甲状旁腺素和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响?方法:使用正常?高钙低磷或低钙低磷饮食喂养2月龄野生型(WT)和PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)小鼠4周,测定血清钙?磷?PTH和1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]水平,并利用RT-PCR方法检测肾1α-羟化酶[1α(OH)ase]基因表达水平?结果:正常饮食PTH-/-小鼠表现为低钙血症?高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达上调,而血清1,25(OH)2D3水平则降低?与正常饮食相同基因型小鼠相比,高钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平降低,肾1α(OH)ase基因表达下调?高钙低磷饮食矫正了PTH-/-小鼠的低钙和高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达仍高于WT小鼠,而血清1,25(OH)2D3水平与WT小鼠无差异?与正常饮食相同基因型小鼠相比,低钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平明显升高,肾1α(OH)ase基因表达明显上调?低钙低磷饮食PTH-/-小鼠血清钙严重降低,血清磷仍然较高,肾1α(OH)ase基因表达和血清1,25(OH)2D3水平均较WT小鼠为低?结论:钙磷饮食能够通过PTH依赖性和PTH非依赖性的方式调节活性维生素D的合成?     

PTH缺乏经细胞外钙介导卵巢血管生成障碍而致生殖能力降低

目的:探讨甲状旁腺素(PTH)缺乏引起生殖功能降低的机制.方法:使用组织学,免疫组织化学和Western blot的方法比较分析了同窝4个月PTH基因敲除纯合子小鼠和野生型小鼠分别给予正常钙(1%)、低钙(0.01%)及高钙饮食(2%)后生殖能力、卵巢成熟卵泡数量、黄体形成及血管生成的差异.结果:与同窝野生型雌性小鼠(PTH+/+)相比,正常饮食PTH基因敲除纯合子小鼠(PTH-/-)生殖能力下降,成熟卵泡数量及黄体生成减少,卵巢血管发生减少;低钙饮食PTH-/-表现为完全不孕,成熟卵泡数量进一步减少和黄体缺失,卵巢血管发生减少更为明显;而高钙饮食PTH-/-生殖能力、成熟卵泡数量、黄体形成及血管发生均恢复正常.结论:PTH缺乏经细胞外钙介导卵巢血管生成障碍而致生殖能力降低.     

活性维生素D缺乏促进小鼠皮肤衰老

目的:探讨1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在抗皮肤衰老中的作用及机制。方法:使用组织学、免疫组织化学、免疫印迹和生化指标检测的方法比较同窝10周龄25-羟化维生素D1α-羟化酶基因敲除纯合子[1α(OH)ase-/-]小鼠和野生型小鼠皮肤表型的差异。结果:1α(OH)ase-/-小鼠皮肤衰老相关β-半乳糖苷酶染色增强,出现皮肤变薄、表真皮交界平坦、皮下脂肪和毛囊数目减少等衰老表型;通过细胞增殖性核抗原(PCNA)免疫组织化学染色和TUNEL检测,发现1α(OH)ase-/-小鼠皮肤中PCNA阳性细胞明显减少而TUNEL阳性细胞则显著增多;免疫印迹结果显示p16、p27、p53、NF-κB、活化型Caspase-3在1α(OH)ase-/-小鼠皮肤组织中表达明显升高;生化检测显示1α(OH)ase-/-小鼠皮肤活性氧(ROS)水平明显升高、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平降低、丙二醛(MDA)含量增高。结论:1,25(OH)2D3能够通过促进皮肤细胞增殖、抑制皮肤细胞凋亡和抗氧化应激作用发挥抗皮肤衰老的作用。     

活性维生素D缺乏导致脑内加压素表达上调和脑血管功能损伤

目的:本研究探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]缺乏在小鼠高血压发病的病理进程中对脑内加压素(VP)表达和脑血管功能的影响?方法:运用尾动脉压体积描记法?免疫组织化学?离体微血管压力肌动描记法分析和比较2月龄25羟化维生素D 1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase-/-]小鼠和同窝野生型小鼠的平均动脉血压?脑内VP的表达和脑微血管反应性的变化?结果:1α(OH)ase-/-小鼠出现高血压表型,下丘脑室旁核和视上核VP表达都高于同窝野生型小鼠,大脑后动脉对乙酰胆碱的舒血管反应和对一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸的缩血管反应较对照组显著降低?结论:1,25(OH)2D3在高血压发病过程中对脑内神经内分泌和脑血管功能起重要调控作用?     

1, 25(OH)2D3对柯萨奇病毒B3诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制

目的探讨1, 25二羟维生素D3[1, 25(OH)2D3]对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制。方法将雄性野生型(WT)小鼠和1α羟化酶基因敲除[1(OH)ase-/-]小鼠分为WT组、WT+CVB3组、1(OH)ase-/-+CVB3组和1(OH)ase-/-+CVB3+VD3组, 每组8只。实时荧光定量PCR测定促炎症因子白细胞介素(IL)1β、IL-6、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;TUNEL染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;Fluo-4/AM荧光探针检测心肌细胞内的钙离子含量;Western印迹法检测钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)及内质网应激相关葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达水平。结果与WT组相比, WT+CVB3组小鼠心肌中促炎症因子IL-1β(14.88±3.32比1.03±0.02, P=0.009)、IL-6(7.00±1.09比1.81±0.18, P=0.005)、IFN-γ(4.70±1.11比1.34±0.3...     

活性维生素 D缺乏导致牙齿和下颌骨的发育障碍

目的:为了检测活性维生素D缺乏及其母乳成分的改变是否影响小鼠下颌骨以及牙齿的发育.方法:通过采用X线摄影、微CT和组织学等方法比较分析25羟维生素D3的1α羟化酶杂合子[1α(OH)ase+/-]和纯合子[1α(OH)ase-/-]母鼠所喂养的纯合子和杂合子小鼠下颌骨以及牙齿的表型差异.结果:母乳中的钙水平在1α(OH)ase-/-母鼠较1α(OH)ase+/-母鼠为低.1α(OH)ase-/-仔鼠的牙量和骨量较同窝1α(OH)ase+/-仔鼠明显下降,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养仔鼠的牙量和下颌骨骨量比由1α(OH)ase+/-母鼠喂养的仔鼠要低.由1α(OH)ase+/-母鼠所喂养的1α(OH)ase+/-仔鼠牙量和下颌骨量最高,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养的1α(OH)ase-/-仔鼠牙量和下颌骨量最低.结论:活性维生素D和高乳钙摄入各自具有刺激下颌骨和牙齿矿化和发育的作用,又具有协同作用.     

甲状旁腺素和活性维生素D在调节肾脏钙结合蛋白中的协同作用

目的:明确甲状旁腺素(PTH)和1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]在调节肾脏钙结合蛋白中的各自和协同作用.方法:采用免疫组织化学方法观察PTH基因敲除、1α羟化酶基因敲除及双基因敲除对钙结合蛋白D28K和D9K在小鼠肾脏不同部位表达的影响.结果:钙结合蛋白D28K和D9K均定位于肾脏皮质远曲小管及髓质集合管上皮细胞的胞浆内.两种钙结合蛋白在PTH基因敲除小鼠肾脏的表达均明显减少.它们的减少在1α羟化酶基因敲除小鼠更为明显,而以双基因敲除小鼠最为显著.结论:PTH和活性维生素D均能调节钙结合蛋白在肾脏的表达,而且两者具有协同作用.     

CD38基因敲除对小鼠脾脏B细胞炎性因子产生的影响

目的 分析CD38基因敲除小鼠脾脏中B细胞的数量及B细胞中炎性因子和去乙酰化酶1(SIRT1)的表达水平,探讨CD38基因敲除对B细胞中炎性因子的影响及其潜在机制.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测小鼠尾巴CD38和新霉素(Neo)基因的DNA表达水平;磁珠阴选法分选出野生型(WT) C57BL/6和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞,经流式细胞仪鉴定B细胞分选纯度;实时定量PCR检测CD38和炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)基因的mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测CD38及SIRT1的蛋白表达水平.结果 鉴定CD38-/-小鼠,并成功分选出WT和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞(纯度＞95％).与WT小鼠相比,CD38-/-小鼠脾脏发育障碍,脾细胞总数及其中的B细胞数量均减少(P＜0.01),伴炎性因子TNF-α和IL-1β mRNA表达水平下降(P＜0.0l),SIRT1蛋白表达水平上升(P＜0.05).结论 CD38基因敲除可引起脾脏B细胞数量减少;并可能通过激活SIRT1通路,抑制脾脏B细胞中炎性因子TNF-α和IL-1β的表达.     

Mfge8基因敲除纯合子小鼠的定向繁殖和鉴定及其与自身免疫疾病相关性分析

目的繁殖和鉴定Mfge8基因敲除C57BL/6小鼠,获取纯合子(Mfge8~(-/-))小鼠,并比较Mfge8~(-/-)小鼠血清学及组织学改变。方法对幼鼠剪尾抽提基因组DNA,用PCR法和琼脂糖凝胶电泳法鉴定幼鼠基因型;利用TUNEL法分别检测12周龄野生型(WT)和Mfge8~(-/-)小鼠肺组织中凋亡细胞;并且利用免疫荧光法分别检测36周龄WT和Mfge8~(-/-)小鼠血清中ANA和AECA含量。结果构建的基因敲除小鼠已成功繁育保种,并得到纯合基因缺失型小鼠。同时,12周龄Mfge8~(-/-)小鼠肺组织中凋亡细胞数量明显多于WT小鼠;36周龄Mfge8~(-/-)小鼠血清中ANA抗体及AECA抗体阳性,而WT小鼠血清中呈现阴性。结论 C57BL/6背景小鼠敲除Mfge8基因后,更易发生自身免疫疾病。