缺血后处理对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨缺血后处理(IPost)对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 通过尾静脉注射2%链脲佐菌素溶液(STZ)45 mg/kg的方法建立糖尿病大鼠模型,并将建立模型后的糖尿病大鼠随机分为4组,每组8只:(1)缺血再灌注组(IR组):结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h;(2)缺血再灌注+渥曼青霉素组(IR+won组):结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注前5 min,经尾静脉注射渥曼青霉素(15μg/kg),再灌注2 h;(3)缺血后处理组(IPost组):结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注30 s,阻断30 s,重复3次,再灌注2 h;(4)缺血后处理+渥曼青霉素组(IPost+Wort组):结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注前5 min,经尾静脉注射渥曼青霉素(15μg/kg),余处理同缺血后处理组.采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌细胞p-Akt(ser473)、Akt、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 与IR组比较,IPost组心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白表达明显减少(P<0.01),Bcl-2蛋白表达、p-Akt/Akt的比值增高,而渥曼青霉素能够部分消除IPost的心脏保护作用.结论 缺血后处理能够减少糖尿病大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的发生,PI3K/Akt信号转导通路参与了缺血后处理对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌细胞的保护作用.     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌梗死和心肌细胞凋亡的作用

目的观察在体情况下缺血后处理(IPC)对兔心肌梗死范围及缺血心肌细胞凋亡的影响,并与缺血预处理(IP)心脏保护作用比较. 方法采用兔心肌缺血/再灌注模型,在缺血后、再灌注前多次短暂再灌/停灌处理. 以Even's blue-TTC法检测心肌梗死范围,TUNEL方法检测缺血心肌细胞凋亡. 结果与对照组相比,缺血后处理明显减小心肌梗死范围(12.5±5.4% vs对照组26.7±6.7%, P<0.01),缺血区心肌凋亡指数明显下降(14.6±7.4 vs对照组30.4±12.3, P<0.05). 结论对于已缺血心肌,再灌前予多次短暂复灌、停灌处理具有与IP类似缩小心梗范围作用,IPC对缺血心肌的保护效应可能与其抑制缺血心肌细胞凋亡有关.     

双下肢与心肌缺血后处理对缺血再灌注兔心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨双下肢与心肌缺血后处理对缺血再灌注兔心肌凋亡的影响.方法 选择新西兰大白兔32只,建立兔心肌缺血再灌注模型,随机分为4组(每组8只):①S组,即假手术组,开胸后穿线套环,不收紧结扎线.②I/R组,结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注180 min.③缺血后处理组,④双下肢缺血后处理组.分别在实验结束后,用原位化学法(TUNEL)法观察各组心肌细胞凋亡,免疫印迹法(Western blotting)测各组心肌Bcl-2的表达.结果 双下肢与心肌缺血后处理组细胞凋亡均明显小于I/R组,且心肌Bcl-2的表达明显高于I/R组.结论 双下肢与心肌缺血后处理可能通过上调Bcl-2蛋白的表达,抑制心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注兔心肌产生保护作用.     

缺血后处理对缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:研究缺血后处理对缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:24只大耳白兔随机分成4组:假手术组(S)、缺血再灌注组(IR)、缺血预适应组(IP)和缺血后处理组(IPO).S组(6只):开胸只穿线不结扎血管,麻醉维持120 min;IR组(6只):结扎30 min,再灌注120 min;IP组(6只):结扎5 min,再灌注5 min,反复3次诱导缺血预适应,之后再按IR组操作;IPO组(6只):结扎30 min后, 再灌注10 s、缺血10 s, 反复6次,再灌注120 min.应用TUNEL法观察各组心肌细胞凋亡,应用免疫组化SP法观察Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:与IR组相比,IP组和IPO组心肌梗死范围减小,心肌细胞的凋亡指数降低(P＜0.05),Bcl-2/Bax比例升高(P＜0.05),而IP组和IPO组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:缺血后处理可以减轻再灌注心肌细胞的凋亡,这一过程可能是通过升高Bcl-2/Bax比值来实现的.     

缺血后处理对供体犬肺组织细胞凋亡基因表达的影响

【目的】观察供体犬肺再灌注后早期供体肺组织脂质过氧化反应的变化,了解缺血后处理对供体犬肺植入后细胞凋亡基因表达的变化情况。【方法】随机选取12对比咯犬,组成供受体,进行异体左侧单肺移植术。随机分成两组,对照组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,不予缺血后处理的干预,按常规方式进行。缺血后处理组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,常规方式获取的供体犬肺植入后,再灌注早期实施3个周期的10 s再灌～10 s再阻断,总时程1 min的缺血后处理。于供体犬肺再灌注后1、2 h时间点采集供肺标本检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的含量;采用RT-PCR技术检测供体肺脏再灌注后1、2 h时间点细胞凋亡基因Bcl-2、Bax的表达;光镜下观察供体犬肺植入后1、2 h时间点肺组织的病理变化,应用SPSS 13.0统计软件处理,以P<0.05为统计学上有显著差别。【结果】供体肺脏植入时间平均(35.9±1.7)min。缺血后处理组在1、2 h时间点的供体肺组织SOD活性水平较对照组升高、MDA含量较对照组减低,有统计学差异(P<0.05);对照组与实验组相比较,肺组织再灌注后1、2 h时间点,Bc12蛋白表达上调(P<0.05),而Bax蛋白表达下调(P<0.05);缺血后处理组肺组织光镜下观察在各时间点的炎症反应均较对照组的变化轻微。【结论】缺血后处理可以抑制再灌注时氧化自由基的堆积,从而减少供体肺的缺血再灌注损伤;缺血后处理能够通过抑制促凋亡Bax蛋白的表达,及促进抗凋亡Bc12蛋白表达,从而影响内源性细胞凋亡途径。     

苯那普利后处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的观察苯那普利后处理对大鼠心肌缺血再灌注（I/R）心肌细胞凋亡和核因子-κB（NF-κB）表达的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法应用Langendroff离体灌流装置,采用完全停灌复灌的方法制作离体大鼠心肌缺血再灌注模型。将32只SD大鼠随机等分为4组,对照组、I/R组、缺血预处理组、苯那普利后处理组。改良亮绿变色酸法（GCA）观察心肌损害程度;免疫组化法检测心肌组织中核因子-κB（NF-κB）的表达;原位末端标记法（TUNEL）测定组织中细胞凋亡率。结果与对照组比,I/R组心肌损害程度增加（P〈0.01）,免疫组织化学染色可见NF-κB蛋白表达显著增强（P〈0.01）,细胞凋亡率明显升高（P〈0.01）。与I/R组相比,苯那普利后处理组GCA染色心肌变性减轻,阳性率减低（14±7）%vs（40±17）%,（P〈0.01）,NF-κB表达减少（34.8±4.7）%vs（49.3±9.7）%,P〈0.05）,细胞凋亡率明显下降（13±1.7）%vs（18.5±2.5）%,（P〈0.01）。苯那普利后处理组和预处理组相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论苯那普利后处理具有明显降低大鼠缺血再灌注后心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与苯那普利后处理抑制NF-κB参与的细胞凋亡有关。     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心脏凋亡相关酶活性的影响

目的 观察缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注造成细胞凋亡及凋亡相关酶活性的影响。方法 采用冠状动脉左前降支结扎法制备大鼠心肌缺血再灌注模型,HE染色观察心肌组织病理学改变,TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡水平,比色法检测心肌组织总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)水平,分光光度法检测心肌组织Caspase-3、Caspase-9活性。结果 缺血再灌注造成大鼠心肌组织抗氧化能力明显降低(P＜0.01),心肌细胞凋亡明显增加(P＜0.01),Caspase-3、Caspase-9酶活性以及MDA水平明显升高(P＜0.01),缺血后处理能够改善上述表现(P＜0.05)。结论 缺血后处理可通过抑制凋亡相关蛋白酶活性减轻缺血再灌注造成的大鼠心肌细胞损伤。     

缺血后处理对大鼠肢体缺血再灌注后肾细胞凋亡的抑制作用

目的：观察缺血后处理对大鼠肢体缺血再灌注（LIR）后肾组织细胞凋亡的影响,探讨其可能机制。方法：30只SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组（IR组）和缺血后处理加再灌注组（I-postC组）,每组10只。建立大鼠肢体缺血再灌注（LIR）模型,即橡皮带环绕大鼠双后肢根部阻断血流4h再恢复血流灌注4h。对照组大鼠仅松弛环绕橡皮带不阻断血流,I-postC组大鼠则在再灌注前附加反复3次缺血5 min-再灌注5 min操作,即缺血后处理。全自动生化分析仪测各组大鼠血浆肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）和C反应蛋白（CRP）水平;免疫组织化学法检测大鼠肾组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,采用自动图像分析系统统计其定量结果并计算Bcl-2/Bax比值;TUNEL染色后在激光共聚焦显微镜下观察肾组织细胞凋亡情况,电镜下观察肾组织超微结构。结果：与对照组比较,IR组和I-postC组大鼠血浆Cr、BUN和CRP水平均明显增高（P<0.01）;与IR组比较,I-postC组大鼠血浆Cr、BUN和CRP水平均明显降低（P<0.01）。与对照组比较,IR组和I-postC组大鼠肾组织中Bax和Bcl-2表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2/Bax比值降低（P<0.05）;与IR组比较,I-postC组大鼠肾组织中Bax表达水平降低（P<0.05）,Bcl-2表达水平升高（P<0.01）,Bcl-2/Bax比值升高（P<0.05）。激光共聚焦显微镜下观察,与对照组比较,IR组大鼠肾组织中凋亡细胞明显增多;与IR组比较,I-postC组大鼠肾组织中凋亡细胞明显减少。透射电镜下观察,对照组大鼠肾组织细胞结构清晰完整;IR组大鼠肾组织中肾近曲小管上皮细胞核固缩,溶酶体和致密颗粒沉积增多,线粒体数目减少,部分线粒体嵴断裂或模糊,肾小球足突细胞突起不规则、融合,有空泡现象,粗面内质网扩张;与IR组比较,I-postC组大鼠肾组织中肾小管上皮细胞及肾小球损伤有一定程度改善。结论：LIR可诱发大鼠肾组织细胞凋亡,缺血后处理可抑制肢体缺血再灌注后的肾细胞凋亡,对改善大鼠肾功能有一定作用。     

缺血后处理对家兔缺血再灌注心肌窦房结细胞凋亡的影响

目的：在家兔急性心肌梗死模型中观察缺血后处理对家兔心肌窦房结细胞缺血再灌注（IR）的作用及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：在体成年家兔右冠状动脉缺血再灌注模型分4组：正常对照组、IR组、缺血预处理（IPC）组、缺血后处理组。观察缺血后处理对家兔在体窦房结细胞IR损伤及Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果：对照组细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达极少;IPC、缺血后处理组较IR组窦房结细胞凋亡数目显著减少,Bcl-2蛋白表达显著增强,Bax蛋白表达显著减弱;IPC组与缺血后处理组细胞凋亡数目、Bcl-2和Bax蛋白表达无显著差异。结论：IR损伤可诱导窦房结细胞凋亡,IPC、缺血后处理可通过提高Bcl-2蛋白表达同时下调Bax蛋白表达水平从而减少窦房结细胞凋亡,但两组干预效果无明显差异。     

缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤的影响及其机制.方法 采用摘除右肾夹闭左侧肾蒂45 min再灌注6 h制备肾脏缺血再灌注损伤模型.2 w前已行右肾切除术的30只雄性SD大鼠随机分为3组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血后处理组(IPO组).IPO组在夹闭左侧肾蒂45 min后,再灌注10 s,缺血10 s,重复6次后,完全恢复肾血流.再灌注6 h处死大鼠抽取颈动脉血和切取左肾.测定血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)浓度,肾组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;光镜下观察肾组织病理学改变 ,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与S组比较,I/R组和IPO组Cr和BUN浓度升高,肾组织SOD活性降低,MDA含量升高,肾细胞凋亡率升高,病理损伤明显.与I/R组比较,IPO组Cr和BUN浓度降低,肾组织SOD活性升高,MDA含量降低,肾细胞凋亡率降低,病理损伤减轻.结论 缺血后处理能减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其机制与增强肾脏抗氧化能力和制肾组织细胞凋亡有关.     

缺血后适应对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及其与P-Akt的关系

 目的探讨缺血后适应对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及其信号机制。方法2周龄健康SD大鼠,体质量250～300g,随机分为空白对照组、缺血再灌注组及缺血后适应组。观测各组大鼠心脏冠状动脉灌注流量、心肌梗死范围,Westernblot检测磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)的表达,透射电镜下观察心肌和线粒体的改变。结果缺血后适应组较缺血再灌注组冠状动脉灌注流量明显增加,心肌梗死范围明显减小,P-Akt的表达明显增强,心肌纤维和线粒体的完整程度明显较好。结论缺血后处理在大鼠离体心脏具有显著的保护作用,这一作用可能与Akt激活有关。     

心肌梗死大鼠非梗死区心肌超微结构的变化

目的探讨心肌梗死后不同阶段非梗死区心肌超微结构的变化。方法雌性Wistar大鼠,通过结扎左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。术后24h、1周、2周及4周随机从各组中各取10～12只大鼠,分别行病理组织学检查及非梗死区心肌组织的凋亡细胞检测(TUNEL标记),透射电镜及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA检测(RT-PCR)。结果大鼠梗死范围为24%～33%。透射电镜可见假手术组心肌细胞核膜完整,核质分布均匀,染色较淡,胞浆内线粒体膜完整,嵴清楚;术后1～4W心梗组可见心肌细胞的凋亡改变,且凋亡细胞指数逐渐升高,Ⅲ型胶原mRNA升高;术后2～4W心梗组心肌间质成纤维细胞增多,间质胶原纤维明显增多,Ⅰ型胶原mRNA上升。结论大鼠心梗2周后非梗死区心肌发生细胞凋亡改变,出现间质纤维化。间质胶原的沉积可能是导致细胞凋亡的机制之一。     

缺血后处理与糖尿病心肌的研究进展

缺血性心脏病是导致患者死亡的主要原因,缺血部位的血流再通至关重要,但随血流再通发生的心肌缺血再灌注损伤会严重影响患者预后,糖尿病患者较非糖尿病患者发生心肌缺血再灌注损伤的病死率升高。目前认为,糖尿病可弱化缺血后处理(IPO)的心肌保护作用,研究高血糖状态对心肌缺血再灌注损伤的影响、IPO心肌保护效应弱化的机制以及恢复IPO对糖尿病心肌保护作用的措施,对降低糖尿病患者病死率具有重要的临床意义和社会价值。     

螺内酯对心肌梗死大鼠非梗死区胶原的影响

目的 观察螺内酯对大鼠心肌梗死(MI)后不同阶段非梗死区(NIZ)胶原的影响.方法 雌性Wistar大鼠,通过结扎左冠状动脉前降支制备心梗模型.术后24 h、1周、2周及4周随机从各组中各取7～12只大鼠,分别行NIZ心肌胶原容积分数(CVF)及醛固酮水平(Aldo)的检测.结果 心梗组NIZ心肌的CVF于2周开始升高(P<0.05).用螺内酯后4周时开始明显下降(P<0.05),但仍然高于假手术组(P<0.05).心梗组NIZ心肌的Aldo于术后2周开始明显升高(P<0.01).也于用药2周开始回落(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05).结论 大鼠心梗2周后NIZ发生胶原增生,且与同期升高的醛固酮水平一致.心梗后早期使用螺内酯,可明显降低醛固酮水平,长期使用可能对NIZ心肌胶原的增生有逆转作用.     

缺血后处理对缺血/再灌注心肌保护作用的研究

缺血后处理是指在心肌再灌注之前进行数次短暂再灌注/缺血的循环,是近年提出的一种新的减轻缺血/再灌注损伤的方法。它具有同缺血预处理相似的心肌保护效应。后处理的这些保护作用可能和内源性活性物质如腺苷、一氧化氮和阿片肽增多、蛋白激酶的活化、线粒体的ATP敏感性钾通道开放和线粒体通透性转换孔道关闭有关。现就缺血后处理的发现、心肌保护机制和临床应用予以简要综述。     

药物模拟心肌缺血后适应的研究进展

应用缺血后适应(IPost)的机制进行药物后适应的开发研究成为临床治疗缺血性心脏疾病的研究热点。IPost的发生机制与其激发心肌内源性活性物质的释放、启动保护性信号转导通路密切相关。目前已发现许多药物通过多个信号转导通路证实参与IPost的发生。现就能够模拟心肌IPost发挥保护缺血心肌作用的相关药物、信号转导通路的最新研究进展作一综述。     

心肌缺血预处理对未成熟心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨心肌缺血预处理(MIP)对未成熟心肌bcl-2、bax、fas蛋白表达的影响。方法 采用兔Langen-dorff模型，24只幼兔随机分为3组，对照组(c，n=8)：仅灌注KH液180min，然后取标本；缺血／再灌注组(L／R，n=8)：灌注20min后，停灌45min，复灌120min；心肌缺血预处理组(MIP，n=8)，灌注20min，反复2次停灌5min，复灌5min，然后重复I／R组缺血／再灌方法。以凋亡细胞原位标记、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯及bcl-2、bax、fas蛋白表达作为检查指标。结果琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯：MIP组与I／R组比较，光密度明显减弱；MIP组与I／R组比较，bcl-2表达明显增多，bax、fas表达明显减少。结论 MIP通过影响bcl-2、bax、fas基因蛋白的表达减少心肌细胞凋亡。     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌间质的保护作用

目的：探讨缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌间质的保护作用及与心功能的关系。方法：24只SD大鼠随机分为3组,假手术组（SC组）、缺血再灌注组（I/R组）和缺血后处理组（IPTC组）。观察各组心肌羟脯氨酸含量和胶原纤维含量,记录左室血流动力学变化、测定血浆中MDA和SOD浓度改变及观察心肌超微结构变化。结果：IPTC组心肌羟脯氨酸含量、胶原纤维含量、左室舒缩功能明显高于I/R组,心脏超微结构损伤明显减轻。同时,血浆SOD活力增强而MDA含量降低。结论：IPTC对I/R大鼠心肌间质有明显的保护作用,且与心功能的保护相关。其机制可能是通过清除体内自由基、增强机体的抗氧化能力、减少心肌胶原的降解,维持左室结构而起到改善心功能的作用。     

心肌缺血后适应的保护机制研究进展

再灌注治疗是急性心肌梗死的重要治疗手段,再灌注治疗在迅速恢复缺血心肌的血液灌注,挽救大量濒死心肌的同时也引起再灌注损伤。近年来大量实验研究及临床应用表明,后适应可以减轻再灌注损伤,其信号转导通路虽未完全阐明,但抑制再灌注早期线粒体mPTP开放,减轻mPTP开放引起的细胞坏死被认为是其作用的重要原因。