人脑发育过程中髓鞘碱性蛋白基因的表达

为探索人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因表达的时空秩序与髓鞘发生和形成之间关系，采用３２Ｐ－和生物素标记鼠ＭＢＰｃＤＮＡ和地高辛标记人ＭＢＰｃＲＮＡ探针，对发育过程中人脑进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交和原位杂交研究。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点分析结果显示：１６周胎龄脑ＭＢＰｍＲＮＡ表达已明显，Ａ５９０值近２．０／μｇＲＮＡ，随发育逐渐增加，至成年其表达增至９倍（Ａ５９０值为１８／μｇＲＮＡ）。８～２５周胎龄脊髓和延脑切片以及２０、２２和２５周胎龄桥脑、中脑、丘脑、小脑和大脑切片原位杂交结果表明：在８～９周胎龄人脑脊髓前角和近延脑第四脑室底区域中，其散在细胞的核周胞浆内有ＭＢＰｍＲＮＡ表达信号，该阳性细胞比少突细胞大，而且胞浆丰富，它们究竟是神经元或胶质前体仍待鉴定。在２０周胎龄期，ＭＢＰｍＲＮＡ表达在脊髓和延脑区骤增，并沿少突细胞突起延伸呈网状；此期桥脑该基因表达已明显，在其他脑区该表达信号也有散在分布     

TIMP—1基因转染对人肺巨细胞癌细胞系生物学行为的影响

利用基因重组技术构建了一个含有全长人ＴＩＭＰ－１ｃＤＮＡ的真核表达重组体。重组质粒通过脂质体法导入高转移人肺巨细胞癌细胞系（ＰＧ细胞）。随机挑选Ｇ４１８抗性克隆，并对其中的两个克隆ＰＧ－Ｔ２和ＰＧ－Ｔ４进行了深入的研究。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹表明，，这两个克隆具有较高的ＴＩＭＰ－１ＲＮＡ表达，其表达水平明显高于ＰＧ细胞和空载体转染对照细胞ＰＧ－ＭＶ，ＰＧ－Ｔ２和ＰＧ－Ｔ４克隆细胞显示出很高的ＴＩＭＰ     

动脉粥样硬化对平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达之影响

目的：究动脉粥样硬化对ＳＭＣ凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨凋亡的分子机制及晚期ＡＳ斑块破裂之原因。方法：采用高维生素Ｄ３＋高脂肪高胆固醇饲料喂养法建立大鼠ＡＳ的模型;运用ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳法鉴定基因组ＤＮＡ的断裂情况,使用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测Ｐ５３,ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２基因的表达活性。结果：ａ．ＡＳ斑块中ＳＭＣ的ＤＮＡ片断在电泳呈特征性梯状分布,ｂ．ＡＳ斑块中Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ基因     

耐药白血病细胞系（K562／H20）MRP表达的实验研究

目的 了解ＭＲＰ在Ｋ５６２／Ｈ２０耐药株中的表达。方法 用＾３２Ｐ－ｄＡＴＰ标记的ＭＲＰ ｃＤＮＡ探针，对细胞决ＲＮＡ进行了Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。结果 与敏感株Ｋ５６２／Ｈ２０相比，Ｋ５６２／Ｈ２０ＭＲＰ呈过度表达。结论 ＭＲＰ参与了Ｋ５６２／Ｈ２０耐药机制。     

βB2-晶体蛋白的克隆和在大肠杆菌中的高效表达和纯化

目的表达βＢ２－晶体蛋白，以研究其结构与功能的关系。方法用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从大鼠晶状体中获得βＢ２－晶体蛋白的ｃＤＮＡ，将ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＭＯＮ５７４３，转染Ｅ．ｃｏｌｉ菌株ＪＭ１０１，以萘啶酮酸诱导表达βＢ２－晶体蛋白，用ＤＥＡＥ纤维素层析纯化。结果ＲＴ－ＰＣＲ扩增获得约７００ｂｐ的ｃＤＮＡ，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得高效表达，βＢ２－晶体蛋白占细菌总蛋白的３０％。ＤＥＡＥ纯化后获一２４ｋＤ蛋白，分子量与βＢ２－晶体蛋白一致。结论βＢ２－晶体蛋白ｃＤＮＡ可在大肠杆菌中获高效表达，表达产物的分子量约２４ｋＤ。     

乙肝患者血清HBV—DNA与e,c系统相关分析及临床意义

对３７４乙型肝患者血清用地高辛探针法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ；用酶联法检测ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ、ＨＢｃＡｇ、抗ＨＢｃ－ＩｇＭ。结果：ＨＢＶ－ＤＮＡ与ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ无明显相关（Ｐ〉０．０５），与ＨＢｃＡｇ、抗ＨＢＣ－ＩｇＭ呈正相关关系（ｒ＝０．１８－０．２，Ｐ〈０．０１）；ＨＢｅＡｇ组与抗ＨＢｅ组ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率无明显差异（Ｐ〉０．０５），以ＨＢＶ－ＤＮＡ为标准评价ＨＢｅＡｇ、ＨＢ     

逆转录病毒介导癌基因疗法体外安全实验

从逆转录病毒ｐＬＸＳＮ与人ＩＬ－２ｃＤＮＡ基因进行重组，包括ＰＡ３１７细胞，建立逆转录病毒包装体系细胞ＰＡ３１７／ｐＬＩＬ－２ＳＮ。用病毒上清液转导人淋巴细胞（ＴＩＬ，ＰＢＬ）和３株人腺癌细胞株（ＳＰＣ－Ａ１，ＭＫＮ－ＨｅｐＧ２）对转ＩＬ－２基因的淋巴细胞（ＴＩＬ／ＩＬ－２，ＰＢＬ／ＩＬ－２）和转ＩＬ－２基因的人癌细胞（ＳＰＣ－Ａ２／ＩＬ－２，ＭＫＮ－４５／ＩＬ－２，ＨｅｐＧ２／ＩＬ２）进行体外安     

人B7.2cDNA的克隆及其核表达

为克隆人Ｂ７．２ｃＤＮＡ，构建Ｂ７．２真核表达质粒，并在哺乳动物细胞中表达。分离正常人淋巴结淋巴细胞，经ＬＰＳ诱导后，以ＲＴ－ＰＣＲ，克隆Ｂ７．２ｃＤＮＡ；构建真核表达质粒ｐＢＣＭＧＳＮｅｏ－Ｂ７．２，转染哺乳细胞，进行表达。结果成功克隆了Ｂ７．２ｃＤＮＡ，并经测序证实：所构建的Ｂ７．２抗原真核表达质粒可在哺乳动物细胞中高效表达。表明经ＬＰＳ诱导的人淋巴细胞可表达Ｂ７．２ｍＲＮＡ，所建立的ｐＢＣＭ     

人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达

目的：扩增、克隆人骨形成蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）成熟肽ｃＤＮＡ基因，利用大肠杆菌表达ｈＢＭＰ－３成熟肽．方法：ＰＣＲ方法扩增ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，双脱氧终止法测序正确后，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＤＨ，受控于ＰＲＰＬ启动子，重组质粒ｐＤＨＢ－３ｍ以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌在４２℃进行温度诱导．结果：扩增出ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，序列测定完全正确；含重组质粒ｐＤＨ－Ｂ３ｍ的工程菌诱导后在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新生蛋白带，分子质量为１４．５ｋｕ，与预期ｈＢＭＰ－３成熟肽分子量大小一致，约占菌体总蛋白的２８％．结论：成功扩增、克隆ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，并可在大肠杆菌中得到高效表达     

大鼠支持细胞ABP、SGP－2和FSH－RcDNA探针的制备

利用获得的含ＡＢＰ、Ｓ－ＧＰ－２和ＦＳＨ－ＲｃＤＮＡ的重组质粒进行体外扩增。碱裂解后酶切鉴定表明，获得的特异６５０ｂｐ和７５０ｂｐ的ＡＢＰｃＤＮＡ片断、１８５７ｂｐ的ＳＧＰ－２ｃＤＮＡ片断和２１８２ｂｐ的ＦＳＨ－ＲｃＤＮＡ片断可进一步用于ＡＢＰ、ＳＧＰ－２和ＦＳＨ－Ｒ基因表达和调节的研究。