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相似文献
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1.
目的 :鉴定并提取幽门螺杆菌 ( Hp)特异性抗原 ,建立测定抗 Hp抗体的半定量免疫酶技术。  方法 :10株 Hp可溶性蛋白用于十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析 ,凝胶层析提取特异性抗原 ,方阵滴定建立免疫酶方法。纯化抗原与全菌抗原同批检测 136例患者 ,以免疫印迹分析作为金标准。  结果 :Hp主要特异性抗原分子量为 660 0 0 ,590 0 0 ,310 0 0和2 50 0 0 ,Sephadex G- 2 0 0柱层析第 1峰提取物含其中 3种抗原成分。纯化抗原 EL ISA测定抗 HpIg G,敏感性 98.9% ,特异性 92 .5% ,准确性 97.0 % ,优于应用全菌抗原的检测结果。  结论 :本实验建立的检测抗 Hp Ig G方法 ,具有敏感、特异、半定量可靠、可目测定性及可用于微量检测等特点 ,值得推广应用  相似文献   

2.
目的 表达纯化重组人Jo-1抗原,免疫印迹和ELISA检测其免疫特异性.方法 IPTG诱导含有Jo-1基因的重组菌,获得高表达的可溶性融合蛋白(MBP-Jo-1),亲和层析纯化该表达蛋白,免疫印迹和ELISA分别检测其抗原性并与生化提取的Jo-1抗原比对.结果 表达的重组Jo-1蛋白具有Jo-1抗原的特异性.结论 重组Jo-1蛋白与天然Jo-1抗原具有相同的免疫原性和免疫原特异性.  相似文献   

3.
目的:纯化和鉴定白念珠菌免疫显性抗原。方法:用产胶过滤性分离纯化白念珠菌免疫显性抗原,用酶联免疫法和免疫印迹法鉴定抗原性。结果:获得的两种白念珠菌免疫显性抗原达到电泳纯:p38蛋白和p28蛋白。经SDS-PAGE测定其分子量分别为38.1-kDa和28.1-kDa,Lowry法测定其含量分别为0.582mg/ml和1.345mg/ml。酶联免疫法和免疫印迹法显示p38和p28都能和小鼠抗白念珠菌血清反应。结论:初步证实p38和p28为白念珠菌免疫显性抗原,初步建立了分离纯化白念珠菌免疫显性抗原的基本方法。  相似文献   

4.
抗内皮细胞抗体在狼疮性肾炎临床和病理改变中的意义   总被引:12,自引:3,他引:9  
目的 探讨抗内皮细胞抗体在狼疮性肾炎临床和病理改变中的意义。方法 采用细胞酶联免疫吸附实验(ELISA),对58例狼疮性肾炎病人血清进行抗内皮细胞抗体检测,并以提取的内皮细胞蛋白为抗原,应用免疫印迹方法对抗内皮细胞抗体的抗原进行了分析。  相似文献   

5.
抗小鼠endolgin单克隆抗体杂交瘤的建立和初步应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立能够分泌特异性抗小鼠endogun的单克隆抗体杂交瘤细胞系,为深入研究endoglin的新功能、诊断和治疗肿瘤血管生成提供物质基础。方法 利用小鼠endc,glin胞外段重组蛋白作为抗原免疫大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠endoglin单克隆抗体的杂交瘤系。利用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹方法明确筛选的单克隆抗体的特异性,免疫组化和免疫荧光初步判定获得的单克隆抗体是否可以应用于临床诊断。结果通过对90多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系,分泌的单克隆抗体亚型为IgG1,轻链亚型为kappa。免疫印迹显示该研究获得的单克隆抗体可以特异识别小鼠endoglin重组蛋白,该单克隆抗体可以结合实体肿瘤组织微血管上的特异抗原并将微血管有效染色。结论本研究所获得的抗小鼠endglin单克隆抗体将有助于深入研究endoglin的新功能,为肿瘤血管生成的诊断和治疗提供了物质保障。  相似文献   

6.
目的建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2(AnxA2)的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系。方法利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠-小鼠融合单抗杂交瘤细胞株。采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性。结果通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白。结论该研究所获得的大鼠-小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障。  相似文献   

7.
目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒(Human T-cell Lymphotropic Virus,HTLV)I型重组env抗原的表达。方法分析和选择HTLV-I env目的基因,将目的基因片段分别克隆入原核表达载体pQE80L,PCR和酶切鉴定重组子,诱导并亲和层析纯化表达重组env蛋白抗原,Western-blot检测重组env蛋白抗原活性,ELISA方法测试重组env蛋白抗原的特异性。结果 PCR扩增和酶切筛选得到阳性重组子pQE80L-env。SDS-PAGE显示重组蛋白相对分子质量约为25KDa,与预期分子量相符。免疫印迹在约25KDa有一明显特异印迹条带。转染细胞培养48h,SDS-PAGE分析,有相对分子质量约为27KDa目的重组蛋白表达,与预期的融合蛋白大小相符。ELISA检测到正常人、HIV阳性和HTLV-II阳性的参考血清均为阴性;HTLV-I阳性的参考血清为强阳性。结论 HTLV-I env基因5915nt-6545nt区,可以利用原核系统表达得到特异性HTLV-I重组抗原,重组抗原无显著性差异,有望成为检测试剂的抗原。  相似文献   

8.
目的 建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2( AnxA2)的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系.方法 利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠—小鼠融合单抗杂交瘤细胞株.采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性.结果 通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白.结论 该研究所获得的大鼠—小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障.  相似文献   

9.
目的 通过制备和鉴定人冠状病毒SARS.CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体〈mAb),观察3株人冠状病毒的N蛋白抗原相关性。方法 分别用基因重组SARS.CoV、229E和OC43N蛋白免疫BALB/c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光进行筛选和鉴定.同时用mAb分析3株人冠状病毒N蛋白之间的免疫交叉反应。结果 获得多株抗SARS.CoV、229E和OC43N蛋白mAb杂交瘤细胞株。ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光结果均显示,所有的mAb仅与各自病毒的N蛋白特异性反应。而在3株人冠状病毒N蛋白抗原之间不产生免疫交叉反应。结论 获得的特异性抗人冠状病毒N蛋白mAb为进一步研究3株人冠状病毒的抗原决定簇相关性奠定了基础。  相似文献   

10.
目的寻找肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)血清学检测用特异性抗原。方法双向电泳分离K.pneumoniae总蛋白,通过免疫印迹(Western blotting)与常见病原菌的多抗反应筛选特异性抗原蛋白,原核表达该蛋白并用ELISA法验证。结果获得K.pneumoniae的双向电泳图谱。寻找Western blotting中与K.pneumoniae自身多抗反应而不与与其它病原菌多抗反应的蛋白,质谱鉴定为酸性磷酸酶(Acid phosphatase,GI:238894261)。经表达纯化并以酶联免疫吸附试验(ELISA)验证,证明该蛋白作为包被抗原的灵敏度高,特异性强。结论 K.pneumoniae酸性磷酸酶是适用于该菌感染检测特异性抗原蛋白。  相似文献   

11.
目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染者血清及初乳中该病毒标志物存在状况。 方法 :对 2 44份 HCV感染者、33份对照血清和 35份 HCV特异性 Ig G抗体阳性的产妇、41份健康产妇的初乳进行 HCV四种标志物测定。抗HCV- Ig G、Ig M和 GOR抗体采用间接 EL ISA法 ,HCV C33抗原采用双抗体夹心 EL ISA法。 结果 :抗 HCV- Ig G、抗 HCV- Ig M、HCV C33和抗 GOR抗体四种标志物在慢性活动性丙型肝炎组检出率最高 ,分别为 10 0 .0 %、85 .7%、46 .4%和 6 4.3% ;急性输血后丙型肝炎组检出率为 6 6 .7%、10 0 .0 %、2 2 .9%和 42 .9% ;慢性稳定性丙型肝炎组为 94.1%、2 6 .5 %、17.6 %和 5 2 .9% ;血透患者组为 6 2 .6 %、31.3%、4.8%和 45 .6 %。血清抗 HCV Ig G阳性组初乳为 17.1%、2 .9%、8.5 %和 37.1%。血清和初乳对照组除 1例献血员血清抗 HCV- Ig G阳性外 ,其余均为阴性结果。 结论 :除抗 HCV- Ig G外 ,抗 HCV- Ig M、HCV C33和 GOR抗体三种标志物在 HCV感染的相关疾病组中 ,有一定的阳性检出率 ,均可作为 HCV感染的标志 ,可用于 HCV感染后的实验室诊断。  相似文献   

12.
本实验用12株经鉴定及增菌培养的幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori;HP)制成酸提取物作抗原,以ELISA间接法对101名患者进行血清HP-IgG检查,同时做细菌学检查,并以此作为金标准。检查结果显示62例患者血清HP-IgG阳性,阳性率达61.39%,与细菌学检查相比较,ELISA间接法检测HP感染的敏感性和特异性分别为:93.55%、89.74%。由此我们认为ELISA间接法检测HP抗体可用于HP感染的流行病学调查及大量标本的初筛检查。  相似文献   

13.
为建立一种简便、快速诊断戊型肝炎病毒血清抗体的检测方法,以基因工程HEVORF2区重组蛋白抗原和人工会成HEVORF3区合成多肽抗原混合作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗人IgG抗体为第二抗体,建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中HEVIgG抗体技术。检测中国药品生物制品检定所《检测抗HEV抗体国家参考品》全套血清盘:特异性参比品30份,全部为阴性;阳性参比品10份,全部为阳性;精密性参比品,CV(n=10)<15%。17例非甲、乙、丙肝炎患者,黄殖出现后4个月内,HEVIgG抗体检出率为100%。普通人群HEVIgG抗体检出率为1%~2%。表明该方法检测HEVIgG抗体,特异性强、敏感性高、操作简便快速,适用于临床对戊型肝炎的诊断和流行病学调查。  相似文献   

14.
目的:建立快速、灵敏及特异的检测溶脲脲原体免疫诊断方法。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。结果:共获得7株能持续、稳定分泌抗支原体抗体的杂交瘤细胞系。单抗的类别4株为IgG1,3株为IgG2b。用ELISA法鉴定特异性良好。结论:制备的抗溶脲脲原体单克隆抗体特异性强、效价高。  相似文献   

15.
目的 :建立具有疗效考核价值的抗原 -抗体检测系统。方法 :用日本血吸虫不同发育阶段抗原 (AWA、AMA、AESA、SEA、SIEA)检测治疗前及治疗后不同时间慢性血吸虫病人血清中特异性IgG及IgG4 并测定肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清的交叉反应性。结果 :不同发育阶段抗原 -IgG检测系统间对慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清测试的阳性率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,慢性血吸虫病人治疗后 12个月IgG的阴转率以SIEA最高 (90 .0 % ) ,其次为AMA(77.5 % ) ,最低为AESA(2 0 .0 % ) ;检测慢性血吸虫病人治疗前的特异性IgG4 的阳性率AWA最高 (85 .0 % ) ,其次为AMA(80 .0 % ) ,最低的为SIEA(37.5 % ) ,治疗后 12个月的IgG4 阴转率SIEA最高 (97.5 % ) ,其次为AMA(95 .0 % )和AWA(85 .0 % ) ,最低的为SEA(6 2 .5 % )。结论 :AMA -IgG、SIEA -IgG、AWA -IgG4 和AMA -IgG4 检测系统具有较好的疗效考核价值 ,且以SIEA -IgG和AMA -IgG4 两个检测系统最好。  相似文献   

16.
检测血清弓形虫IgG抗体的滴金免疫测定法的建立及应用   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的:建立检测血清中弓形虫IgG抗体的简便、快速的滴金免疫测定法。方法:将弓形虫抗原包被于硝酸纤维素膜上,通过胶体金-SPA直接显色,阳性者在膜上出现红色斑点。结果:用该法与间接ELISA法平等对比检测经间接血凝法确定的11份阳性血清和30份阴性健康人血清,结果有良好的一致性。符合率为90.9%。结论:滴金免疫测定法检测血清中弓形虫抗体简便、快速、敏感,无需特殊仪器设备,适于基层应用。  相似文献   

17.
目的:探讨非造血系统来源的恶性肿瘤细胞内Ig样蛋白与Ig分子在抗原性及分子结构上的关系.方法:应用亲和层析的方法将HeLa MR(人宫颈癌传代细胞)细胞内Ig样蛋白进行了纯化;并以SDS-PAGE及Western Blot方法将Ig样蛋白与IgG进行比较分析.结果:SDS-PAGE结果显示Ig样蛋白既有与IgG相近的轻、重链泳带,同时又分别在相对分子质量6 600、7 000左右出现两条泳带,此两条泳带与人IgG具有高度一致的抗原性.Western Blot结果显示,Ig样蛋白与IgG相同,不但可与抗人IgG多克隆抗体、单克隆抗体反应而且可与Protein A蛋白发生反应.结论:Ig样蛋白与IgG比较在抗原性上具有明显的一致性,而在分子结构上也表现明显相似性,但二者不完全相同.  相似文献   

18.
选择并合成戊型肝炎病毒(HEV),ORF(阅读框架)-1、ORF-2及ORF-3中的4个肽段。其中合成肽(SPB36)可用于酶联免疫吸附法检测戊型肝炎病毒的IgG及IgM抗体。对134份肝炎患者血清分别以重组抗原及SPB36抗原检测戊肝抗体IgG,相对符合率为85.1%。对比检测戊肝抗体IgM(44份),相对符合率为88.6%。合成肽因结构组成明确,不需要特殊纯化,特异性较高,用于检测抗体有其优点。  相似文献   

19.
目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。  相似文献   

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