PEG修饰大蒜素长循环脂质体的制备工艺研究

目的:制备PEG修饰大蒜素长循环脂质体。方法:合成聚乙二醇单甲醚磷脂酰乙醇胺衍生物(PEG-PE),采用Szoka改进逆相蒸发技术,制备PEG修饰大蒜素长循环脂质体(PEG-DATS-LCL),均匀设计法筛选优化处方工艺。结果:根据优化工艺制得的长循环脂质体粒子分布较均匀。测得脂质体包封率为90.77%,算术平均粒径为12.63μm,粒径分布在5~30μm范围内占总数目的91.8%。结论:该制备工艺包封率高,稳定性好,粒径大小符合肺靶向要求。     

内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响

目的 探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响.方法 制备搪尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT) C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子( GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达.分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5 μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8 μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达.结果 糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P ＜0.001).经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P＜0.05).结论 糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高.体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufml的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程.     

PEG的活化及对壳聚糖的修饰作用

用聚乙二醇 (ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ,ＰＥＧ)修饰壳聚糖可望使二者的优良性质得到有利结合。提高壳聚糖作为生物医学工程材料的生物相容性 ,改进吸附性能等重要作用。ＰＥＧ末端羟基可以进行多种活化。我们在以往工作的基础上用 1,1′ 羰基二咪唑对ＰＥＧ进行了活化。用这种活化ＰＥＧ对壳聚糖小珠接枝修饰 ,并使用该修饰壳聚糖珠进行脂蛋白胆固醇的吸附作用实验。1　材料和方法1.1　试剂 :ＰＥＧ 4 0 0 ,市售分析纯。 1,1′ 羰基二咪唑 (Ａｌｄｒｉｃｈ) ,壳聚糖 (成都智达公司生产 ,脱乙酰90 %以上 ) ,其他试剂均为市售分…     

大分子拥挤及其对蛋白质折叠的影响

大分子拥挤现象在过去的几十年中 ,对于蛋白质体外折叠的大量研究 ,为理解细胞内新生肽链如何折叠成熟为具有一定功能的蛋白质以及克服大多数重组蛋白在重新折叠的过程中形成包涵体提供了充足的依据。现如今 ,蛋白质的体外折叠已经广泛的作为一种研究手段 ,从而理解与探究蛋白质在细胞内的折叠过程。然而 ,长期以来 ,主要由于某些实际原因 ,研究蛋白质体外折叠的实验一般是在一些简单的缓冲体系——稀溶液中进行的。在蛋白质的体外折叠实验中 ,蛋白质通常保持低浓度 ,以避免在再折叠反应过程中发生蛋白质自身聚集现象。这种人为的理想状态和…     

泛素折叠修饰因子1作用的研究进展

泛素折叠修饰因子1(Ufm1)是最近发现的一种类泛素蛋白,其三级结构与泛素十分类似,但其氨基酸序列与泛素只有16%的相似性。Ufm1及其修饰系统广泛、稳定地存在于多细胞生物中。Ufm1结合到靶蛋白需要通过一系列的酶级联反应,首先Ufm1被Uab5激活,然后转移给Ufc1及Ufl1,最后Ufm1与靶蛋白结合,并对其进行加工、修饰。Ufm1及其修饰系统参与了内质网应激及其诱导的凋亡,同时也参与了细胞周期、细胞存活、脂肪酸β氧化等生物过程的调控,为进一步研究Ufm1的功能提供了新的方向。     

镁离子对碱性磷酸酶折叠过程的影响

对小牛肠碱性磷酸酶再折叠的机制及其影响因素进行了探讨。在 2 5℃室温下 ,以 3mol/L盐酸胍对小牛肠碱性磷酸酶 (CIP)进行了 2h的去折叠实验 ,然后再以Tris HCl缓冲液对变性体系进行 2 0倍稀释 ,观察该酶活力恢复的动力学过程并与镁离子参与下的稀释复性过程进行比较。并就不同实验条件下含镁稀释或不含镁稀释 ,获得的最终酶活力、酶活力恢复水平、活力恢复速率常数及数据的相对标准偏差等指标进行了探讨。认为镁是CIP位点的特异性“效应分子” ,它与酶中有关基团的配位 ,稳定了酶活性部位的构象 ,使得自发折叠过程能够向类天然态的方向进行     

辛伐他汀对人低密度脂蛋白氧化修饰影响的实验研究

目的研究辛伐他汀在体外对低密度脂蛋白氧化修饰的影响.方法以低密度脂蛋白氧化修饰为模型,以硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)生成量及相对电泳迁移率(REM)为指标,研究了辛伐他汀对铜离子(Cu2 )诱导低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用.结果随辛伐他汀浓度从1～10μmol/L的增加,TBARS值分别减少67.3%,73.9%,81.9%,REM值减少48.3%,55.2%,58.6%,呈浓度及时间依赖关系.其中10μmol/L辛伐他汀可几乎完全抑制低密度脂蛋白氧化.结论辛伐他汀在体外能明显抑制Cu2 诱导的低密度脂蛋白氧化修饰.     

咪唑斯汀与牛血清白蛋白的作用研究

目的研究咪唑斯汀与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制和作用类型。方法用荧光光谱法检测Stern-Volmer猝灭常数,用紫外分光光度法(UV)和圆二色谱法(CD)检测咪唑斯汀对牛血清白蛋白构象的影响。结果用上述检测方法获得不同温度下咪唑斯汀与牛血清白蛋白的猝灭常数和热动力学参数。结论静态猝灭是咪唑斯汀导致BSA荧光猝灭的主要原因。不同温度下计算的热动力学参数表明,咪唑斯汀与牛血清白蛋白分子间的结合力以疏水作用力为主。上述二者的结合导致BSA的构象发生改变。     

不同链长聚乙二醇修饰的香豆素6脂质纳米粒对口服吸收的影响

通过制备不同链长聚乙二醇（PEG）修饰的纳米脂质载体（NLCs）考察PEG链长对其口服吸收的影响。使用聚乙二醇（100）单硬脂酸酯（S100）、聚乙二醇（55）单硬脂酸酯（S55）、聚乙二醇（40）单硬脂酸酯（S40）3种不同链长的PEG通过薄膜分散法制备NLCs，以香豆素6 （coumarin 6）作为荧光探针，对修饰不同链长PEG的NLCs进行理化性质表征。考察了不同链长PEG修饰的NLCs在模拟缓冲液中的稳定性以及体外释药行为。同时对NLCs的细胞毒性、细胞摄取动力学以及摄取机制进行了考察。结果表明，随着PEG链段长度的增加，其水化层厚度不断增大。与其他NLCs相比，S100修饰的NLCs（pNLC-EG100）具有更好的细胞摄取效率，证明S100的链段长度是用于口服NLCs给药的最佳长度。     

聚乙二醇修饰对苦瓜核糖体失活蛋白的肝细胞毒性影响

目的 探讨聚乙二醇(PEG)修饰对α型苦瓜核糖体失活蛋白(α-momorcharin,α-MMC)的大鼠肝细胞毒性的影响。 方法 将SD大鼠随机分为生理盐水阴性对照组,α-MMC高、中、低剂量组(蛋白含量分别为6.25、2.08、0.70 mg/kg)和PEG修饰后的α-MMC-PEG高、中、低剂量组(蛋白含量相同),每组24只,隔日经尾静脉注射给药一次,连续28 d,停药后恢复14 d,观测动物的一般状况,并分别在给药期末和恢复期末进行肝功能和肝组织病理学检查。 结果 在给药第28 d,与生理盐水阴性对照组比较,α-MMC高、中剂量组有明显的肝功能异常,如血清白蛋白(ALB)含量降低,血清球蛋白(GLB)增加,A/G比值降低,谷草转氨酶(AST)、总胆红素(BIL)和胆固醇(CHO)增加;HE染色可见弥散性肝细胞水肿、变性,炎性细胞浸润,甚至点状坏死。与α-MMC不同,经PEG修饰后的α-MMC-PEG各组的毒性则明显减轻,其高剂量组肝功损害指标及病理改变仅与α-MMC低剂量组接近,而中剂量和低剂量组与阴性对照组一致。 结论 PEG修饰能够明显降低α-MMC对大鼠的肝细胞毒性。     

青春型双歧杆菌生态制品对小鼠血清溶菌酶含量的影响

本文了青春型双歧杆菌对小鼠血清溶菌酶含量的影响。结果发现，青春型双歧杆菌经腹腔和尾静脉主注入均可使血清溶菌酶含量增高，以尾静脉注入效果更明显，认为青春型双歧杆菌对小鼠血清溶菌酶含量的影响，可能是该菌苗注入动物体内后刺激单核巨噬细胞增殖或改变其功能状态有关。     

聚乙二醇修饰前后天花粉蛋白性质的比较研究

目的 对天花粉蛋白(TCS)进行定点突变、聚乙二醇(PEG)修饰,并将修饰前后TCS的诸多性质加以比较.方法 选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点YFF81-83进行定点突变,并将所构建的突变体TCSYFF81-83ACS在大肠杆菌中表达及纯化.随后通过该突变体第82位刚引入的半胱氨酸残基进行PEG定点修饰.通过比较研究,分析所构建PEG修饰型TCS的DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性、急性毒性以及药代动力学性质.结果 所构建的突变型TCS其活性与野生型TCS(wTCS)活性几乎相当,而免疫原性已显著降低.PEG修饰型TCS虽有活性下降,但其免疫原性比wTCS低(P＜0.05),急性毒性比wTCS低,LD50值约为wTCS的1.8倍(P＜0.05),血液内平均滞留时间和半衰期明显长于wTCS(P＜0.05).结论 通过基因工程及化学修饰方法改造TCS是可行的,所构建的突变型及PEG修饰型TCS值得进一步研究.     

腺病毒载体的PEG修饰及其特性研究

目的：本研究通过对腺病毒载体（Adv）进行聚乙二醇（PEG）修饰,以达到改善Adv在体内免疫原性较强、血液半衰期短的不足.方法：使用活化的甲氧基PEG对Adv衣壳蛋白质进行修饰得到PEG化Adv（PEG-Adv）,用A549细胞评价了PEG-Adv的抗体抵抗能力、基因转导能力,并以体内试验考察其半衰期.结果：用本实验方法可通过调整反应中的PEG量控制Adv的PEG修饰率,PEG-Adv的血液半衰期及抗体抵抗能力显著优于普通Adv.结论：Adv经PEG修饰后,可显著改善Adv血液半衰期短、易被抗体中和等缺点,对开发高效的、有理想药动学特征的Adv具有重要意义.     

聚乙二醇化聚酰胺-胺树枝状材料的制备及其细胞毒性研究

目的聚酰胺-胺树枝状材料（PAMAM）作为药物载体具有较好的结构优势,通过聚乙二醇（PEG）修饰后,制备低毒的复合物。方法调整PAMAM与PEG比例合成PAMAM-PEG复合物,并用。H—NMR,粒径-Zeta电位仪对其进行表征;采用MTF法检测细胞的存活率和溶血试验考察细胞溶血毒性。结果本实验获得了三种PAMAM—PEG复合物;与PAMAM处理组比较,复合物处理的KB细胞存活率显著提高,细胞的溶血率显著降低,并呈剂量一效应依赖性。结论PAMAM具有一定的细胞毒性,随聚乙二醇化程度的增加,其对KB细胞体外抑制活性降低,溶血毒性降低。     

溶菌酶对皮肤癣菌抑菌作用的观察

目的：观察溶菌酶对皮肤癣菌的抑菌作用,探讨溶菌酶对丝状真菌的抗菌活性。方法：将絮状表皮癣菌、石膏样小孢子癣菌的沙保琼脂培养物分别加入4ml不同浓度的溶菌酶生理盐水中,以生理盐水为对照、研磨,混匀,作用30min,摇匀,分别吸50μl酶处理液接种相同含量溶菌酶沙保琼脂,对照组接种不含酶沙保琼脂,置25℃培养,观察处理生长现象,以无菌落形成为生长被抑制。结果：对照组与经8mg／ml溶菌酶处理的两种实验菌接种物有菌生长繁殖形成丝状菌落;经10mg／ml、20mg／ml、40mg／ml溶菌酶处理的接种物均无菌生长繁殖形成菌落。结论：溶菌酶对絮状表皮癣菌、石膏样小孢子癣菌有抑菌作用。     

溶菌酶分离纯化综合性实验的开设

介绍溶菌酶分离纯化综合性实验开设的背景、课程改革的思路以及实施过程。通过开设综合性实验,对生物工程下游技术课程中分散的实验教学内容进行改革,极大地激发了学生的学习兴趣,对其他医药院校改革生物工程下游技术实验教学有一定的参考意义。     

高强度聚焦超声对溶菌酶结构的影响

目的：探讨高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound,HIFU）对一种蛋白质—溶菌酶结构的影响。方法：使用频率0.94 MHz、声强3.25×104 W/cm2、脉冲重复频率4 Hz、占空比10%的脉冲高强度聚焦超声辐照溶菌酶溶液10 s。利用圆二色光谱（CD光谱）、荧光光谱、核磁共振氢谱（1H nuclear magnetic resonance,1H-NMR）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel,SDS-PAGE）方法,分别研究高强度聚焦超声对溶菌酶二级、三级和四级结构的影响。结果：高强度聚焦超声处理后,CD光谱无明显变化,表明高强度聚焦超声对溶菌酶二级结构影响不大;而荧光强度减弱,说明溶菌酶色氨酸周围的疏水结构发生了变化;SDS-PAGE结果显示,经高强度聚焦超声辐照后溶菌酶出现支链降解;分析 1H-NMR发现,辐照后溶菌酶色氨酸发生了化学位移。结论：高强度聚焦超声可以改变溶菌酶的高级结构。     

溶菌酶治疗儿童鼻窦炎疗效观察

目的：观察溶菌酶对儿童鼻窦炎的疗效。方法：选择200例儿童鼻窦炎患者,按病程选择的病例属于亚急性鼻窦炎,随机分成两组,治疗组加用溶菌酶肠溶片口服,对照组按常规治疗,对二组疗效进行对比研究。结果：治疗组平均治愈时间为12d,而对照组为21d,治疗组治愈率（90%）显著高于对照组治愈率（68%）（P〈0.05）。结论：溶菌酶能加快儿童鼻窦炎的痊愈。     

重组人睫状神经因子的表达、纯化以及聚乙二醇修饰

目的 研究重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的表达、纯化及聚乙二醇化修饰、纯化方法.方法 重组人睫状神经因子(rh-CNTF)工程菌经37℃培养至对数生长期,加入IPTG诱导4 h,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性后得到纯化的rh-CNTF.以体外培养鸡胚背根神经节(DRG)方法测定重组蛋白rh-CNTF的神经营养活性.用单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD-20 k)对rh-CNTF进行修饰,所得修饰产物经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶分离纯化后获得mPEG-rh-CNTF偶联物.结果 目的 蛋白占总蛋白30%左右,为包涵体,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性,获得纯度达90%的rh-CNTF.表达的rh-CNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长.修饰后的单聚PEG-rhCNTF经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶纯化后纯度达到95%.结论 确立了rh-CNTF蛋白表达纯化及PEG修饰的方法.