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相似文献
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1.
巢蛋白和胰岛素在大鼠胰腺不同发育阶段的表达   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:探讨巢蛋白(nestin)在胚胎后期、新生期、成年3阶段的mRNA、蛋白水平表达的变化。方法:应用RT-PCR、免疫组化的方法进行半定量、定位分析。结果:在胚胎后期、新生期、成年3阶段Nestin在mRNA、蛋白水平均有表达,Nestin阳性细胞主要分布在胰岛中.腺泡周围的外分泌组织中有少量分布。结论:Nestin随大鼠胰腺的生长发育,核酸、蛋白表达下调,胰岛内Nestin阳性细胞百分数表达也下调。  相似文献   

2.
目的:研究大鼠胚胎胰腺发育后期、新生期及成年期对转录因子Nkx2.2和Nkx6.1的mRNA表达调控。方法:利用显微分离等方法分离胚胎18.5天、新生和成年大鼠胰腺,对胰腺标本提取总RNA.利用胰腺内外分泌细胞分子标志——胰岛素和淀粉酶来鉴定胰腺标小,再用RT-PCR分析Nkx2.2或Nkx6.1存大鼠胰腺几个不同发育时期的mRNA表达情况结果:Nkx6.1在胚胎18.5天胰腺中有表达,出生时表达量有增加,到了成年显著下降。Nkx2.2的mRNA存胚胎期、新生期和成年期均有表达,新生期表达量较其他两个时期有显著性增加。从以上两个转录因子在胰腺不同发育时期的表达情况来看.它们的其同点是胚胎期有表达,新生期表达量较胚胎后期和成年期高,成年期表达量呈下降趋势。结论:不同生长发育时期对转录因子Nkx2.2和Nkx6.1的mRNA具有调节作用,新生期细胞增生分化加速,这与Nkx2.2、Nkx6.1等转录因子表达量增高有关。  相似文献   

3.
目的:探讨与胰岛形成和功能完善相关的基因在大鼠胰腺发育不同阶段的表达趋势.方法:采用高密度寡核苷酸芯片对孕12.5 d(E12.5),E15.5,E18.5, 新生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析,并用RT-PCR验证桩蛋白(pxn)和actopaxin在不同发育时期的表达情况.结果:与细胞迁移、聚集黏附相关的基因77.8%在胚胎18.5 d高表达,22.2%在新生期高表达;整合素和激酶(ILK)在胚胎18.5 d表达量最高,pxn和actopaxin在胚胎15.5 d表达量达到高峰;成熟胰腺特异性基因多从胚胎18.5 d开始出现明显高表达,调节胰腺细胞分化的相关转录因子表达量多从胚胎18.5 d开始下降.结论:Pxn在胚胎发育中后期的高表达可能与胰岛形成及功能完善有关.  相似文献   

4.
人胚胎胰腺源nestin阳性细胞的快速获取   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:建立一种胰腺nestin阳性细胞的快速培养方法。方法:解剖分离12~24周龄胎儿胰腺,通过胶原酶V消化获得胰岛样细胞团(ICCs);经原代培养及传代培养后获得nestin阳性细胞。结果:免疫荧光法观察发现,传代培养4次后即可获得单纯的nestin阳性细胞。结论:从胎儿胰腺中可快速获取单纯的nestin阳性细胞。  相似文献   

5.
成年大鼠非胰岛内Nestin阳性细胞的体外分离、培养及分化   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:建立成年大鼠胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞的体外分离培养及分化的方法。方法:采用胰管内注入胶原酶消化法分离3只成年大鼠胰腺组织,并经含10%胎牛血清RPMI 1640液(pH 7.6)体外培养,36 h后弃去悬浮细胞及胰岛,改用无10%胎牛血清RPMI 1640液(pH 7.4)加bFGF、EGF及N2添加剂培养,18~22 d后收集新生类胰岛样细胞团并传代培养。挑选新分离的胰岛和新生类胰岛样细胞团每次各40个,共3次,采用131Ⅰ放射免疫法测定分离的胰岛及新生类胰岛样细胞团的胰岛素分泌量,并计算葡萄糖刺激指数(SI);免疫荧光细胞化学法检查贴壁细胞及传代后的新生类胰岛样细胞团Nestin阳性细胞的表达。 结果:胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛;分离后胰腺组织在pH 7.6的10%胎牛血清RPMI 1640液培养条件下,36 h内胰岛细胞不贴壁,贴壁细胞中大多数表达Nestin阳性细胞,无胰岛素和胰高血糖素表达,但Nestin表达不一,培养18~22 d可见新生类胰岛样细胞团出现,新生类胰岛样细胞团传代后仍可见Nestin阳性细胞。新分离的40个胰岛在含糖3.3、16.7 mmol•L-1培养液中胰岛素分泌量为(63.6±4.0)、(202.2±14.8)mIU•L-1;而新生的40个类胰岛样细胞团胰岛素分泌量为(3.5±0.2)、(3.3±0.2)mIU•L-1,差异有显著性(P<0.001)。 结论:胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛;在pH 7.6条件下可分离培养出成年大鼠胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞,经无血清培养形成的类胰岛样细胞团,可传代培养,并表达胰岛素。胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞具有胰腺干细胞特点。  相似文献   

6.
目的 研究肝细胞因子受体编码基因c-met在大鼠胰腺发育不同阶段的表达及其编码蛋白的细胞定位.方法 采用RT-PCR技术检测c-met基因在大鼠胰腺不同发育时期:孕15.5 d(E15.5)和孕18.5 d(E18.5)、生后14 d(P14)、生后21 d(P21)、新生及成年胰腺的表达;并用免疫组化技术检测该基因编码的蛋白c-MET在胰腺发育不同阶段的细胞定位.结果 c-met基因在E15.5、E18.5 d较成年特异性高表达,免疫组化结果显示该基因编码的蛋白c-MET在新生后的胰腺大量定位于胰岛细胞.结论 c-met可能在胰腺发育过程中起到调控作用,参与胰腺发育中新生后胰岛结构重塑过程.  相似文献   

7.
肖乐  曹建彪 《中国全科医学》2007,10(10):847-849
巢素蛋白(nestin)阳性细胞、成体干细胞(包括间充质干细胞和胰腺导管上皮细胞)和胚胎干细胞是常用的体外诱导转化为胰岛细胞的种子细胞,本文就这三类细胞的来源、实验方法及实验结果的研究进展进行综述。  相似文献   

8.
目的:探讨转化生长因子(TGF)-βⅡ受体在SD大鼠胰腺发育后期的表达及意义.方法:使用RT-PCR方法分别检测交配后18.5天、新生及成年SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体mRNA表达;使用Western blot方法分别对上述不同时期SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达进行蛋白质水平的检测.结果:新生鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达在核酸与蛋白质水平上均明显高于18.5天胎鼠与成年鼠胰腺,差异有显著性(P<0.05).结论:TGF-βⅡ受体表达在新生鼠阶段有明显上调.  相似文献   

9.
目的分析钾通道KCNQ1在不同发育阶段大鼠胰腺以及成年大鼠胰岛中的表达情况,为探悉其在胰腺B细胞发育及功能中可能的作用提供实验依据。方法采用高密度寡核苷酸芯片对胚胎第12.5天(E12.5)、E15.5、E18.5、新生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析,并用RT-PCR对KCNQ1通道亚基在上述5个时期大鼠胰腺以及成年大鼠胰岛中的表达进行验证和分析。结果与胰腺内分泌细胞分化、成熟有关的转录因子分别于E15.5、E18.5达到表达高峰;E18.5胰腺中B细胞功能成熟标志基因的表达显著增加,而KCNQ1钾离子通道的编码基因KCNQ1及KCNE1此时才出现表达。成年胰腺及胰岛中均具有多种KCNQ1通道亚基的表达。结论 KCNQ1通道的表达出现于胰腺发育后期内分泌细胞功能逐渐成熟阶段,在成年胰岛中亦具有较高表达水平,提示KCNQ1通道可能表达于成熟B细胞并参与其内分泌功能。  相似文献   

10.
转化生长因子BⅡ受体在大鼠胰腺发育后期的表达   总被引:3,自引:2,他引:1  
目的:探讨转化生长因子(TGF)-βⅡ受体在SD大鼠胰腺发育后期的表达及意义。方法:使用RT-PCR方法分别检测交配后18.5天、新生及成年SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体mRNA表达;使用Western blot方法分别对上述不同时期SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达进行蛋白质水平的检测。结果:新生鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达在核酸与蛋白质水平上均明显高于18.5天胎鼠与成年鼠胰腺,差异有显著性(P<0.05)。结论:TGF-βⅡ受体表达在新生鼠阶段有明显上调。  相似文献   

11.
目的 观察肝脏X受体β(liver X receptor β,LXRβ)对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响.方法 在胚胎发育18.5 d(E18.5)和生后第2天(P2)行海马免疫组织化学方法检测,分别采用细胞增殖标记增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear ant...  相似文献   

12.
石围 《医学综述》2014,20(19):3516-3518
巢蛋白是第Ⅵ类中间丝蛋白,分布于细胞浆内,参与细胞骨架的构成,以前被认为是一种神经干细胞的标志。近年来研究发现,巢蛋白表达于胰腺干细胞及胰腺肿瘤干细胞中,并且与胰腺癌肿瘤发生、肿瘤血管生成,肿瘤转移、预后等有关。巢蛋白也可能是评估微脉管密度的血管标志物之一。该文就巢蛋白在胰腺癌中的研究进展予以综述。  相似文献   

13.
Objective: To investigate if there are the CK-19, PDX-1, Nestin, Ngn3 positive cells in the donor islets of different purity in rats. Methods: Thirty male adult SD rats were randomly divided into 3 groups. Islets were isolated using digestion by ductal injection of collagenase. Group Ⅰ (n=10): Separating cell preparations were not purified, Group Ⅱ(n=10): Islet sediment was purified with 25% Ficoll400 ,Group Ⅲ (n=10): Islet sediment was purified with 25% and 11% Ficoll-400. The levels of protein of CK-19, PDX-1, Nestin and Ngn3 were detected by immunohistochemistry and the mRNA of CK-19, PDX-1, Nestin, Ngn3 was amplified by RT-PCR. Results: After two different purification methods applied, three islet preparations of different purities were obtained. The difference of islet purity was significant among various groups (P<0.05). Compared with group Ⅱ and group Ⅲ,the protein and mRNA of CK-19, PDX-1, Nestin,Ngn3 were both higher in group Ⅰ; group Ⅲ was poorly expressed. Conclusions: The three different islet purity donor islet have different CK-19, PDX-1, Nestin, Ngn3 positive cells within them, indicating that there are some islet stem cells in the purified donor islet.  相似文献   

14.
目的:建立成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定的方法.方法:V型胶原酶溶液灌注消化成年大鼠胰腺组织,并经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,而后加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)继续培养,7天可形成单层细胞,用0.25%胰酶-EDTA消化并传代培养.取第2代细胞利用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测CK19、Pdx-1、Nestin、insulin及glucagon的表达.结果:经胶原酶灌注消化胰腺导管上皮,再经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,可使胰腺导管细胞得到较好的纯化.免疫荧光结果示:胰腺导管细胞CK19、Pdx-1和Nestin染色呈阳性,阳性细胞率分别为(88.6±6.2)%、(84.6±8.6)%和(79.3±10.5)%,而insulin及glucagon染色为阴性.RT-PCR结果显示该细胞表达CK19、Pdx-1和Nestin基因.结论:该方法可较好的分离出胰腺导管细胞.经鉴定该法培养所获细胞具有胰腺干细胞的特性.  相似文献   

15.
目的:旨在检测成年大鼠脊髓损伤后室管膜细胞的增殖反应以及nestin的表达。方法:应用动脉瘤夹压迫建立大鼠脊髓损伤模型,通过组织病理学及免疫组织化学方法检测不同时段室管膜细胞的反应性增生和神经外胚层多潜能细胞特异性抗原nestin的表达。结果:损伤后24小时可以观测到室管膜细胞nestin表达明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)呈阳性;7天后见室管膜细胞显增生;nestin的表达随时间进展呈下调。结论:正常情况下静止的室管膜细胞在脊髓损伤后表现出胚胎期原始细胞的增殖状态。  相似文献   

16.
目的 旨在检测成年大鼠脊髓损伤后室管膜细胞的增殖反应以及nestin的表达。方法 应用动脉瘤夹压迫建立大鼠脊髓损伤模型,通过组织病理学及免疫组织化学方法检测不同时段室管膜细胞的反应性增生和神经外胚层多潜能细胞特异性抗原nestin的表达。结果 损伤后24小时可以观测到室管膜细胞nestin表达明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)呈阳性;7天后见室管膜细胞显著增生;nestin的表达随时间进展呈下调。结论 正常情况下静止的室管膜细胞在脊髓损伤后表现出胚胎期原始细胞的增殖状态。  相似文献   

17.
成人胰腺干细胞分离、培养及鉴定   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:从成人胰腺组织中分离并鉴定胰腺干细胞。方法:利用含bFGF的有血清培养基分离、培养出具有高度增殖能力的细胞群,采用RT-PCR技术检测其Nestin mRNA及Insulin mRNA表达情况。同时诱导定向分化,观察其分化后的状态。结果:从成人胰腺组织中分离出的条索状细胞具有高度增殖能力,其Nestin mRNA表达阳性,而胰岛素Insulin mRNA表达阴性,分化后的细胞形成胰岛细胞团样结构。结论:本研究得到的细胞具有高度增殖能力和分化成胰岛细胞的潜能,是来源于胰腺的胰腺干细胞。  相似文献   

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