miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响?方法:检测乳腺癌细胞株MCF-7?SKBr3和MDA-MB-231中miR-342-3p的表达?应用脂质体转染方法,转染hsa-miR-342-3p模拟物到低表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(mimic转染组),同时设立阴性对照(mim-NC转染组);转染miR-342-3p抑制物到高表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(inhibitor转染组),同时设立阴性对照(inhi-NC转染组)?mimic转染组?mim-NC转染组?inhibitor转染组和inhi-NC转染组细胞,分别加入浓度为2 ?滋mol/L的紫杉醇?顺铂及4 ?滋mol/L的阿霉素的进行培养,应用CCK8法检测药物作用48 h后细胞增殖率的变化?结果:以SKBr3为参照,miR-243-3p在MCF-7细胞中的相对表达倍数是126.000,在MDA-MB-231细胞中的相对表达倍数是0.017?mimic转染组细胞与紫杉醇?顺铂孵育48 h后,肿瘤细胞增殖率低于mim-NC转染组,差异有统计学意义(P < 0.05),但与阿霉素孵育后细胞增殖率与mim-NC转染组差异无统计学意义(P > 0.05);inhibitor转染组细胞与紫杉醇?顺铂和阿霉素孵育48 h后,肿瘤细胞的增殖率高于inhi-NC转染组,差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231?MCF-7对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但提高miR-342-3p表达不能增加MDA-MB-231细胞对阿霉素的化疗敏感性,降低miR-342-3p的表达却可以减弱MCF-7细胞对阿霉素的化疗敏感性?     

MiR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及其机制

目的探讨miR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及机制。方法选取2016年1月至2017年7月宣城市中心医院保存的乳腺癌组织和相应的正常乳腺组织(距肿瘤边缘> 5 cm)标本各50例,培养乳腺癌MCF-7细胞和正常乳腺上皮细胞MCF-10A,采用反转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织、正常乳腺组织、MCF-7细胞及MCF-10A细胞中miR-152-3p及PIK3CA mRNA表达。培养MCF-7细胞,待细胞融合度达30%～50%时将细胞分为空白组、阴性对照组、miR-152-3p mimic组、miR-152-3p inhibitor组、si-PIK3CA组和miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组,空白组细胞不转染任何序列,阴性对照组细胞转染miR-152-3p阴性对照质粒,miR-152-3p mimic组细胞转染miR-152-3p mimic质粒,miR-152-3p inhibitor组细胞转染miR-152-3p inhibitor质粒,si-PIK3CA组细胞转染si-PIK3CA质粒,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组细胞共转染miR-152-3p inhibitor质粒和si-PIK3CA,转然后继续培养24～48 h;采用Western blot法检测各组MCF-7细胞中PIK3CA、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38和E-cadherin蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测各组MCF-7细胞增殖活性,划痕实验检测各组MCF-7细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测各组MCF-7细胞侵袭能力。结果乳腺癌组织中miR-152-3p相对表达量显著低于正常乳腺组织,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于正常乳腺组织(P <0. 05)。MCF-7细胞中miR-152-3p相对表达量显著低于MCF-10A细胞,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于MCF-10A细胞(P <0. 05)。与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0. 05)。细胞增殖能力实验结果显示,48、72、96 h时,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞增殖能力显著低于空白组和阴性对照组,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞增殖能力显著高于空白组和阴性对照组(P <0. 05); 48、72、96 h时,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,空白组与阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05);与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著增强(P <0. 05); miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 miR-152-3p在乳腺癌组织中低表达,miR-152-3p可能参与了乳腺癌的发生与发展,miR-152-3p可能通过抑制PIK3CA表达而抑制MAPK信号通路的激活,进而抑制乳腺癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。     

miR-671-3p靶向调控CKAP4对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响

目的探讨miR-671-3p靶向调控细胞骨架相关蛋白4(CKAP4)对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响。 方法收集术后脑胶质瘤组织及配对癌旁正常组织标本,检测其miR-671-3p和CKAP4表达水平。将人脑胶质瘤U251细胞株分为miR-671-3p NC组、miR-671-3p mimic组和miR-671-3p inhibitor组,并转染相应质粒。采用实时荧光定量PCR测定miR-671-3p表达,CCK-8实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移能力。Western blotting测定CKAP4表达水平。 结果人脑胶质瘤组织中miR-671-3p、CKAP4表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05)。细胞增殖率、迁移率miR-671-3p mimic组高于miR-671-3p NC组,miR-671-3p inhibitor 组低于miR-671-3p NC组(P＜0.05)。miR-671-3p对CKAP4具有靶向调节作用。miR-671-3p mimic组CKAP4蛋白表达量低于miR-671-3p NC组,miR-671-3p mimic组低于miR-671-3p inhibitor组(P＜0.05)。 结论miR-671-3p可靶向调控CKAP4促进人脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力。     

miR-18b增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂化疗敏感性的作用及其机制

目的:探讨miR-18b在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂(DDP)化疗敏感性中的作用,阐明其可能的机制。方法:乳腺癌MDA-MB-231细胞根据转染条件分为MDA-MB-231组、MDA-MB-231+DDP组、MDA-MB-231-NC组、MDA-MB-231-NC+DDP组、MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231 mimic+DDP组。采用生物信息学方法预测的miR-18b的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-18b与靶基因3'UTR的结合;应用qRT-PCR法检测各组MDA-MB-231细胞中miR-18b的表达水平;Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中ATM蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞的生长抑制率。结果:荧光素酶实验报告验证ATM为miR-18b的靶基因,并与ATM 3'UTR序列部分结合;与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231 mimic+DDP组细胞中miR-18b的表达水平升高(P<0.05);Western blotting法检测,与MDA-MB-231组比较,MDA-MB-231+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平升高(P<0.05);与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231 mimic组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);与MDA-MB-231-NC+DDP组比较,MDA-MB-231 mimic+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);CCK-8法检测,与MDA-MB-231 NC组比较,经不同浓度DDP作用后,MDA-MB-231 mimic组细胞生长抑制率均升高。结论:miR-18b通过靶向调控ATM蛋白增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对DDP的化疗敏感性。     

miRNA-376c-3p调控CASP-7表达抑制人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞生长和迁移

目的:探讨miRNA-376c-3p(miR-376c-3p)对人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞迁移、增殖和凋亡的影响及其可能的调控机制。方法:qRT-PCR法检测13例胃间质瘤患者肿瘤和癌旁对照组织中miR-376c-3p表达;将miR-376c-3p类似物(mimic)、抑制物(inhibitor)和各自阴性对照分别转染GIST-T1细胞,另设空白对照组;qRT-PCR检测转染细胞miR-376c-3p表达;然后用CCK8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力;通过Western Blot及qRT-PCR法检测miR-376c-3p对CASP-7(Caspase-7)表达量的影响。结果:在胃间质瘤患者癌组织中,miR-376c-3p表达水平显著降低,为癌旁对照组织的58.7%(P<0.01);qRT-PCR显示:转染miR-376c-3p mimic后,GIST-T1细胞miR-376c-3p表达明显上调(P<0.01),而转染miR-376c-3p inhibitor后表达受抑制(P<0.01);miR-376c-3p mimic转染组细胞增殖活性、迁移能力明显抑制(P<0.01),凋亡率增强(P<0.05);另外miR-376c-3p过表达后CASP-7mRNA和蛋白水平出现上调,相反地,miR-376c-3p抑制却导致CASP-7mRNA和蛋白水平下调(P<0.05)。结论:在人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞中miR-376c-3p可以间接调控CASP-7的表达,抑制细胞增殖、迁移能力,促进细胞凋亡。     

SCR7对三阴性乳腺癌顺铂化疗的增敏作用研究

目的：探讨SCR7对三阴性乳腺癌顺铂化疗的增敏作用。方法：选用三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞分为空白对照组、10μmol/L顺铂对照组和联合组（10μmol/L顺铂+10、20和40μmol/L SCR7）,采用CCK-8法检测细胞活性并计算细胞增殖抑制率;取对数期TNBC MDA-MB-231细胞构建三阴性乳腺癌移植瘤小鼠模型,建模成功后荷瘤裸鼠随机分为对照组、SCR7组,顺铂组、SCR7+顺铂组;饲养24 d后,观察比较各组荷瘤鼠肿瘤质量、瘤体体积的变化,计算肿瘤抑制率;苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察瘤体组织细胞形态学变化;原位末端标记法（in situ end labeling,TUNEL）检测乳腺癌肿瘤组织的凋亡;采用Western blot检测X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementing 1,XRCC1)、多聚（ADP核糖）聚合酶1[poly(adp ribose) polymerase 1,PARP1]蛋白表达。结果：联合组细胞增殖抑制率均高于对照组（P<0.05）,且随SCR7质量浓...     

miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响

目的 探究miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为5组,即MDA-MB-231组、miR-21 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、siRNA-E2F1组和siRNA-NC组。检测细胞中miR-21表达（RT-PCR法）;分别检测细胞增殖（MTT法）、侵袭（Transwell法）、迁移（划痕实验）和凋亡能力（流式细胞仪）;检测细胞中E2F1蛋白表达;检测miR-21与E2F1的靶向关系（双荧光素酶实验报告）。结果MDA-MB-231细胞中miR-21表达明显高于MCF10A细胞（P<0.05）;miR-21 inhibitor组细胞细胞中miR-21表达明显低于MDA-MB-231组（P<0.05）。与MDA-MB-231组相比,miR-21 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭能力、迁移能力和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显升高（P<0.05）;MDA-MB-231组细胞吸光度值、侵袭、迁移、凋亡能力和细胞中E2F1蛋白表达与miR-NC inhibitor组相比差异无统计学意义（P>0.05）。预测软件显示E2F1的3′UTR端与miR-21有碱基互补结合点位。通过向MDA-MB-231细胞中转染野生型E2F1（E2F1-WT）时,miR-21组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）;miR-21组和miR-NC组突变体荧光素酶活性相比差异无统计学意义（P>0.05）。与siRNA-NC组相比,siRNA-E2F1组细胞增殖、侵袭、迁移和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P<0.05）。与miR-NC inhibitor组裸鼠移植肿瘤第8天时相比,miR-21 inhibitor组裸鼠肿瘤体积明显降低,肿瘤抑制率为45.3%（P<0.05）。结论低表达miR-21可抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭,促进凋亡,且抑制裸鼠移植瘤体积,其作用机制可能与抑制E2F1表达有关。     

miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇药物敏感性中的作用

目的 研究miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇（PTX）药物敏感性中的作用。方法 构建稳定转染细胞株,根据细胞转染情况分为未转染组、miR-阴性对照（miR-NC）组和miR-574-3p过表达组,细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测不同浓度紫杉醇作用下细胞增殖情况（未转染组设置亚组：空白组和对照组）,实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测色素框同源物2（CBX2）mRNA的表达水平,Western blot法检测CBX2蛋白的表达水平,Transwell检测细胞侵袭迁移力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果 CCK-8法检测结果显示,紫杉醇对各组三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制呈一定的浓度依赖性,但不同浓度紫杉醇（0.05、0.15、0.45、1.35、4.05、8.10 μmol/L）作用下,miR-574-3p过表达组生长抑制作用均高于对照组与miR-NC组（P＜0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,2.10 μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2 mRNA表达水平低于未转染组和miR-NC组（P＜0.05）; Western blot结果显示,2.10 μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2蛋白表达水平低于未转染组和miRNC组（P＜0.05）; Transwell检测及划痕实验检测结果显示,2.10 μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞侵袭迁移能力低于未转染组和miR-NC组（P均＜0.05）。结论 miR-574-3p可能通过下调CBX2增强三阴性乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性,抑制三阴性乳腺癌细胞的侵袭迁移能力。     

As2O3对人乳腺癌移植瘤增殖凋亡的影响

目的观察As2O3对人乳腺癌裸鼠移植瘤的增殖和凋亡作用.方法建立人乳腺癌裸鼠移植瘤的模型,随机分为4组,经尾静脉iv用药7 d,观察各组动物及肿瘤的情况.结果①实验组1、2和顺铂组的肿瘤标本中均可见有明显的凋亡峰,凋亡率分别是12.6%、40.0%和11.3%.实验组1、2的异倍体峰明显低于阴性对照组和顺铂组.②实验组1、2和顺铂组的Ki-67-LI比阴性对照组低,有显著性差异(P< 0.05).但实验组1、2和顺铂组之间差异无显著性(P> 0.05).实验组1、2的bcl-2表达低于阴性对照组、顺铂组 (P<0.05).③实验组1、2比阴性对照组、顺铂组的凋亡指数高 (P<0.05).实验组2比实验组1的凋亡指数高(P< 0.05).④在用药期间As2O3对鼠造血系统功能影响不大.As2O3亦不影响裸鼠体质量的增加.结论As2O3对人乳腺癌裸鼠移植瘤有明显抑制肿瘤细胞增殖生长、下调肿瘤细胞bcl-2的表达、诱导肿瘤细胞凋亡的作用,且毒副作用不明显.     

miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor）,YWHAQ干扰组（si-YWHAQ）,以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶向调节YWHAQ（P<0.01）。相对于 SKBR-3 细胞,SKBR-3/PR 细胞中 miR-16-5p 表达水平降低（P<0.01）,YWHAQ 表达水平增高（P<0.05）。Western blot 结果显示 miR-16-5p 类似物能够抑制 YWHAQ 表达,miR-16-5p 抑制剂能够促进 YWHAQ 表达（P<0.01）。相对于对照组,miR-16-5p类似物能够将耐药细胞阻滞在G0/G1期（[ 55.61±1.99）% vs（43.06±1.53）%,P<0.01],抑制细胞增殖和迁移能力（P<0.01）,促进细胞凋亡 （[ 10.37±0.23）% vs（3.81±0.88）%,P<0.01],YWHAQ干扰组细胞迁移能力下降,凋亡率升高,miR-16-5p类似物组与YWHAQ干扰组细胞的Bax蛋白表达增加,YWHAQ与Bcl-2蛋白水平降低。相对于miR-16-5p 类似物组,联合组细胞迁移能力被抑制（75.75±29.85 vs 181.11±11.71,P<0.01）,凋亡率显著升高（[ 24.20±2.43）% vs （14.10±4.47）%,P<0.01]。结论 miR-16-5p能够通过靶向调节YWHAQ调控Bcl-2/Bax的表达,从而改变乳腺癌紫杉醇耐药细胞的生物学活性。