黄芪抑制EB病毒壳抗原在体外细胞中表达的作用

目的：探讨黄芪抑制EB病毒（EBV）壳抗原在体外细胞中表达的作用。方法：采用间接免疫酶法研究黄芪提取液对B95－8细胞壳抗原表达的抑制作用。结果：无毒性浓度的黄芪提取液对巴豆油。正丁酸联合激发的EB病毒壳抗原表达有明显抑制作用。抑制率随药物浓度增加而提高,结论：黄芪抑制EBV壳抗原表达效果好,有望在鼻咽癌预防方面起一定作用。     

鱼芩解毒丸体外抗HIV-1活性探讨

目的：探讨医院制剂鱼芩解毒丸的体外抗HIV-1病毒活性。方法：采用MTT比色法检测鱼芩解毒丸的细胞毒性;采用细胞病变法检测鱼芩解毒丸对HIV-1急性感染的抑制活性;采用HIV-1ⅢB慢性感染细胞的p24抗原表达抑制实验检测鱼芩解毒丸的抗H1V-1活性。结果：鱼芩解毒丸抑制HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为0.035~0.070 mg·mL-1,治疗指数为42.79~57.03 mg·mL-1;鱼芩解毒丸抑制HIV-1ⅢB感染C8166的p24抗原表达的EC50为0.070~0.090 mg·mL-1,治疗指数22.82~28.51 mg·mL-1。结论：鱼芩解毒丸具有一定的抗HIV-1活性。     

HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的比较

目的 由于检测SIV p27抗原试剂盒来源困难,有时不稳定,鉴于HIV-1 p24与SIVp27有较强的交叉抗原,本研究比较HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原得出的结果是否存在一定的相关性.方法 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒定性和定量检测样品中SIV p27抗原,并对检测结果进行回归和相关分析.结果 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的灵敏度分别是150 pg/mL和62.5 pg/mL.两种试剂盒检测病毒液和血浆中SIV p27抗原的定性结果一致.定量结果的统计分析得出病毒液的直线回归决定系数R2=0.857,直线相关系数r=0.926,P＜0.01,直线正相关程度较高;血浆的直线回归决定系数R2=0.512,直线相关系数r=0.716,P＜0.05,直线正相关程度较低.结论 HIV-1 p24 ELISA试剂盒能够替代SIV p27 ELISA试剂盒定性检测病毒液和血浆中SIV p27抗原,但只能定量检测病毒液中SIV p27抗原.     

融合蛋白XE-TNFαm2对SIV的抑制作用

目的检测XE-TNFαm2靶向融合蛋白作为新型生物性药物抑制SIV病毒感染CEMx-174细胞的作用。方法 XE-TNFαm2、SIV和CEMx-174细胞共同培养,在培养的第5天,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中P27抗原水平,间接免疫荧光法(IFA)和流式细胞仪测试SIV阳性细胞,应用PE-annexin V凋亡检测试剂盒测试细胞存活率和凋亡率。结果 XE-TNFαm2在细胞安全最大药物浓度50μg/mL时,对SIV病毒抑制率为40%。细胞早期凋亡率在XE-TNFαm2浓度6.25μg/mL时为37.1%。结论融合蛋白XE-TNFαm2对SIV病毒有一定的抑制作用,其中部分作用推测是因通过诱导感染细胞产生凋亡导致病毒死亡。     

自切割核酶介导的转基因淋巴细胞有效抑制猴免疫缺陷病毒的感染和致病

目的 获得抗猕猴免疫陷病毒（SIV）转基因的淋巴细胞,方法 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶,人工合成的自切核酶基因扩增并克隆在pBluescirpt SK和Xhol-Sall 位点,通过连续4次克隆获得10拷贝核酶基因的载体,转染前测定自切割酶的体外活性并将之转移至哺乳动物表达载体上,脂质体法转染含酶基因的表达载体,转染细胞在含400mg/L G418的培养介质中筛选,转基因细胞对猴免疫缺陷病毒的抗性通过免疫荧光测定来估测,结果 37度孵育15 min后85％的十体核酶自切割成单体核酶,在初始25min的反式切割反应中尽管10体核酶摩尔数不足单体核酶十分之一,但十体核酶平均超过单体核酶13．31％的切割产物。Northern点杂交证明单体核酶基因和十体酶基因已经转入细胞并在细胞中获得表达,SIV攻毒试验表明,SIV接种6天后转染单体酶基因的细胞生长正常,不出现融合细胞,绝大多数转染十体基因的细胞生长良好,只发现极少数的融合细胞,转染单体核酶基因细胞的SIV抗原性细胞抑制率达到100％,转染十体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率为91．2％,转空表达载体细胞为48％,结论 转自切割核酶基因的细胞对SIV的感染和致病均表现较强的抗性,但单体核酶比10体核酶对SIV的感染和致病表现出更好的抑制效果。     

蟾蜍灵诱导白血病HL-60细胞分化及相关基因表达

目的：研究中药蟾酥中蟾毒成分蟾蜍灵(bufalin)的抗癌机制。方法：以早幼粒白血病HL－60细胞为靶细胞，应用电镜技术观察bufalin诱导的细胞分化，免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21^WAF1的表达。结果：0．001μmol/L bufalin作用HL－60细胞，细胞向粒细胞方向分化，p21^WAF1表达显著升高，而PCNA表达显著下降，二者显著负相关（P＜0．01）。结论：bufalin诱导HL－60细胞分化，与其上调p21^WAF1的表达、下调PCNA表达有关。     

Cdk2及其抑制因子p27Kip1在胃癌中的表达和意义

目的：探讨细胞周期素依赖性激酶2（Cdk2)及其抑制因子p27^Kipl与胃癌生物学行为的关系。方法：采用免疫组织化学S－P法对60例胃癌组织原发灶和淋巴结转移灶进行Cdk2，p27^Kipl免疫组化染色，腹水或腹腔冲洗液先脱落细胞学检查。结果：Cdk2阳性表达率56．67％（34／60），阳性细胞定位于细胞核和细胞浆，以Ⅲ，Ⅳ期表达率较高（P＜0．01），与胃癌大体类型及浆膜分型关系密切（P＜0．01）；p27^Kipl阳性表达率为43．33％（26／60），阳性细胞定位于细胞浆，在高分化及Ⅰ、Ⅱ期胃癌高表达（P＜0．05），且与淋巴细胞转移密切相关（P＜0．01），Cdk2，p27^Kipl同时阳性表达19例，占31．67％（19／600。结论：Cdk2与胃癌浸润深度，淋巴结转移呈正相关，p27^Kipl表达与胃癌浸润深度，淋巴结转移呈负相关。     

肾综合征出血热病毒在体外培养的人肾小球系膜细胞中的复制

为探讨肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）能否感染体外培养的人肾小球系膜细胞及在其中复制，能否引起细胞病变，方法：用ＨＦＲＳＶ７６－１１８株，ＳＲ－１１株和陈株分别攻击体外传代培养的人肾小球系膜细胞。结果：于培养第一代即在受染细胞的胞浆中检出特异性病毒抗原，阳性细胞数及胞浆内抗原的含量随传代次数的增加而增加，感染细胞在光镜下未见明显病理损害，结论：ＨＦＲＳＶ可以感染体培养的人肾小球系膜细胞并可以在其中     

蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性及机制的初步研究

目的研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV-1活性,对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒性、合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护实验和HIV-1 p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性进行筛选和确认;采用重组HIV-1逆转录酶和蛋白酶活性抑制实验,融合阻断实验初步探讨活性粗提物的作用机制。结果蒲葵籽的醋酸乙酯(P3)提取物具有较强的体外抗HIV-1活性,P3抑制HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为5.64μg/mL,对C8166细胞的毒性较小,CC50大于200μg/mL,治疗指数(TI)大于35.46;P3抑制HIV-1急性感染中p24抗原表达的EC50为23.04μg/mL,抑制正常C8166细胞与慢性感染细胞H9/HIV-1 B融合的EC50为8.00μg/mL;P3在质量浓度为200μg/mL时,对HIV-1逆转录酶的抑制率为28.86%;P3抑制重组HIV-1蛋白酶活性的EC50为1.77μg/mL。结论蒲葵籽的醋酸乙酯提取物(P3)具有较强的体外抗HIV-1活性,其作用机制可能主要为阻断病毒进入和抑制HIV-1蛋白酶活性。     

地塞米松抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖的分子机制:RhoB信号通路的作用

目的 观察地塞米松（Dex）对人卵巢癌细胞HO-8910增殖的影响,探讨小G蛋白RhoB信号通路在其中的作用.方法四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）和软琼脂实验检测细胞的增殖;RT-PCR法检测RhoB mRNA的表达;Western印迹检测RhoB及其上下游信号分子磷酸化Akt（p-Akt）、p21^cip1/waf1和p27蛋白质的表达;报告基因技术检测p21^cip1/waf1基因的转录.结果Dex可以明显抑制HO-8910细胞锚依赖性和非依赖性方式的增殖,100 nM Dex处理细胞6 d,抑制率为31%.100nM Dex处理细胞可以明显上调RhoB mRNA和蛋白质的表达（为对照的2.5倍）;同时伴有p-Akt蛋白质表达的降低（24 h时约为对照的50%）、p27蛋白质表达的增加（36 h时比对照增加了3.3倍）以及p21^cip1/waf1转录和蛋白质表达增多（24h时约为对照的1.7倍）.RhoB过表达可以降低细胞的生长速度,并能增强Dex的增殖抑制作用（100 nM Dex处理6 d,抑制率为44%）;而RhoB表达阻断后可逆转Dex的这一效应（抑制率约为13%）.结论Dex抑制HO-8910细胞增殖的机制可能与抑制PI3K/p-Akt信号,从而上调RhoB蛋白质,使RhoB下游信号分子p21^cip1/waf1和p27蛋白质表达增加有关.     

Screening of anti-SIV drugs from Chinese medicinal herbs

The inhibitory activities of more than 40 species of Chinese medicinal herbs or their single chemical components against simian immunodeficiency virus (SIV) have been studied. The study revealed that four species of medicinal herbs and a single chemical component had a more than 50% inhibition effect on SIV antigen expression, and the inhibitory rate of five other herbs on SIV antigen expression was between 30%～50%. The results suggest Chinese medicinal herbs could inhibit SIV activity.     

Screening of Anti-SIV Drugs from Chinese Medicinal Herbs

ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＡｎｔｉ－ＳＩＶＤｒｕｇｓｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＨｅｒｂｓＧｕａｎＣｈｏｎｇ－ｆｅｎ（关崇芬）；ＷａｎｇＹｉ－ｚｈｅ（王忆浙）；（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢａｓｉｃＴｈｅｏｒｙ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒａ...     

猪脾细胞干扰素在细胞中对疱疹病毒的抑制作用

目的:体外评价猪脾细胞干扰素抗疱疹病毒的活性,为疱疹病毒感染寻找新的治疗手段。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率和病毒抑制率来评价猪脾细胞干扰素体外对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)的抑制作用。结果:猪脾细胞干扰素对HeLa细胞的半数毒性浓度(TC50)为535.3 IU/ml,对HSV-1和HSV-2的半数有效浓度(IC50)分别为24.6×103IU/L和25.9×103IU/L,治疗指数(TI)为21.8和20.7;其抗病毒效果与人白细胞干扰素及喷昔洛韦一致。结论:猪脾细胞干扰素具有很好的体外抗疱疹病毒作用。     

选择性杀伤CEA阳性结直肠癌细胞的条件复制型腺病毒载体的构建及应用

目的 构建能选择性杀伤表达癌胚抗原（CEA）的结直肠癌细胞的条件复制型腺病毒载体。方法 PCR扩增CEA基因5’端调控序列,构建以EGFPLuc作为报告基因的表达质粒pCEA-EGFPLuc。利用脂质体将pCEA-EGFPLuc导入CEA阳性和阴性细胞中,通过检测增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达和荧光素酶（luciferase）活性,评价CEA启动子活性。构建由CEA 启动子调控的E1A,并携带HSVtk基因的条件复制型腺病毒Ad.CEA-E1A/CMV-TK,分别感染CEA阳性肿瘤细胞（Lovo和SW620）和阴性肿瘤细胞（HeLa）,通过E1A表达和细胞存活率检测,评价该病毒对CEA阳性肿瘤细胞的选择性杀伤效果及联合应用环氧鸟苷（GCV）后的协同效应。结果 CEA启动子具有较好的选择性和较高的活性。Ad.CEA-E1A/CMV-TK只在CEA阳性的肿瘤细胞中表达E1A。感染Ad.CEA-E1A/CMV-TK后,Lovo和SW620细胞的存活率分别为（36.72±2.49）%和（39.82±4.76）%,均显著低于HeLa细胞的（87.44±2.76）%（P<0.01）;联合GCV对Lovo和SW620的杀伤效果增加,细胞存活率分别为（17.26±3.65）%和（23.93±5.40）%,显著低于未加GCV的（36.72±2.49）%和（39.82±4.76）%（P<0.01）。结论 由CEA调控复制的Ad.CEA-E1A/CMV-TK对CEA阳性的结直肠癌细胞具有选择性杀伤作用,联合GCV后杀伤效果明显增强。     

喉部鳞癌p27、ki-67的表达

目的 :研究p2 7、ki 6 7在喉鳞癌中的蛋白表达水平及其临床意义。方法 :应用免疫组织化学S P法检测p2 7蛋白、ki 6 7抗原在 5 2例喉鳞癌以及 18例癌旁组织中的表达状况。结果 :p2 7蛋白在喉鳞癌中表达阳性率 (5 7.7% )低于癌旁组织 (88.9% ) ,P <0 .0 5 ;p2 7的表达与喉鳞癌患者肿瘤T分级和临床分期呈显著负相关 ,与肿瘤部位、肿瘤分化程度、颈淋巴结转移无关。ki 6 7抗原在喉鳞癌中表达阳性率 (5 5 .8% )高于癌旁组织 (0 % ) ,P <0 .0 1;ki 6 7的表达与喉鳞癌患者肿瘤分化程度呈显著正相关 ,与肿瘤部位、T分级、临床分期、颈淋巴结转移无关。p2 7与ki 6 7的表达在喉鳞癌中无负相关关系。结论 :p2 7蛋白表达可为正确判断肿瘤T分级、临床分期提供新的依据 ;而ki 6 7抗原表达则可为正确判断肿瘤分化程度提供新的依据 ,具有一定的临床意义     

金欣口服液含药血清抗呼吸道合胞病毒作用研究

目的：观察金欣口服液对呼吸道合胞病毒（RSV）感染的人喉癌上皮细胞（Hep-2）细胞的抑制作用。方法：通过体外抗病毒实验采用MTT法检测病变抑制率及以上清滴度观察金欣口服液含药血清对RSV的抑制作用。结果：MTT法测定病毒抑制率均高于75％,含药血清组上清滴度与空白血清组和病毒对照组比较有显著差异,滴度低于后两组。结论：金欣口服液对呼吸道合胞病毒引起的细胞病变有明显抑制作用。     

腺病毒介导的p27kip1基因转移对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 :研究p2 7kip1基因转移对食管癌的体内、外抑制作用 ,并探讨其抑癌机制。方法 :①构建携带人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 (Ad p2 7kip1) ;②将Ad p2 7kip1转染人食管癌细胞Eca970 6 ,MTT法、3 H TdR和3 H Leucine掺入试验检测对细胞增殖的影响 ,流式细胞仪 (FCM)、DNA片段分析检测对细胞周期和凋亡的影响 ,TRAPPCR -ELISA法检测端粒酶活性 ,免疫细胞化学法及Westernblotting法检测p2 7kip1和Survivin的表达 ;③Ad p2 7kip1直接注射入人食管癌裸鼠移植瘤中 ,观测抑瘤效应 ,并检测p2 7kip1和Survivin的表达。结果 :①Ad p2 7kip1转染食管癌细胞后 ,细胞增殖明显受抑制 ,G0 /G1期细胞比例增加 ,并出现明显的亚二倍体凋亡峰和特征性的凋亡梯状条带 ,细胞端粒酶活性降低 ,p2 7kip1表达增强 ,Survivin表达降低 ;②采用p2 7kip1基因治疗 ,食管癌裸鼠移植瘤生长明显受抑制 ,肿瘤生长抑制率达 6 4 .1% ,移植瘤中p2 7kip1表达增强 ,Survivin表达降低。结论 :p2 7kip1基因转移对食管癌具有较显著的体内、外抑制作用 ,其机制是增强p2 7kip1表达、抑制Survivin表达 ,使细胞产生G1期阻滞 ,抑制端粒酶活性 ,并诱导凋亡 ,表明该基因疗法是食管癌治疗的新途径。     

应用RNA干扰技术抑制乙型肝炎病毒抗原表达的实验研究

目的 构建针对乙型肝炎病毒(HBV)核心区的siRNA表达载体pSIHBV／C,观察其对HBV复制和表达的影响。方法 将构建成功的pSIHBV／C与1．3倍HBV真核表达质粒pHBV1．3共转染HepG2细胞,转染后24、48、72h,用Abbott试剂检测细胞上清中HBsAg和HBeAg,并用免疫荧光染色法观察细胞内病毒核心抗原和表面抗原的表达。结果 成功构建了针对HBV核心区的siRNA表达载体pSIHBV／C,并发现它能明显抑制HBsAg和HBeAg的分泌,转染后第2天抑制率达高峰,分别为92％、85％,而随机序列的siRNA无此作用。免疫荧光染色结果也证实转染24b后,随pSIHBV／C比例的升高,其对HBV抗原表达的抑制作用也随之增加,当pSIRNA／C与pHBV1．3比例为1：20时,pSIHBV／C对细胞内HBsAg和HBcAg表达的抑制作用最强。结论 乙型肝炎病毒核心区的siRNA具有显著和特异的抗HBV复制和表达的作用。