背根神经节微量注射7-硝基吲唑抑制炎症性疼痛

目的:观察完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)诱导炎症性疼痛的现象,并探究背根神经节(DRG)部位注射神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对于炎症性疼痛是否有镇痛作用并简要探讨其镇痛机制?方法:小鼠足底注射10 ?滋l CFA诱导炎症性疼痛动物模型,使用von Frey纤维丝采用up-and-down的方法测定小鼠的50%足底回缩阈值(50% paw withdrawal threshold,50%PWT)作为痛觉行为学的评价指标?在小鼠的背根神经节部位微量注射10 ?滋g 7-NI观察50%PWT的变化情况?用免疫印迹的方法观察炎症相关的降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)在CFA诱导模型后?造模后给予7-NI和nNOS基因敲除小鼠造模后的表达情况?结果:与DMSO组相比,7-NI组造模后2~12 h 50%PWT显著升高?观察到CGRP的表达量在CFA诱导后增加,而在给予7-NI和nNOS基因敲除组内CGRP的表达增加可以被逆转?结论:小鼠DRG部位注射7-NI对炎症性疼痛具有镇痛作用,且炎症性疼痛中CGRP表达量的增加可能是一氧化氮(nitric oxide,NO)在DRG内起疼痛敏感性作用的下游机制?     

一氧化氮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的观察L-精氨酸(L-Arg)和氨基胍(AG)对大鼠局灶性脑缺血组织中一氧化氮(NO)含量的影响,探讨NO对脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、L-Arg组和AG组,每组15只。L-Arg组、AG组、模型组和假手术组用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型后,L-Arg组按500mg·kg-1腹腔注射1mLL-Arg注射液;AG组按100mg·kg-1术后腹腔注射1mLAG注射液;模型组和假手术组术后腹腔注射1mL灭菌生理盐水。观察缺血再灌注后12、24、72h大鼠行为学改变,血清中NO浓度和脑内一氧化氮合酶(NOS)分布的变化。结果与模型组相比,L-Arg组在缺血再灌注12h行为学评分显著降低(P<0.05),AG组在缺血再灌注24h行为学评分显著降低(P<0.05);AG组在缺血再灌注12h行为学评分高于L-Arg组(P<0.05)。与假手术组相比,模型组、L-Arg组和AG组缺血再灌注12、24、72h的NO含量均显著增加(P<0.05);与模型组相比,L-Arg组缺血再灌注12h的N0含量显著升高(P<0.05),AG组缺血再灌注24h的NO含量显著降低(P<0.05)。缺血再灌注12和24h,AG组的NO含量均显著低于L-Arg组(P<0.05);与假手术组相比,缺血再灌注12、24、72h的模型组、L-Arg组和AG组的iNOS阳性细胞均显著增加(P<0.05);与模型组相比,缺血再灌注12、24、72h的L-Arg组iNOS阳性细胞数差别无统计学意义(P>0.05);但AG组在3个时间点的iNOS阳性细胞数均显著低于模型组(P<0.05);AG组在3个时间点的iNOS阳性细胞数均低于L-Arg组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注损伤后脑组织内NO和NOS的表达随时间动态变化,且NO在参与缺血性脑损伤过程中可能具有双重作用。L-Arg、AG通过不同的作用机制对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

人参白虎汤对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血管舒缩功能的影响

目的:研究链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠血管舒缩活性改变与一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)、内皮超极化因子(EDHF)等的关系.观察人参白虎汤复合活性部位(RB)的保护作用.方法:采用STZ(60 mg/kg,ip)造糖尿病大鼠模型,合格动物进行分组,分别每日用RB 100,50 mg/kg ig及格列本脲(Gly 10 mg/kg·d-1 ig)干预治疗.75 d后分别记录在L-精氨酸(L-Arg),L-硝基精氨酸(L-NOArg NLA)及吲哚美辛(Ind)存在(或不存在)下大鼠胸主动脉环对苯肾上腺素(Phe )及乙酰胆碱(Ach)引起的收缩及舒张反应.结果:Phe引起的最大收缩,DM组(1.22±0.08 g)高于正常组(0.86±0.08 g)(P<0.05).NLA阻断NO合成后,Phe引起的最大收缩增加,增加部分反应NO基础释放.DM组Phe引起的最大收缩增加(0.02±0.02 g)低于正常组(0.25±0.03 g)(P<0.01),说明DM组NO基础释放较正常组减少92 %.L-Arg对抗Phe收缩活性,模型组及正常组Phe收缩分别减少(0.04±0.023 g)、(0.29±0.07 g)(P<0.05),减少部分反应NO的最大释放,与正常组相比DM组NO的最大释放减少86%.与正常组(49.37±5.95)%相比,Ach在模型组引起的舒张效应明显下降(26.63±5.93)%(P<0.05).PGI2及EDHF引起的舒张都有不同程度损伤.RB治疗后能明显抑制主动脉环痉挛,改善内皮舒张功能.结论:糖尿病模型大鼠血管收缩及舒张功能异常,人参白虎汤复合活性部位能够抑制内皮细胞损伤,改善血管内皮细胞功能,可用于治疗糖尿病血管并发症.     

一氧化氮对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后细胞死亡方式的影响

目的:研究一氧化氮(NO)对缺血性半暗带神经元死亡方式的影响。方法:在大鼠局灶性脑缺血/再灌注后不同时段上,以光镜、电镜和TUNEL法观察半暗带内细胞死亡方式,分别应用神经源性一氧化氮合酶(nNOS)、免疫源性一氧化氮合酶(i NOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)、氨基胍(AG),观察其对死亡的影响。结果:局灶性脑缺血/再灌注后半暗带内神经元死亡以凋亡方式为主,7-NI、AG可使细胞凋亡数量明显减少(方差分析P<0.05)。结论:局灶性脑缺血/再灌注半暗带内神经元死亡以凋亡为主,抑制NO的形成可减少神经元凋亡的数量。     

肢体缺血再灌注后肺组织中NOS的表达

（1）目的 观察肢体缺血再灌注后肺组织中NOS同工酶活性，分布和mRNA表达的变化；（2）方法 复制肢体缺血再灌注模型。实验动物随机分为4组；正常对照组（Control组），损伤组（IR组），L-精氨酸组（L-Arg组）和氨基胍组（AG组），用免疫组织化学方法检测肺组织中NOS蛋白的表达；用RT-PCR方法检测肺组织中NOSmRNA的表达。（3）结果 免疫组织化学结果显示，Control组iNOS染色少有阳性；IR组iNOS染色阳性，染色阳性细胞主要分布在支气管上皮细胞，支气管平滑肌细胞，支气管周围浸润的中性粒细胞也呈阳性表达；AG组iNOS染色较IR组减弱；L-Arg组则无明显差异。eNOS染色在Control组呈阳性，主要分布于毛细血管内皮细胞，其余3组染色均减弱，RT-PCR结果显示，iNOSmRNA的表达在Control组较少，IR组呈高表达，AG组，L-Arg组表达与IR组相比无明显差异；eNOSmRNA表达降低，肺组织中NO的水平增高；给予外源性的L-Arg增加NO的生成，应用AG不影响NOSmRNA的表达，只是 在蛋白水平对iNOS有抑制作用。     

脑缺血／再灌注介导大鼠海马CA1区nNOS巯基去亚硝基化作用的研究

目的：探讨大鼠全脑缺血/再灌注介导的大鼠海马CA1区神经型一氧化氮合酶（ nNOS）巯基去亚硝基化对神经元损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组（ S组）、脑缺血/再灌注组（ I/R组）、给药组（ GSNO组、7-NI组、MK801组、NS102组、GYKI组）及溶剂对照组（生理盐水组、DMSO组）。采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血/再灌注模型。运用生物素转化法检测蛋白质的巯基-亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法、焦油紫染色方法对nNOS巯基去亚硝基化水平以及大鼠海马神经元细胞的损伤进行研究。结果与S组相比,I/R组nNOS巯基亚硝基化水平明显降低（P＜0．05）;与I/R组相比,GSNO组、7-NI组以及MK801组nNOS巯基亚硝基化水平显著增高（P＜0．05）,但GYKI组、NS102组、DMSO组以及生理盐水组与I/R组相比,差异无统计学意义。说明外源性一氧化氮（NO）供体GSNO、nNOS抑制剂7-NI、N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体抑制剂MK801能够抑制nNOS的去亚硝基化,对神经元起保护作用。结论大鼠全脑缺血/再灌注所致的大鼠海马CA1区nNOS巯基去亚硝基化在神经细胞损伤中有作用,其去亚硝基化是通过NMDA受体起作用;外源性NO供体GSNO、nNOS抑制剂7-NI也能够抑制nNOS的去亚硝基化从而对神经元起保护作用。     

7-硝基吲唑对深低温停循环大鼠的脑保护作用

目的:探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在深低温停循环(deep hypothermic circulatory arrest,DHCA)大鼠中的脑损伤作用。方法:154只健康SD大鼠随机分为4组:假手术组、DHCA组、7-硝基吲唑(7-NI)组和花生油组,后3组再分为DHCA术后2,6,12和24 h 4个亚组。假手术组与24 h亚组各16只大鼠,其余亚组各10只大鼠,冰块包埋体温降至21℃时阻断双侧颈总动脉建立DHCA模型。观察特异性nNOS抑制剂7-NI对脑水肿,脑组织光镜、电镜结构和脑组织丙二醛含量的影响。结果:与DHCA组相比,7-NI能减轻脑水肿(P<0.05),改善脑细胞形态,并能降低丙二醛含量(P<0.05)。结论:nNOS在DHCA脑损伤中起细胞毒性作用,7-NI有希望延长DHCA安全时限。     

一氧化氮合酶在糖尿病大鼠视网膜中表达模式的研究

目的 研究一氧化氮合酶(NOS)在8周糖尿病大鼠视网膜的表达,探讨其与一氧化氮在糖尿病视网膜病变(DR)中可能的分子作用机制.方法 采用限制片段差异显示PCR(RFDD-PCR)技术建立正常和8周糖尿病大鼠视网膜基因表达谱,经生物信息学分析两者差异,初步确定NOS三种亚型-eNOS、nNOS和iNOS为DR相关基因,并以半定量RT-PCR和免疫组化方法进行验证.结果 RFDD-PCR结果显示,糖尿病组eNOS和nNOS表达下调,iNOS表达上调.RT-PCR结果显示,糖尿病组eNOS和nNOS表达比正常组明显降低(eNOS:0.23±0.03,0.32±0.03,P＜0.05;0.25±0.02,0.36±0.02,P＜0.05),iNOS比正常组明显增高(0.27±0.02,0.20±0.03,P＜0.05).免疫组化结果显示,正常组eNOS、nNOS和iNOS阳性细胞均见于内核层(INL)和节细胞层(GCL),eNOS阳性细胞也分布于血管内皮层;糖尿病组eNOS和nNOS阳性细胞较正常组明显减少(eNOS:14.33±3.19,22.13±3.60,P＜0.05;nNOS:21.87±3.62,34.40±7.09,P＜0.05),iNOS较正常组明显增多(17.60±2.58,11.73±2.70,P＜0.05).结论 eNOS、nNOS和iNOS表达变化与DR发生发展有关.     

早期选择性抑制神经元型一氧化氮合酶对鼠脑外伤的治疗作用

目的 探讨选择性抑制神经元型一氧化氮合酶(nN0s)对脑外伤的治疗作用。方法 60只SD大鼠建立在自由落体脑外伤模型基础上，随机平均分成6个小组：3组大鼠分别在伤后3h,6h,9h给予nNOS的选择性抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)，另3组于伤后对应时间给予生理盐水作为对照，大鼠在伤后24h取脑检测其NOS活性、Ca^2 含量、含水量。结果 7-NI于伤后第3h,6h给药组，其脑组织中NOS活性、Ca^2 含量、含水量均低于盐水对照组，7-NI于伤后第9h给药组上述指标与盐水对照组无显著差异。结论 脑外伤后及早使用选择性nNOS抑制剂具有潜在治疗作用。     

7-NI和AMT在脑缺血再灌注中保护作用的比较

目的探讨神经型一氧化氮合酶（nNOS）的抑制剂7-硝基吲唑（7-nitroindazole,7-NI）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的抑制剂AMT（2-Amino-5,6-dihydro-6-methyl-4H-1,3-thiazine）对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区细胞的保护作用.方法建立SD大鼠全脑缺血动物模型,处理组大鼠每组在缺血前20min给药,缺血15 min后再灌注5天,应用焦油紫染色方法检测7-NI和AMT对大脑海马CA1区细胞的保护作用.结果假手术组海马CA1区细胞无死亡,缺血对照组几乎全部死亡,7-NI组保护37.4%,DMSO组几乎全部死亡;AMT组保护82.3%;生理盐水组几乎全部死亡.结论AMT对大鼠脑缺血复灌后海马CA1区细胞的保护作用大于7-NI的保护作用.     

神经元型一氧化氮合酶在缺氧缺血新生大鼠脑组织的表达变化及其抑制剂7-NI的脑保护作用

目的　探讨神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)及其选择性抑制剂 7 硝基吲唑 (7 NI)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)中的作用。方法　制备新生大鼠HIBD模型 ,用RT PCR的方法测定HIBD组缺氧开始后 0h、1h、2h、6hnNOSmRNA的表达 ,同对照组相应时点比较。测定HIBD组、7 NI组缺氧开始后 1h、2h、6h、8h以及对照组一氧化氮合酶 (NOS)、一氧化氮 (NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)的含量并作相应比较 ,另用TUNEL法比较 3组缺氧结束后 2 4h神经细胞凋亡的情况。结果　在缺氧开始后 2h和 6hHIBD组nNOSmRNA表达高于对照组 (P <0 0 5 ) ,且以 6h表达更高 (P <0 0 5 )。HIBD组各时点与对照组比较NOS、NO、MDA值升高 (P <0 0 1) ,SOD值下降 (P <0 0 1) ,而 7 NI组各时点MDA、NOS和NO值较HIBD组下降 (P <0 0 5 ) ,SOD值升高 (P <0 0 5 ) ,1h时点测定值接近对照组水平。对照组未见明显细胞凋亡情况 ,7 NI组比HIBD组凋亡减少 ,差异具有显著性 (P <0 0 0 1)。结论　nNOS参与了新生鼠HIBD的形成 ,其抑制剂 7 NI通过抗氧化和抑制凋亡发挥了神经保护作用。     

脑源性神经营养因子对小鼠回肠及结肠平滑肌收缩活动的影响及其机制

目的观察不同浓度脑源性神经营养因子(BDNF)对小鼠离体回肠和结肠平滑肌肌条收缩活动的影响,探讨蛋白酪氨酸激酶受体B(TrkB)-磷脂酶C(PLC)/三磷酸肌醇(IP3)信号通路在BDNF影响肠道平滑肌收缩过程中的作用。方法制备小鼠回肠、近端结肠和远端结肠平滑肌纵肌条,观察不同浓度BDNF(1×10-8、1×10-7mol/L)对小鼠离体肠道肌条收缩活性的影响,并分别观察TrkB抗体、新霉素及肝素3种TrkB-PLC/IP3信号通路阻滞剂孵育肌条后,BDNF对肌条收缩活动的影响。结果 BDNF(1×10-8、1×10-7mol/L)对小鼠回肠和结肠平滑肌离体肌条的收缩具有明显的兴奋效应,与对照组相比肌体的收缩振幅增加(P<0.05)。TrkB抗体、新霉素及肝素明显减弱BDNF(1×10-7mol/L)对肌条收缩的兴奋作用,其张力效应值与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。结论 BDNF可兴奋小鼠肠道平滑肌肌条的收缩活动,TrkB-PLC/IP3信号通路在BDNF影响肠动力过程中发挥重要作用。     

紫苏梗对大鼠离体结肠肌条收缩运动的影响

[目的]观察紫苏梗水提液对正常及肢体缺血-再灌注大鼠结肠环形肌条收缩波平均振幅和张力的影响。[方法]利用肢体缺血-再灌注大鼠制备胃肠动力障碍(FD)模型。取大鼠结肠环形肌条,置于恒温灌流肌槽内,通过多导生理记录仪记录紫苏梗在结肠环形肌条收缩活动中的作用。[结果]紫苏梗水提液能升高FD模型大鼠结肠环形肌条收缩波平均振幅、降低结肠张力,对正常大鼠则无明显影响。[结论]紫苏梗水提液对FD模型大鼠结肠环形肌条收缩运动具有明显兴奋作用,而对正常大鼠结肠收缩运动无兴奋作用。     

大鼠脑创伤后一氧化氮合酶对学习和记忆功能的影响

目的：探讨神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）和诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxidesynthase,iNOS）对大鼠创伤性颅脑损伤（traumatic braininjury,TBI）后空间学习和记忆的影响及7-硝基吲哚（7-nitroindazole,7．NI）和氨基胍（aminoguanidine,AG）的治疗作用。方法：将250只Wistar大鼠随机分成5组,按照Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性TBI,免疫组化检测海马CA1区nNOS和iNOS表达情况,原位细胞DNA断裂检测（TUNEL）法检测海马CA1区凋亡细胞,采用Morris水迷宫测试各组大鼠的空间学习和记忆情况。结果：大鼠TBI后海马CA1区存在nNOS和iNOS明显表达,nNOS在伤后6h左右达高峰（P〈0．05）,iNOS在伤后3天左右达高峰（P〈0．05）。TUNEL阳性细胞于伤后3天达高峰（P〈0．05）,伤后6h7-NI治疗组和联合治疗组与创伤组比较减少明显（P〈0．05）,伤后3天各治疗组均减少,且以联合治疗组减少最为明显（P〈0．05）。结论：大鼠TBI后学习和记忆功能下降与NOS过表达引起的神经毒性作用有关。7-NI和AG通过抑制nNOS和iNOS的活性或表达起到神经保护作用,改善了大鼠的学习和记忆功能。     

补气类中药对大鼠离体胃平滑肌条的作用

目的：选用黄芪，党参，太子参，甘草、白扁豆和黄精７味常用补气类中药水煎剂，观察对大鼠离体胃不同部位平滑肌条的作用。方法：制备大鼠离体胃各部位的平滑肌条，放置在灌流肌槽，中，用生理记录仪同时记录肌条的收缩活动。结果７味中药均增加大嫌胃底纵、环行肌条的张力，党参，甘草，白术，黄精可增加胃体纵行肌的张力，其余补气类中药对胃体，胃窦肌条的收缩波平均振幅及幽门环行肌运动指数呈现不同的影响。结论：７种补气类中     

芳香化湿类中药对大鼠离体胃平滑肌运动的影响

目的：观察藿香、佩兰、苍术、砂仁、厚朴和草蔻对不同部位离体胃平滑肌条运动的影响。方法：用生理记录仪同时记录安置在各恒温灌流肌槽中的胃各部位平滑肌条的收缩活动。结果：１藿香、佩兰和苍术可增加大鼠胃底纵、环行肌条的张力；２藿香和佩兰可增加胃体纵行肌条的张力，砂仁减小胃体纵、环行肌收缩波平均振幅；３砂仁减小胃窦纵、环行肌条收缩波平均振幅；４藿香增加幽门环行肌条的运动指数，而砂仁则减小该部位的运动指数。结论：芳香化湿类中药对胃各部位肌条的收缩活动即有兴奋作用又有抑制作用。     

党参和丹参对兔离体主动脉平滑肌运动的影响

目的 观察党参和丹参水煎对兔胸主动脉血管平滑肌条舒缩活动的影响。方法 采用离体血管张力实验法,观察党参和丹参对ＮＥ和ＫＣＬ所致肌条收缩活动的影响及与内此细胞之间的关系。结果 （１）４０ｍｇ／ｍｌ党参对ＮＥ和ＫＣＩ所致免胸主动脉血管平滑肌条肌收缩量效曲线无明显影响,俣可抑制１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＮＥ 引起的内皮完整的主动脉肌条的预收缩作用（Ｐ〈０．００１）,去内皮或加入Ｌ－ＮＮＡ后其舒张作用明显减弱