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相似文献
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1.
目的:探讨去甲氧柔红霉素( idarubicin,IDA)联合雷帕霉素(rapamycin,Rapa)抗人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL) Jurkat细胞株的效应及机制.方法:应用CCK-8法分析两药联用对细胞增殖的影响;Isobologram法分析两药联合作用的性质;电镜形态学观察和Annexin V/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测凋亡相关基因Caspase3、PARP、Caspase8、Caspase9及Akt、p-Akt、P85S6K、p-P85S6K、P70S6K、p-P7OS6K、ERK1/2、p-ERK1/2等蛋白质水平表达.结果:CCK-8法示IDA联合Rapa能明显降低IDA的半数抑制浓度(50% inhibition concentration,IC50)值.Isobologram法示两药联合指数小于1.免疫印迹法示两药联用组较IDA单用组更能激活Caspase3和底物PARP,Caspase8和Caspase9在两药联用组均呈现明显激活.IDA联用Rapa后能使mTOR 信号通路上游的Akt及下游的P85S6K、P70S6K分子磷酸化水平明显降低,并能协同下调ERK的磷酸化水平.结论:Rapa和IDA对Jurkat细胞的生长抑制具有协同作用,两药联用时细胞凋亡增加,且通过线粒体和细胞膜双途径增强凋亡效应.其协同机制可能与Rapa逆转IDA引起的Akt/mTOR信号通路激活,并抑制ERK信号活化有关.  相似文献   

2.
目的 研究二甲双胍(Met)联合异羟肟酸(SAHA)应用对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法MTS法分别检测二甲双胍、SAHA和二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞凋亡的影响;Western Blot检测联合用药后细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果二甲双胍和SAHA分别对MG-63细胞生长有抑制作用,二甲双胍联合SAHA应用对MG-63细胞生长的抑制作用更加显著;二甲双胍联合SAHA应用与单药相比能够明显降低MG-63细胞克隆形成率,并且促进细胞凋亡;联合用药后P27,P21,Cyclin D1,Mcl-1,XIAP,Bim,Cytochrome C蛋白发生明显改变。结论二甲双胍联合SAHA应用与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,促进其凋亡,可见两药联用对肿瘤细胞的杀伤具有协同性。  相似文献   

3.
王春芳  刘兵  孙光  徐瑜杰  彭勃 《海南医学》2016,(23):3802-3807
目的 探讨二甲双胍对人结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 二甲双胍处理体外常规培养人结直肠癌细胞HCT-15、COLO205,通过MTT检测结直肠癌细胞的生长活力;流式细胞仪检测细胞的周期及凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bad、Bcl-2、Cleaved caspase-3及信号通路蛋白Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、S6K、p-S6K的表达变化.结果 不同浓度的二甲双胍作用HCT-15、COLO205细胞72 h后细胞活力明显受到抑制,并呈现浓度依赖性;经流式细胞术分析,二甲双胍能够促使细胞停滞于G0/G1期,同时上调细胞早期及晚期凋亡所占比率;Western blot分析发现,Bad、cleaved caspase-3表达量随着二甲双胍浓度的升高而上调,Bcl-2表达量随着二甲双胍浓度升高而下降;同时,p-Akt及p-mTOR、p-S6K的表达量均明显被抑制,但Akt、mTOR、S6K总蛋白表达量无明显变化.结论 二甲双胍能够抑制结直肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡;而具体机制可能与抑制Akt及mTOR通路活性有关.  相似文献   

4.
目的:研究二甲双胍对H2O2诱导的PC12 细胞损伤可能的保护作用机制。方法:使用CCK-8法检测二甲双胍对PC12细胞的细胞活力;建立H2O2损伤PC12细胞的细胞模型,使用CCK-8法和LDH法检测二甲双胍对PC12细胞生存率和LDH释放量,采用Hoechst 33342染色法和流式细胞术检测二甲双胍对PC12细胞的凋亡和ROS水平情况。qPCR和Western blot法检测二甲双胍对Nrf2/HO-1通路mRNA和蛋白表达水平。使用小干扰RNA沉默Nrf2检测二甲双胍对H2O2诱导细胞的保护作用。结果:二甲双胍在浓度0.5、1和2 mmol/L下对PC12细胞不表现毒性作用。预处理二甲双胍可对H2O2造成的PC12细胞损伤产生浓度依赖性保护作用和降低LDH。同时,二甲双胍降低H2O2造成的细胞凋亡和ROS水平。二甲双胍能激活细胞内Nrf2/HO-1通路起到抗氧化保护作用。结论:二甲双胍预处理后通过激活细胞内Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导的 PC12 细胞损伤具有保护作用。  相似文献   

5.
目的 研究隐丹参酮(cryptotanshinone,CPT)与顺铂(cisplatin,DDP)联合作用于非小细胞肺癌PC9细胞具有协同抗肿瘤作用及其可能的分子机制,为隐丹参酮联合顺铂应用于临床提供理论依据。方法 肺癌PC9细胞分为对照组、隐丹参酮组、顺铂组及联合用药组,MTT法检测和免疫印迹技术检测细胞增殖凋亡,免疫印迹技术、RT-PCR检测抗凋亡分子的表达、STAT3及上游调控激酶JAK2/SRC蛋白表达水平及磷酸化水平。结果 隐丹参酮联合顺铂明显抑制肺癌PC9细胞的增殖作用(P<0.05),联合用药组作用于肺癌PC9细胞24h后,caspase 3和caspase 9及PARP剪切段蛋白表达明显增高,高于对照组及单药组,联合用药后Mcl-1、Bcl-2、XIAP、survivin抗凋亡蛋白表达下调, STAT3磷酸化Tyr705和ser727水平下降,其上游JAK2磷酸化水平下调,SRC蛋白及磷酸化水平变化不明显。结论 隐丹参酮与顺铂具有协同抗肺癌PC9细胞的作用,其作用机制为通过抑制STAT3磷酸化Tyr705和ser727表达水平进而下调Mcl-1、Bcl-2、XIAP、Survivin蛋白的表达及上调caspase 3和caspase 9及PARP剪切段蛋白表达。  相似文献   

6.
目的 探讨吉非替尼联合二甲双胍对肺癌H1975细胞的抑制增效作用及其机制.方法 采用MTT、克隆形成实验观察吉非替尼与二甲双胍单用及联用对原发性耐药非小细胞肺癌H1975细胞增殖活性的影响;Matrigel包被的Transwell小室检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot、免疫荧光法检测凋亡和上皮细胞-间充质转化(epithelial tomesenchymal transition,EMT)相关蛋白的变化.结果 吉非替尼联合二甲双胍组对H1975细胞增殖、侵袭及迁移抑制效应优于吉非替尼组,协同增效作用明显(P<0.05);吉非替尼和二甲双胍单用时较对照组的细胞凋亡率增加,当两者联合作用时细胞凋亡率增加更显著(P<0.05),且明显下调抗凋亡相关蛋白(Bcl-xl、Mcl-1)和上调促凋亡蛋白Bax;两药联用明显逆转H1975细胞EMT的发生;间质细胞相关蛋白(Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail)表达水平降低,上皮细胞相关蛋白E-cadhenn表达水平升高.结论 吉非替尼联合二甲双胍可显著抑制EGFR-TKIs原发性耐药非小细胞肺癌H1975细胞的增殖、侵袭和迁移,促使肿瘤细胞凋亡;其机制可能通过激活线粒体凋亡途径及逆转EMT的发生来发挥抗肿瘤作用.  相似文献   

7.
目的 探讨AZD9291作用于H1975肺癌细胞后细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKT)和信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路变化,联合STAT3抑制剂后效应及其可能机制.方法 同浓度单药AZD9291作用于H1975后,Western blot检测磷酸化及非磷酸化STAT3、 ERK、AKT蛋白的表达.MTT法检测AZD9291与STAT3抑制剂单药及联合对细胞增殖的影响.流式细胞术检测单药及联合对细胞凋亡的影响.Western blot检测AZD9291联合 STAT3抑制剂后磷酸化及非磷酸化STAT3蛋白变化情况.结果 单药AZD9291作用细胞后,p-ERK、p-AKT表达降低, p-STAT3增高.两药联合可显著抑制H1975细胞的增殖,强于单药组(P<0.05),表现为协同作用(联合指数<1).双药联合显示出更强的诱导凋亡的作用.联合组与单药组相比下调p-STAT3蛋白作用.结论 AZD9291和STAT3抑制剂联合用药对H1975的增殖有明显抑制作用并可以促进其凋亡的发生,具有协同作用,主要机制为下调p-STAT3蛋白表达.  相似文献   

8.
目的本研究从细胞生物学角度检测二甲双胍对小鼠胰岛瘤MIN6的影响,并探讨此过程中包含的分子生物学机制。方法 MTT法检测不同浓度二甲双胍(1、2、5、10、20 mmol/L)对MIN6细胞活力的影响,细胞划痕实验检测二甲双胍对MIN6细胞迁移的影响,免疫印记实验检测此过程中细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3表达的变化,及AMPK和JNK信号通路蛋白磷酸化水平的变化。结果二甲双胍浓度大于10 mmol/L时可以抑制MIN6细胞的活力(P<0.01),降低其迁移能力(P<0.01),高浓度二甲双胍可以上调细胞内凋亡蛋白Bax(P<0.05)和p-AMPK的表达(P<0.05),降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,增加caspase3剪切体(P<0.05)。同时,二甲双胍可以降低MIN6细胞内JNK信号通路的磷酸化水平(P<0.05)。结论高浓度二甲双胍可以抑制MIN6细胞的增殖和迁移,其作用可能与降低了JNK信号的通路活化有关。  相似文献   

9.
目的:探讨五味子乙素(Sch B)抑制吉非替尼(Gef)耐药肺癌细胞的增殖作用及机制。方法:采用浓度梯度法驯化PC9细胞,获得PC9/GR耐药细胞,比较PC9与PC9/GR细胞增殖、胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)表达情况;经Sch B处理后,观察PC9/GR细胞增殖、凋亡及IGFBP2和磷酸化p-AKT、p-mTORC1表达情况,并利用IGFBP2过表达腺病毒转染技术验证IGFBP2在Sch B抑制PC9/GR细胞增殖中的作用。结果:PC9/GR细胞内IGFBP2表达高于PC9细胞(P<0.05),Sch B处理后,PC9/GR细胞存活率下降,细胞凋亡增加,IGFBP2表达和AKT、mTORC1磷酸化下降(P<0.05)。IGFBP2-OE转染后PC9/GR细胞内p-AKT、p-mTORC1明显增加(P<0.05),Sch B对PC9/GR增殖抑制作用下降(P<0.05)。结论:Sch B下调IGFBP2表达,抑制PC9/GR细胞增殖。  相似文献   

10.
目的 探究苦参碱(Mat)联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10 μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexin Ⅴ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高(P<0.01)。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡([ 42.50±2.63)%,P<0.01],显著增加了细胞周期G0/G1期细胞比率([ 57.23±1.44)%,P<0.01]。Western blot结果表明,两药联合后K562细胞p-mTOR、CyclinD1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平明显增高(P<0.01),Caspase-9蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论 Mat和LY294002联合应用可以增强对K562细胞生长抑制的协同作用,其机制可能是通过有效下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt表达,使p-mTOR、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达下调,Caspase-9蛋白表达上调来实现的。  相似文献   

11.
Objective To explore the role of glucocorticoid (GC) receptor (GR) in rapamycin’s reversion of GC resistance in humanGC-resistant T-acute lymphoblastic leukemia (ALL) CEM-C1 cells. Methods CEM-C1 cells were cultured in vitro and treated with rapamycin at different concentrations with or without 1 μmol/L dexamethasone (Dex). 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) test was performed to assess cell proliferation. The cell cycle and cell apoptosis were analyzed by flow cytometry. The expression of GRα mRNA was determined by real-time quantitative RT-PCR. The expression of GR, p-70S6K, Mcl-1, and Bim proteins was detected by Western blot. Results When incubated with rapamycin at different concentrations, CEM-C1 cells showed significant growth inhibition in a time- and concentration-dependent manner. The growth inhibition was synergistically increased when CEM-C1 cells were treated with rapamycin plus 1 μmol/L Dex. CEM-C1 cells treated with rapamycin alone showed no apparent apoptosis, and were arrested at G0/G1 phase. After the treatment with Dex plus rapamycin, CEM-C1 cells demonstrated apparent apoptosis and increased the cell cycle arrested at G0/G1 phase. Rapamycin combined with Dex up-regulated GRα, phosphorylated GR(p-GR), and pro-apoptotic protein Bim-EL in CEM-C1 cells, but inhibited the expression of p-p70S6K, a downstream target protein ofmTOR (mammalian target of rapamycin). Conclusion After the treatment with rapamycin plus Dex, Dex resistant CEM-C1 cells induce growth inhibition and apoptosis. The underlying mechanism may involve inhibition of the mTOR signaling pathway and also be associated with up-regulation of GR expression and activation of GC-GR signaling pathway.  相似文献   

12.
目的 探究表皮生长因子受体络氨酸激酶抑制剂(EGFR TKIs)与化疗药物单用、联用,以及顺 序给药时,对获得性TKI 耐药的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系凋亡的影响。方法 选用存在TKI 耐药基 因突变(T790M,cMET)的NSCLC 细胞系PC9ER、H1975 和HCC827GR,以及TKI 敏感基因突变(19 外 显子突变)的细胞系PC9 和HCC827。采用MTS 法检测化疗药物顺铂和紫杉醇,以及TKI 厄洛替尼单用、 联用,或者顺序给药干预各NSCLC 细胞系时的细胞活性状态,并利用集落形成试验加以验证。采用Western blot 检测各处理组蛋白裂解液中细胞凋亡标志物cPARP 含量变化。结果 MTS 法和集落形成试验结果发 现,EGFR TKIs 联合化疗能协同增加NSCLC 细胞系的细胞毒性。同时给予EGFR TKIs 和化疗或先化疗再用 EGFR TKIs,可获得最佳干预效果。Western bolt 检测结果表明,联合用药后cPARP 蛋白表达升高。而且先 化疗后EGFR TKIs 干预比两者顺序颠倒的促凋亡作用更强。结论 先化疗后EGFR TKIs 干预的最优给药顺 序可使对获得性TKI 耐药的NSCLC 细胞系产生最强的促凋亡作用。  相似文献   

13.
目的 探讨阿糖胞苷(Ara-C)通过自噬途径影响人红白血病K562细胞株增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度的Ara-C作用24 h和48 h后细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测凋亡率和周期;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态,吖啶橙染色观察细胞酸性自噬小泡;Western blot检测p38和p-p38蛋白表达变化;RT-PCR和免疫荧光检测自噬凋亡相关基因和蛋白的表达水平.结果 CCK-8检测发现不同浓度的Ara-C均能抑制K562细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性;FCM检测显示Ara-C能增加细胞的凋亡和将细胞周期阻滞在S期;Hoechest染色发现Ara-C处理K562细胞后呈凋亡形态改变;吖啶橙染色发现Ara-C组细胞绿色荧光增强,细胞出现大量的酸性自噬小泡;RT-PCR检测发现Ara-C上调自噬关键基因Beclin-1、LC3A和LC3B表达;Western blot检测发现Ara-C增加磷酸化p38表达;免疫荧光检测发现Ara-C增加LC3表达.结论 Ara-C能够激活p-p38介导的K562细胞发生自噬,进而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡作用.  相似文献   

14.
目的 探究槲皮素(Que)对人非小细胞肺癌(NSCLC)获得性耐药细胞株PC9/Gefitinib-Resisitant (GR)细胞的凋亡的影响及作用机制.方法 MTT法检测不同浓度Que对PC9/GR细胞增殖的影响,计算其半数抑制浓度(IC50)值.光镜下观察细胞形态学改变.流式细胞术检测Que介导的细胞凋亡.Western blot法检测Stat3/Mcl-1信号途径相关蛋白水平的改变.结果 MTT显示Que可明显抑制PC9/GR细胞增殖,并呈浓度依赖性,IC50值为(74.83±4.83)μmol/L.流式细胞学结果表明,与对照组相比,Que 可呈浓度依赖性地促进细胞凋亡(P<0.05).Western blot 表明Que可减弱Stat3蛋白的活化水平,其下游的凋亡相关蛋白Mcl-1表达亦减弱(P<0.05).结论 Que对获得性耐药NSCLC细胞PC9/GR具有较强的抗肿瘤作用,作用机制可能与Stat3/Mcl-1途径介导的细胞凋亡密切相关.  相似文献   

15.
目的:探讨长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EGFR)-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐药之间的相关性。方法:选择EGFR19外显子区缺失突变的细胞株以及野生型细胞株进行研究,应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测耐吉非替尼细胞株PC9/GR及亲本细胞株PC9中BANCR的表达差异,发现BANCR在PC9/GR细胞中显著低表达。在PC9/GR细胞中过表达BANCR,分别应用CCK8法、克隆形成实验、流式细胞术检测过表达后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性,细胞增殖能力,联合吉非替尼处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后对PC9/GR细胞上皮间质转化(EMT)的影响。结果:①吉非替尼的敏感细胞株的RNA BANCR表达水平较高,耐药细胞株的RNA BANCR表达水平较低(P<0.05)。②在PC9/GR细胞中过表达BANCR,相对于对照组,吉非替尼对PC9/GR细胞的半数抑制浓度(IC50)减低,前后差异具有统计学意义(P<0.05)。过表达BANCR后PC9/GR细胞增殖能力减弱,经吉非替尼处理后细胞凋亡增多(P<0.05)。③与空白对照组比较,Western blot结果显示过表达BANCR的PC9/GR细胞E-钙粘蛋白表达水平明显升高,N-钙粘蛋白水平明显降低。结论:长链非编码RNA BANCR可诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖;过表达BANCR可以增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,逆转其耐药性,这一作用机制可能是通过调控EMT过程来发挥作用的。  相似文献   

16.
探究益气祛痰解毒方对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLC)细胞的抑制作用和相关分子机制。方法 构建FRMD6(FERM domain-containing protein 6, FRMD6)敲低PC9细胞株。将PC9细胞分为对照组,shNC组,shFRMD6组,益气祛痰解毒方+shNC组,益气祛痰解毒方+shFRMD6组。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组PC9细胞的FRMD6表达水平变化;应用CCK-8法检测各组PC9细胞增殖率;采用Annexin V-FITC/PI法检测试各组PC9细胞凋亡情况;利用Transwell实验检测各组PC9细胞侵袭能力;利用Western blot检测各组FRMD6, c-MET, p-PI3K, PI3K, p-Akt和Akt蛋白表达的变化。结果 CCK8检测结果表明,与对照组相比,益气祛痰解毒方对PC9细胞增殖具有显著抑制效果(P < 0.05);qRT-PCR和Western blot结果显示,发现益气祛痰解毒方可以上调FRMD6表达。进一步进行qRT-PCR和Western blot结果表明FRMD6敲低PC9细胞株构建成功;益气祛痰解毒方处理能够抑制PC9细胞增殖、侵袭,并促进细胞凋亡;同时,与shNC组相比,益气祛痰解毒方+shNC组均可显著抑制PC9细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡(P < 0.05)。Western blot结果发现,益气祛痰解毒方+shNC组相较于shNC组的c-MET、p-PI3K和p-Akt表达明显降低,说明使用益气祛痰解毒方处理可抑制c-MET/PI3K/AKT通路;此外,与shFRMD6组相比,益气祛痰解毒方+shFRMD6组c-MET、p-PI3K和p-Akt表达显著下调,敲低FRMD6表达会显著减弱益气祛痰解毒方对c-MET/PI3K/AKT通路的抑制作用。结论 益气祛痰解毒方能够抑制肺癌PC9细胞增殖、降低侵袭能力和促进细胞凋亡,其分子机制可能通过FRMD6调控c-MET/PI3K/AKT通路来实现。  相似文献   

17.
目的观察XB130 表达上调后人肝癌细胞HepG2 增殖和凋亡的变化,并探讨其作用机制。方法Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞株中XB130表达;构建过表达质粒pCMVEGFP-XB130 转染HepG2 细胞,实验分为pCMV-EGFP-XB130 组(pCMV-EGFP-XB130 转染),空白对照组(EGFP 转染)。以免疫荧光、Western blot法及qRT-PCR 法检测上调效率。Western blot 法检测PI3K/Akt通路相关基因表达;采用MTT法检测转染后细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果XB130 蛋白及其mRNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、HepG2 和MHCC97H 中均有表达,在HepG2 细胞株中表达量最低( F=6.342 和5.424,均P=0.001)。与EGFP 组比较,pCMV-EGFP-XB130 组中p-p21、p-p27、p-FOXO3a 及Pro Capase-9蛋白表达上调(t =4.652,3.558,6.743 和3.021,均P<0.05);XB130 表达上调后在72 及96 h HepG2 细胞增殖能力增强( t=4.752 和8.542,均P=0.001);XB130 表达上调后HepG2 细胞凋亡率降低(t =7.467,P =0.001)。结论XB130 表达上调通过PI3K/Akt信号通路促进肝细胞癌细胞增殖,抑制凋亡。  相似文献   

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