经功能有关。     

肠与脑来源神经干细胞的增殖和分化特性比较

目的探索肠神经干细胞(ENSCs)的增殖和分化特性,寻找神经干细胞移植治疗肠道神经元缺陷性疾病的合适干细胞源。方法采用神经干细胞培养和分离技术,对来自同一大鼠肠道及大脑的神经干细胞(CNS-NSCs)进行体外培养,通过神经球生长直接观察法、CCK-8细胞增殖测定法、流式细胞仪测定,比较研究两者的生长和增殖情况及成熟分化特性。结果与CNS-NSCs相比,ENSCs神经球增殖速度较慢;ENSCs神经球表面常有长突起,并相互连接成网络状,显示早期成熟分化的迹象;CCK-8法测得ENSCs的吸光度明显低于CNS-NSCs(P<0.05),提示其增殖速度慢于CNS-NSCs。流式细胞仪测得EN-SCs和CNS-NSCs的TUJ-1阳性细胞比例分别为12.3%和11.4%(P>0.05)、GFAP阳性细胞比例分别为21.7%和22.5%(P>0.05)、Nestin阳性细胞比例分别为10.8%和10.8%(P>0.05)。结论 ENSCs与CNS-NSCs具有类似的增殖、分化特性,但ENSCs增殖速度较慢,易于成熟分化。     

Cyclovirobuxinum D Alleviates Cardiac Hypertrophy in Hyperthyroid Rats by Preventing Apoptosis of Cardiac Cells and Inhibiting the p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Signaling Pathway

Objective: To investigate the underlying mechanisms of cyclovirobuxinum D(Cvb-D) on alleviating cardiac hypertrophy in rats. Methods: Sprague-Dawley rats were randomly divided into 5 groups: control group; levothyroxine-induced cardiac hypertrophy group(model); levothyroxine-induced cardiac hypertrophy + Cvb-D group(Cvb-D); levothyroxine-induced cardiac hypertrophy + captopril group(captopril); levothyroxine-induced cardiac hypertrophy + SB203580 group(SB203580), n=10 for each group. Rats were daily administered the respective drugs continuously for14 days by gastric gavage. A rat model of cardiac hypertrophy was established by intraperitoneal injection of levothyroxine to investigate whether Cvb-D protects against cardiac hypertrophy by inhibiting the p38 mitogen-activated protein kinase(MAPK) signaling pathway and preventing apoptosis of cardiac cells. Results: Treatment with Cvb-D significantly deceased left ventricle hypertrophy, improved the histopathology, hemodynamic conditions, and cardiac function in rats with cardiac hypertrophy. Compared with the normal control group, in rats with cardiac hypertrophy, expression of bax in the heart and phospho-p38 MAPK protein levels were significantly up-regulated(P0.01 or 0.05), whereas the bcl-2 protein level was downregulated(P0.01). In contrast, Cvb-D treatment reversed the changes in bax and phospho-p38 MAPK protein levels but increased the bcl-2 protein level(P0.01 or 0.05), and these effects were similar to those of captopril and SB203580(a specific p38 MAPK inhibitor) treatment. Furthermore, both Cvb-D, captopril and SB203580 reduced m RNA expression of p38α, p38β, c-fos, and c-jun m RNA, and Cvb-D had a stronger effect(P0.01). Conclusion: These results demonstrate that Cvb-D protects against cardiac hypertrophy, which is possibly mediated by prevention of cardiac cell apoptosis and inhibition of the p38 MAPK signaling pathway.     

补肺汤靶向调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖及侵袭机制

[目的] 研究补肺汤对骨肉瘤细胞增殖及侵袭的影响,探讨补肺汤对骨肉瘤的防治作用及其潜在机制。 [方法] 将大鼠骨肉瘤细胞UMR-106分为对照组,补肺汤低、中、高浓度组,对照组加入洛斯维尔帕克纪念研究所(Roswell Park Memorial Institute,RPMI)1640培养液进行培养,补肺汤低、中、高浓度组分别加入不同浓度的补肺汤进行培养。采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞增殖率,划痕实验、Transwell实验探究细胞迁移能力,免疫印迹、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的蛋白及mRNA表达。[结果] 与对照组比较,补肺汤各浓度组细胞增殖率明显下降(P＜0.001,P＜0.0001);中、高浓度组细胞迁移数量明显减少(P＜0.0001);中、高浓度组穿过小室细胞数量明显减少(P＜0.0001);中、高浓度组AKT、mTOR 蛋白和mRNA相对表达量均明显下调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001,P＜0.0001)。 [结论] 补肺汤具有较好的抗骨肉瘤细胞增殖迁移能力,其可能通过干预PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥抗肿瘤作用。