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相似文献
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1.
目的:优化提取基因组的方法,建立高效、简便、快速提取基因组DNA的方法,用于大批量转基因小鼠鉴定。方法:用一管酒精基因组DNA抽提法抽提基因组DNA。结果:经过分光光度法检测基因组DNA浓度、纯度及电泳分析DNA质量,显示一管酒精抽提法提取的基因组与经典酚氯仿提取法提取的基因组产量、纯度及质量没有明显差别;酶切全基因组后,2种方法获得的基因组都可以被酶完全切开;两者模板都能成功应用PCR扩增来鉴定基因敲入小鼠并可应用于基因组测序及Real-time PCR检测基因敲入小鼠中外源基因并鉴定其相对拷贝数。结论:一管酒精基因组抽提法得到的DNA质量可靠,可高效、简便、快速鉴定转基因小鼠及进行基因组DNA酶切、测序、Real-time PCR等后续实验。  相似文献   

2.
目的: 建立简便、快捷、经济的模式小鼠基因型鉴定中总DNA提取方法,达到快速鉴定大批量模式小鼠的实验目的。方法:采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度和得率并通过PCR方法比较其鉴定结果。结果:DNA得率方面苯酚抽提法最好,异丙醇沉淀法最差;纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序呈现依次递减的趋势。三种总DNA均可作为PCR反应模板,进行基因型鉴定。鼠耳煮沸法实验时间明显低于另两种方法,且所得总DNA常规-20℃保存7天、30天后依然可作为PCR反应模板使用。结论:鼠耳煮沸法操作简单且成本最低,是一种切实可行的模式小鼠基因型鉴定中总DNA提取方法。  相似文献   

3.
模式小鼠总DNA三种提取方法比较   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
目的建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。  相似文献   

4.
目的鉴定miR-7基因敲减小鼠模型,为进一步研究miR-7的生物学功能奠定基础。方法常规剪取7只miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)小鼠的脚趾和尾巴,分别用来提取基因组DNA和总RNA;剪取1只WT(wild-type,WT)小鼠的尾巴,提取其总RNA;将提取的两组小鼠的总RNA逆转录成c DNA;分别以基因组DNA和c DNA为模板,用特异性引物PCR技术扩增目的基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)片段;提取WT和miR-7KD小鼠7个不同组织器官的总RNA,利用Real-time PCR探针法检测各组织器官中miR-7成熟体的表达水平;HE染色观察miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠的形态学结构改变。结果 PCR结果显示,模型小鼠的脚趾基因组DNA和尾巴c DNA中均能扩增出载体目的基因EGFP片段;Real-time PCR结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肝脏和脾脏等组织器官miR-7成熟体的表达水平较WT小鼠均显著下调(P〈0.05);HE染色结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠形态学结构发生了明显的病理性改变。结论成功鉴定了miR-7基因敲减小鼠模型,为后续深入探讨该分子的生物学功能提供重要实验基础。  相似文献   

5.
白藜芦醇合酶基因的克隆与植物表达载体的构建   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 为获得含有白藜芦醇(Res)的转基因植物,进行了白藜芦醇合酶(RS)基因的克隆、植物表达载体构建的研究.方法 以葡萄为材料,从其叶片中提取基因组DNA,并以此DNA为模板,利用PCR法扩增得到RS基因,将此基因连接到克隆载体PGEM-T Vector,得到重组载体pT-RS;经酶切及测序鉴定后,将RS基因克隆到植物表达载体pB1121,得到重组载体pBI-RS,用PCR及酶切方法进行鉴定.结果 重组质粒pT-RS的测序结果表明,RS基因的片段大小为1.522 kb.将此片段正向插入植物表达载体pB1121的CaMV35s启动子和NOS终止子之间,对重组子进行PCR及酶切鉴定,均得到预期大小的片断,证明RS DNA与质粒pB1121已成功连接,植物表达载体pBI-RS构建正确.结论 成功扩增得到RS基因及成功构植物表达载体pBI-RS,为RS转基因生菜的研究奠定了基础.  相似文献   

6.
目的:探索更为安全可靠的基因组DNA提取方法.方法:采用改良盐洗法提取人外周血白细胞基因组DNA,与传统的酚-氯仿抽提法在提取效果、DNA纯度等方面加以比较.结果:通过对15份不同静脉血标本与酚-氯仿抽提法同步对比研究显示:改良盐洗法提取模板DNA无污染、无害,所提DNA质量好、纯度高,达到酚-氯仿抽提法所获DNA的水平;操作简单、快速,方法稳定可靠,无一例失败.结论:该方法提取的DNA可用于实验以及临床上DNA分型等研究.  相似文献   

7.
目的:对殊异韦荣菌(V.dispar)乳酸脱氢酶(LDH)基因及其前后基因进行克隆和鉴定,为龋病的预防和治疗奠定理论基础。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,利用PCR方法扩增LDH及其前后同源区序列片段,并克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109,酶切及PCR鉴定后,进行测序。结果:PCR扩增产物特异,全长2...  相似文献   

8.
目的显微注射用DNA的纯度是影响转基因动物制备成功与否的重要因素,本文建立一种可行的适用于普通实验室的纯化DNA方法,替代普遍使用的试剂盒纯化方法。方法分别使用酚-氯仿多次抽提法及常规的凝胶提取试剂盒纯化含有蚓激酶基因的DNA片段,通过显微注射技术将纯化的DNA片段导入小鼠受精卵的原核,制备转基因小鼠。根据转基因实验的结果对两种方法进行比较。结果使用两种方法纯化DNA均能获得转基因小鼠。在DNA纯度及注射卵的存活率上,两种方法无明显差别;在移植卵的出生率及转基因阳性率上,抽提法优于试剂盒法。结论本实验建立的抽提方法可以替代试剂盒方法纯化显微注射用DNA片段,在降低实验成本、简化实验条件及提高转基因阳性率方面具有优势。  相似文献   

9.
白假丝酵母菌DNA提取方法的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
王萍  厉荣玉  董群 《热带医学杂志》2008,8(12):1222-1224
目的建立一种提取白假丝酵母菌DNA的有效方法。方法采用蜗牛酶消化破壁形成原生质体,饱和酚/氯仿抽提法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR反应等进行鉴定。结果提取物经琼脂糖凝胶电泳检测到DNA主带,基本无DNA碎带,提取的DNA浓度为(1.18±0.36)μg/μl,纯度好(OD260/OD280>1.7),不用RNase酶处理,无需任何纯化即可用于PCR扩增。结论本研究中提取DNA的方法简便易行,提取物可适用于各种分子生物学研究。  相似文献   

10.
目的构建人GAPDH基因的重组质粒。方法采用PCR方法,从人全血基因组DNA中扩增出GAPDH基因,并克隆到PUCl8载体,转化入大肠杆菌DH5ct,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致。结论成功地构建了人GAPDH基因的重组质粒PUCl8-GAPDH。  相似文献   

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