miR-181a促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化催乳素的表达

目的目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stromal cell,hESC)体外诱导蜕膜化过程中蜕膜化标志基因蜕膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)表达的调控作用。方法收集怀孕0～6.5 d孕鼠子宫组织,采用TRIZOL法提取总RNA,通过实时定量PCR检测子宫组织中miR-181a的表达。制备Ad-miR-181a重组腺病毒,并感染hESC,24 h后采用0.5 mmol/L 8-Br-cAMP和1μmol/L Medroxyproges-terone(MPA)联合进行体外蜕膜化诱导培养;通过化学发光免疫法和实时定量PCR分别检测细胞培养液上清中dPRL的浓度与间质细胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的表达;同时采用荧光素酶报告基因检测miR-181a对hESC中dPRL(-332/+65)启动子的调控作用。结果早孕小鼠子宫组织中miR-181a的表达高于非妊娠小鼠子宫,且随着妊娠天数的增加呈逐渐上升的趋势,在小鼠着床"窗口期"即孕4.5 d达到高峰(2.60±0.15倍,P<0.01,n=5),孕5.5 d子宫miR-181a的表达开始平稳下降;成功获得滴度为5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,该腺病毒介导的miR-181a过表达显著增加hESC蜕膜化标志基因dPRL mRNA表达水平,增高超过8倍(P<0.01);在8-Br-cAMP和MPA联合诱导hESC体外蜕膜化时,高表达miR-181a可明显增加8-Br-cAMP联合MPA诱导的PRL mRNA表达水平与PRL蛋白分泌(P<0.01)。荧光素酶报告基因进一步证实miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)启动子的活性达到2倍(P<0.05)。结论 miR-181a参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控。     

分化抑制因子3在胚胎植入中的作用

目的：检测分化抑制因子３（inhibitors of differentiation 3,Id3）基因在小鼠早期妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型中子宫内膜中的表达规律;探究Id3基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用。方法：应用Western blot及qRT-PCR检测Id3在早期妊娠和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;利用分离的原代小鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化、过表达Id3基因,分析Id3对基质细胞蜕膜化的影响。结果：Id3在小鼠早期妊娠模型中高表达于子宫内膜容受期形成阶段（孕第4天）（P蛋白质=0.001,PmRNA=0.001）,胚胎着床后基质细胞发生分化的蜕膜化子宫中表达较低（PD5蛋白质=0.026,PD5mRNA=0.038）;体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Id3的表达明显低于未发生蜕膜化的对照子宫（P蛋白质=0.005,PmRNA=0.000）;体外人工诱导蜕膜化可抑制Id3基因的表达（P蛋白质=0.000,PmRNA=0.001）;过表达Id3可以明显降低体外子宫内膜基质细胞蜕膜化过程;Stat3信号参与调控Id3的表达调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。结论：Id3参与小鼠胚胎植入并调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。     

HOXA10与连续TTAT基序结合抑制p／CAF表达

目的:转录因子HOXA10在胚胎着床和子宫内膜蜕膜化过程中发挥重要作用.p/CAF是HOXA10新的靶基因,文章旨在筛选并鉴定p/CAF启动子区与HOXA10功能性结合的序列. 方法:制备重组腺病毒HOXA10(ad-HOXA10),用于感染人子宫内膜间质细胞(hESC);构建p/CAF启动子区多种突变报告基因质粒;采用萤光素酶报告基因实验检测结合腺病毒介导的HOXA10基因过表达,分析hESC中HOXA10对p/CAF启动子转录活性的调控. 结果:获得滴度为2.4×1011ifu/mL的重组ad-HOXA10,对hESC的感染率达到80%以上.HOXA10通过结合连续的3个TTAT(-710～ -674nt)基序抑制p/CAF启动子活性,连续的3个TTAT基序的一级结构影响HOXA10的功能性结合. 结论:p/CAF启动子区连续的3个TTAT基序是HOXA10功能性结合所必须的,HOXA10可能通过调控p/CAF的表达来控制hESC的增殖与分化.     

组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(Hint1)在胚胎植入中的作用

目的：检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（histidine triad nucleotide binding protein 1,Hint1）基因在小鼠早期妊娠过程中子宫内膜中的表达规律;探究Hint1基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用。方法：应用免疫组化、原位杂交、Western blot和RT-qPCR检测Hint1在早期妊娠、假孕和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;siRNA敲低原代分离的小鼠子宫内膜基质细胞Hint1的表达。LC-MS分析Hint1对基质细胞蜕膜化过程中脂质组学的影响。结果：在妊娠的第1至第8天Hint1表达逐渐升高,且在胚胎植入部位的表达明显高于非植入点;体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Hint1的表达明显高于未发生蜕膜化的对照子宫;利用siRNA干扰小鼠子宫内膜基质细胞中Hint1的表达可显著影响其蜕膜化过程及脂质代谢。结论：Hint1在基质细胞蜕膜化过程中表达升高,并可能与蜕膜化过程中基质细胞的脂质代谢相关。     

孤儿核受体Nur77对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨孤儿核受体Nur77对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,在ox-LDL及其相关成分7-酮胆固醇(7-KC)、9-HODE和13-HODE等条件刺激下,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、蛋白免疫印迹技术和免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测Nur77 mRNA和蛋白表达变化。用腺病毒感染血管平滑肌细胞过表达Nur77,通过细胞计数和Western Blotting观察Nur77对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 ox-LDL可诱导血管平滑肌细胞中Nur77 mRNA表达上调,并且在1 h时达到高峰;同时ox-LDL及其相关成分(7-KC、9-HODE和13-HODE),均可诱导血管平滑肌细胞中Nur77的蛋白表达明显上调。在ox-LDL刺激下,Nur77过表达组(Ad-GFP-Nur77)平滑肌细胞的细胞密度[(2.70±0.14)×104]及细胞增殖相关蛋白cyclin D1的表达明显低于对照组(Ad-GFP)平滑肌细胞的细胞密度[(3.95±0.26)×104]及cyclin D1的表达(P<0.05)。结论孤儿核受体Nur77抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

一氧化氮合酶在人子宫内膜和蜕膜的表达

为探讨一氧化氮(NO)在子宫内膜功能性活动中所发挥的作用,应用免疫组织化学技术检测人增生期、分泌期子宫内膜及早孕期蜕膜内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达模式.结果发现①增生期仅内膜血管内皮细胞表达eNOS,iNOS不表达于内膜的任何组份;②分泌期两种NOS都表达于子宫内膜的腺上皮和腔上皮.子宫内膜间质细胞未检测到NOS.③蜕膜组织蜕膜组织腺上皮和腔上皮eNOS和iNOS的表达明显增强,并且蜕膜间质细胞表达iNOS.分泌期子宫内膜和蜕膜组织表达eNOS和iNOS增加,表明此时NO的产量增多,而NO又可能通过其扩张血管、松弛平滑肌和促凋亡的作用参与胚胎着床的发生和月经的形成.     

IL-1对离体培养人子宫内膜间质细胞催乳素分泌的影响

目的 观察白细胞介素-1(IL-1)对体外培养的人子宫内膜间质细胞催乳素(PRL)分泌的影响，以探讨IL-1对女性生殖生理的调节作用。方法 采用免疫组化染色方法对腺上皮细胞和间质细胞进行鉴定。结果 腺上皮细胞角蛋白(Keratin)染色呈阳性反应，间质细胞波形蛋白(Vimentin)染色呈阳性。结论 IL-1可以抑制离体培养人子宫内膜间质细胞PRL的产生，并随浓度增加抑制作用增强。     

IVF-ET反复种植失败患者子宫内膜HOXA-10基因的表达

目的研究同源框基因-10(HOXA-10)在人子宫内膜组织中的表达,并探讨其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)反复种植失败的相关性。方法以40例IVF-ET治疗反复种植失败的患者为研究对象,以40例正常妇女及5例早孕人流患者作为对照,获取患者各时期子宫内膜及蜕膜组织,采用免疫组织化学法检测HOXA-10蛋白在各时期子宫内膜及蜕膜上的定位和表达,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和蛋白印迹法(Western blotting)测定HOXA-10 mRNA在各时期子宫内膜及蜕膜上的表达及其蛋白水平。结果 HOXA-10蛋白定位于子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞,其mRNA和蛋白在各期子宫内膜及蜕膜组织中均有表达。在对照组中以分泌中期、晚期及蜕膜中的表达最强,明显高于月经期和增殖期(P<0.05);而在反复种植失败患者子宫内膜中的表达水平基本一致,无明显分泌中、晚期峰,并且分泌中、晚期的表达要显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HOXA-10基因在分泌中、晚期子宫内膜及早孕蜕膜组织中的高表达与胚胎种植及妊娠维持密切相关;其表达下降可能是导致IVF-ET反复种植失败的重要原因之一。     

孤儿核受体Nur77激动剂CsnB对人HepG2肝癌细胞胆固醇代谢调控基因的影响

目的探讨孤儿核受体Nur77激动剂CsnB对人HepG2肝癌细胞胆固醇代谢调控基因的影响。方法利用CsnB诱导Nur77在人HepG2肝癌细胞中的高表达。通过与CsnB相同剂量的DMSO对照组的比较,观察CsnB作用不同时间后肝细胞胆固醇代谢相关重要基因的变化,如低密度脂蛋白受体(LDLR)、HMGCoA还原酶(HMGCR)和肝X受体α(LXRα)。结果 10μg/ml终浓度CsnB刺激HepG2细胞可以达到Nur77的高表达,并在作用1.5h后表达量达到高峰。相同浓度CsnB刺激HepG2细胞后,LDLR与HMGCR随时间的延长逐渐下降,并且两种基因在CsnB处理24h后的表达量与0h比较,差异有统计学意义(P<0.05);而LXRα的表达量变化不大。结论 CsnB可以有效诱导Nur77在HepG2细胞中的高表达,其对于肝癌细胞胆固醇代谢调控基因的影响主要表现为LDLR与HMGCR的下调。