CD7抗原在急性髓系白血病微小残留病灶检测中的应用研究

目的研究CD7抗原在急性髓系白血病(AML)中的表达及CD7在AML微小残留病灶(MRD)检测中的意义。方法选取安阳地区医院2012年5月至2015年6月收治的186例初发AML患者,应用流式细胞术(FCM)进行免疫表型分析,观察CD7在骨髓原始细胞中的表达情况。对于完全缓解的CD7+AML患者,将其他多种髓系抗体与CD7构成组合,进行MRD检测;对于CD7-AML完全缓解患者,根据初发免疫表型进行多种髓系抗体组合,进行MRD检测。以MRD≥1.0×10~(-4)者计为阳性,MRD<1.0×10~(-4)计为阴性,跟踪随访3~24个月,记录MRD值、是否复发及骨髓确诊复发时间。结果 186例AML患者中检测出51例CD7+患者,对达完全缓解的33例患者,应用FCM进行MRD追踪检测,检测到26例MRD阳性患者中的21例骨髓复发,7例阴性患者中的3例骨髓复发。CD7+组MRD阳性复发率为63.6%。CD7-组135例,对达完全缓解的90例患者应用FCM进行MRD追踪,检测到35例MRD阳性患者中的20例复发,55例阴性患者中的17例骨髓复发,CD7-组MRD阳性复发率为22.2%。CD7+组MRD阳性患者复发率比CD7-组MRD阳性患者高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在CD7+AML患者MRD检测中,CD7抗原与其他髓系抗原组合能够很好区分正常细胞和白血病细胞。CD7抗原可以作为AML-MRD检测的重要指标,为调整AML治疗策略提供依据。     

实时荧光定量PCR检测急性髓系白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的：应用实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR,RQ-PCR）检测WT1基因表达水平,探讨其在监测白血病微小残留病（minimal residual disease,MRD）中的临床意义。方法：采用RQ-PCR检测70例急性髓系白血病（AML）患者、20例正常对照者骨髓细胞WTl基因拷贝数及内参基因（ABL）拷贝数,以NQ比值=WTl基因拷贝数/内参基因拷贝数计算基因表达水平。结果：初诊组与复发组WT1表达水平分别与完全缓解组及对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）,而对照组与完全缓解组之间比较及初诊与复发组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）,即初诊急性白血病患者WT1表达水平明显高于完全缓解组及对照组,复发时同样高于完全缓解组及对照组。在初诊的各种白血病亚型中,M3亚型WT1表达水平最高（平均值为3.44）,M5亚型WT1表达水平最低（平均值为0.25）。4例短期随访提示在达到完全缓解时WT1表达水平下降,而复发时再次升高。结论：用RQ-PCR测定WT1基因的表达,可以作为白血病MRD的一项监测指标。     

CD7在成人急性髓系白血病的表达及其在微小残留病检测中的应用

目的观察CD7在成人急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia,AML)中的表达情况,并探讨CD7在AML微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)检测中的意义。方法用四色流式细胞术(FCM)分析112例初发的成人AML患者的免疫表型,观察CD7在AML患者骨髓细胞上的表达情况,并将CD7抗体与其他多种髓系抗体(如CD13、CD33、CD117等)构成三色或四色组合,用于CD7+AML患者MRD的检测。结果112例AML患者中共检测到34例CD7阳性病例,其FAB(French-American-British)亚型分别为:M11例,M226例,M32例,M4/M55例。所有这些患者的白血病细胞胞质均CD3及CD79a阴性。CD7+组与CD7-组间未见明显的年龄及性别差异。CD7与CD34的阳性表达呈显著相关(P=0.002),91.2%的CD7+AML同时伴有CD34的表达。在CD7+AML的MRD检测中,CD7与其他髓系抗原组合能够在双参数散点图上很好地区分白血病细胞与正常细胞。结论在成人AML中,不同的FAB亚型均可有CD7+病例,其总的阳性率约为30.4%,CD7表达与CD34的表达呈明显的相关性,提示CD7+AML可能起源于一个较早的恶性克隆,CD7抗原阳性也是AML-MRD检测的一个很好指标,为AML-MRD检测率低提供一定的弥补作用。     

实时荧光定量PCR检测白血病患者WT1基因表达及临床意义

目的 研究白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.方法 建立实时荧光定量PCR检测WT1基因表达技术,并分析65例白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.结果 建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数＞0.99.急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者WT1基因表达水平较正常对照组均显著升高(P=0.001).慢性髓性白血病(CML)急变期患者WT1基因表达水平显著高于慢性期.WT1表达量与急性白血病发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无明显相关关系.AML和ALL患者中WT1基因高表达患者与低表达病例CR率差异无显著性.急性白血病患者治疗缓解后WT1的表达量较治疗前显著下降(P=0.032).随访显示WT1持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发.结论 实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者WT1基因表达量可预测难治复发及用于MRD的检测.     

TRX-2基因表达在急性白血病微小残留病灶监测中的作用

目的: 探讨硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达在急性白血病(AL)微小残留病灶(MRD)监测中的价值。方法: 采用实时荧光定量聚合酶反应(RQ-PCR)检测AL初发组(68例)、血液学完全缓解(CHR)组(57例)和复发组(25例)TRX-2基因表达的变化,25名骨髓捐献者作为正常对照组,TRX-2基因表达量的上限(91)为参考值上限,回顾分析复发组在CHR期(骨髓原始细胞计数<5%)TRX-2基因表达的水平,比较其与流式细胞术(FCM)检测的MRD的相关性。结果: TRX-2基因表达在完全缓解组与初治组和复发组之间差异有统计学意义(P<0.01);复发患者CHR期(骨髓原始细胞<5%),21例(21/25)TRX-2基因呈高表达(>91),与流式细胞术检测的MRD具有相关性(r=0.874, P=0.0005)。结论: TRX-2基因为急性白血病新的广谱标志,适用于MRD的监测。     

CD184表达与急性髓细胞白血病预后相关因素分析

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)患者CD184表达与预后关系。方法:应用流式细胞术(FCM)检测了54例初治急性髓细胞白血病患者CD184表达情况,并分析CD184表达与CR1率,髓外浸润,复发率相关性。结果:CD184阳性组AML患者CR1率低,髓外浸润,复发率均较CD184阴性组增高,有统计学差异(P<0.05);CR1组患者CD184水平较非CR1组患者低,有统计学差异(P<0.05)。结论:CD184高表达与CR1率低,髓外浸润,复发等不良预后有关;CD184是急性髓细胞白血病预后预测因子。     

流式细胞术在急性淋巴细胞性白血病微小残留病检测中的应用

目的　用流式细胞术检测急性淋巴细胞性白血病 (ALL)患者的微小残留病 (MRD) ,为临床MRD的检测提供科学依据 ,并在此基础上 ,探讨MRD的临床意义。方法　 3 3例初发白血病患者均接受 4～ 6周诱导化疗 ,获得完全缓解后 ,进行巩固化疗。在诱导化疗结束时 ,巩固化疗第 12、2 4、3 6周 ,应用流式细胞仪 (FCM)以ALL患者白血病细胞的特异分化抗原为标志监测MRD。结果　初诊时FCM检测 3 3例患者骨髓均有淋巴系分化抗原表达 ,在诱导化疗结束时 ,巩固化疗第 12、2 4、3 6周 ,FCM检测MRD检出率分别为 42 4%、3 1 3 %、13 8%、12 5 %。在按年龄 (以 18岁为界 )、性别、初发病时白细胞计数 (5 0×10 9/L为界 )、Ph染色体、My表达、CNSL等因素分别分组中 ,各个时间段MRD的检出率均无差别。MRD阳性及白细胞计数大于 5 0× 10 9/L(P <0 10 )为复发的高危因素。结论　①白细胞分化抗原可作为免疫学标志用FCM方法检测ALL患者的MRD。②MRD与临床复发高度相关。③MRD可能为ALL患者一个独立的预后不良的因素。     

流式细胞技术在急性髓系白血病微小残留病检测中的应用

急性髓系白血病(AML)占急性白血病的60%～70%。AML患者初诊时约存在1012的白血病细胞,而经过化疗达完全缓解(CR)后仍存在相当数量(可达108～1010)的白血病细胞,这些细胞成为疾病复发的根源,称为微小残留病(MRD)。目前AML的治疗主要根据遗传学(细胞遗传学和分子生物学)特征进行危险度分层治疗,越来越多的证据表明将MRD监测的结果纳入危险程度分层的标准或根据MRD监测情况进行动态的危险度分组、给予相应的治疗干预,对患者缓解后的治疗有着更加实际的意义。     

急性白血病细胞端粒结合蛋白2表达的研究

目的研究人类白血病细胞株及原代白血病细胞中人端粒结合蛋白2(TRF2)的表达.方法应用实时定量RT-PCR,检测白血病细胞株及原代白血病细胞中TRF2 mRNA的表达,应用Western Blot,检测TRF2蛋白的表达.结果T淋巴系白血病细胞株的TRF2表达显著高于骨髓单个核细胞和髓系白血病细胞株.在原代白血病细胞中,M0和M1亚型患者白血病细胞TRF2的表达高于其他各亚型急性髓系白血病(AML)患者.结论预后差的AML患者和T细胞恶性肿瘤细胞株高表达TRF2,提示TRF2高表达可能和白血病的预后有关.     

FLT3基因在急性髓细胞白血病中的表达及临床意义

目的 研究急性髓细胞白血病(AML)患者FLT3的表达水平,探讨Fms样的酪氨酸激酶3(FLT3)在AML中的作用机制及临床意义.方法 采用半定量RT-PCR方法检测70例AML患者和11例良性血液病为对照组FLT3表达水平.老年AML 36例,非老年AML 34例,其中初治组31例,完全缓解(CR)组15例,难治复发组24例.结果 70例AML FLT3表达水平明显高于对照组,差别有统计学意义(P<0.01);36例老年AML组与34例非老年AML组间FLT3表达水平无显著性差异(P0.05);复发难治组FLT3表达水平最高,初治组居中,CR组最低,三者表达水平具有显著性差异(P<0.05);AML初治组按FAB亚型分组,M3组表达水平最低,与其它亚型有显著性差异(P<0.05);M2、M4、M<6居中,三者间表达水平无显著性差异(P0.05);M5组表达水平最高,与其它亚型有显著性差异(P<0.05).结论 FLT3在AML中过度表达,以M5最为明显,提示FLT3在白血病的发病机制中有一定作用,与疾病进展及预后有关,在检测微小残留病方面,也可能有一定价值.     

Application of CD45/SSC gating multiparameter flow cytometry in the classification of acute leukemia — An analysis of 139 cases

Summary In order to study the significance of flow cytometry immunophenotyping in the diagnosis of acute leukemia, CD45/SSC gating multiparameter flow cytometry (FCM) was utilized to analyze the immunophenotypes of 139 cases of acute leukemia. 139 cases of acute leukemia were enrolled in our hospital from April 1998 to April 2000. Morphological analysis and FCM immunophenotypic tests were conducted on all cases. Our results showed that CD45/SSC gating multiparameter flow cytometry immunophenotyping could reflect the origin of leukemic cells specifically. It is one of the important methods for the diagnosis of ALL, AML, and HAL. CD45/SSC gating multiparameter FCM analysis is a good technique for immunophenotyping. FCM immunophenotypic analysis can help improve the diagnosis and classification of acute leukemia, and extend the use of FCM in clinical practice.     

Application of CD45/SSC Gating Multiparameter Flow Cytometry in the Classification of Acute Leukemia——An Analysis of 139 Cases

Acute leukemia is a disease of high heterogene-ity.The accurate classification of each individual pa-tient is very important to therapy and prognosis[1,2 ] .To study the significance of CD45 / side scatter( CD45 / SSC) gating multiparameter flow cytometry( FCM) in the classification of acute leukemia,weused this method for analyzing the immunopheno-types of 1 39cases of acute leukemia.1　MATERIALSAND METHODS1 .1　 PatientsAll the patients were admitted into our hospitalfrom April 1…     

急性白血病完全缓解微小残留病检测的意义

目的：探讨急性白血病（AL）患者骨髓微小残留病（MRD）的监测对疾病预后和疗效评价的临床意义．方法对2009年1月2012年12月在玉溪市人民医院血液科正规治疗的43例急性白血病患者采用骨髓液,利用流式细胞术（FCM）进行MRD检测,从首次诱导缓解治疗结束后第14天开始,每1～3月检测1次,并动态监测,分为阴性（MRD〈10-4）、阳性（MRD〉10-4）,2组进行比较分析．结果阴性、阳性2组3 a的复发率分别为0、80%,2组复发率的差异有统计学意义（＜0.05）．而在形态学完全缓解时,MRD阳性组复发率明显高于阴性组（＜0.05）．结论采用FCM检测AL患者的MRD,MRD〉10-4患者复发率高于MRD〈10-4患者,MRD阳性比传统骨髓形态学复发出现早,连续对完全缓解AL患者进行MRD监测对指导治疗及早期预测复发具有重要的临床意义．     

急性B淋巴细胞白血病CD304表达的临床意义

目的：探讨急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)CD304表达的临床意义及其应用价值。方法：采用流式细胞术(FCM)检测初诊的32例B-ALL细胞CD304和相关白血病抗原表达、5例急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)和10例良性血液病对照者细胞CD304的表达;21份初诊时融合基因和CD304共阳性的治疗后B-ALL样本,FCM和PCR检测微小残留病(MRD)水平,比较两者符合率。结果：BCR-ABL1阳性病人CD304表达阳性率高于E2A-PBX1和融合基因阴性病人(P<0.05)。5例T-ALL细胞和10例对照者B细胞上CD304均阴性表达,初诊43.75%(14/32)B-ALL病人CD304阳性表达：10例BCR-ABL阳性(12例)、1例TEL-AML1阳性和3例融合基因阴性(14例)病人CD304阳性表达,而3例E2A-PBX1阳性和2例MLL/AF4阳性病人CD304阴性表达。CD304阳性病人B-ALL细胞CD66c表达频率升高(P<0.01)。21例MRD中,PCR阳性11份,FCM阳性10份,共阳性10份,与PCR结果比较,FCM阳性符合率为91%,总符合率...     

CD19、CD56、CD2在急性髓性白血病的表达

目的 探讨CD19、CD56、CD2在急性髓性白血病（AML）的表达情况及在微小残留病检测中的意义。方法 选择AML初发患者130例，采用三组四色荧光标记单克隆抗体组合（CD34/CD13/CD45/CD19、CD34/CD56/CD33/CD45和CD34/CD2/CD33/CD45），用多参数流式细胞术对初发AML病人骨髓细胞进行检测。结果 在AML中CD19阳性表达率为2.31%（3/130例），CD56为3.75%（3/80例），而CD2为1.25%（1/80例）；在急性早幼粒细胞白血病（M3）无表达。结论CD19、CD56、CD2在急性髓性白血病的表达率很低；CD56、CD2可作为AML微小残留病（MRD）检测的指标；CD19在AML微小残留病检测中无意义。     

荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者外周血WT1基因的表达

目的　了解急性白血病患者外周血WT1基因的表达水平。方法　建立荧光定量RT -PCR方法 ,用PEABI 770 0PCR仪检测 114例急性白血病患者、2 6例非白血病患者和3 6例正常人外周血中WT1基因的表达水平。结果　 2 2例急性髓系白血病 (AML)和 15例急性淋巴细胞白血病 (ALL)初发患者WT1基因的表达量为 10 5～ 10 6拷贝 / μgRNA ,取得部分缓解的 2 6例AML和 19例ALL患者的表达水平为 10 2～ 10 4拷贝 / μgRNA ,而取得完全缓解的 17例AML和 13例ALL患者的表达水平为 0～ 10 2拷贝 / μgRNA。 结论　WT1基因在白血病外周血中有高水平的表达 ,可作为急性白血病疗效考核及监测微残留病的指标。     

CDX2基因在成人急性髓细胞白血病中的表达及临床意义

目的：研究尾型同源盒基因2（CDX2）在急性髓细胞白血病（AML）患者中的表达及临床意义。方法通过 RT‐PCR方法检测114例初发AML患者及56例诱导化疗后患者骨髓和（或）外周静脉血单个核细胞CDX2基因表达,19例随访患者每3个月定期检测CDX2基因表达。8名健康者外周静脉血和5名缺铁性贫血患者骨髓作为对照。结果114例A M L患者和13名对照的骨髓和（或）外周血单个核细胞均检测到CDX2基因表达。以第一个四分位数为界划分低表达组和高表达组,对照组CDX2基因表达水平均在低表达组,114例A M L患者高表达组90例（78．9％）,对照组与A M L患者CDX2基因表达差异有统计学意义（ P＜0．01）。初发患者骨髓和外周静脉血CDX2基因表达呈正相关（ r＝0．656,P＜0．01）。CDX2高低表达组诱导化疗完全缓解（CR）率差异无统计学意义（P＞0．05）。本组 AML 病例 CDX2高表达78．9％。CR患者 CDX2表达量为化疗前的10．3％～86．2％,且随着疗程增加逐步降低,复发时显著升高。随访6个月以上病例19例,两组早期复发率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 CDX2表达量变化反映患者体内白血病细胞负荷,持续高表达可能是预后不良指标之一,可作为染色体核型正常AML微小残留病监测指标。     

miR-155-5p对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及可能机制

目的: 探讨miR-155-5p对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）细胞凋亡的影响及可能机制。方法: 收集43例AML患者和21例缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMNC）,qRT-PCR法检测两组细胞miR 155 5p和Bcl 2 mRNA表达水平。AML细胞转染miR 155 5p类似物或抑制剂后,CCK 8法检测经不同浓度阿糖胞苷作用后AML细胞的活性,流式细胞术检测经阿糖胞苷（0.16 μg/mL）作用后AML细胞的凋亡情况。通过qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测AML细胞转染miR-155-5p抑制剂后NF-κB、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结果： AML患者较缺铁性贫血患者BMMNC的miR 155 5p（t=4.688, P=0.002）和Bcl-2 mRNA（t=4.066, P=0.014）的表达水平明显升高。CCK 8和流式细胞术检测结果显示,转染miR 155 5p类似物的AML细胞经阿糖胞苷处理后细胞活性增高,凋亡明显减少;相反,转染miR-155-5p抑制剂组细胞活性降低,凋亡明显增多（P均<0.01）。qRT-PCR和蛋白质印迹结果显示,转染miR 155 5p抑制剂后AML细胞NF κB、Bcl-2表达水平降低。结论： miR-155-5p可能通过上调NF-κB、Bcl-2的表达抑制AML细胞凋亡。     

WT1基因在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

目的研究WT1基因在急性白血病（AL）患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR方法动态检测92例初治AL患者WT1基因的表达。结果初治AML各亚型中M5基因表达阳性率最高,为91.7%,其WT1基因中位表达水平最高,达1308.6,显著高于其他亚型,差异有统计学意义（P〈0.05）;初治ALL各亚型（L1,L2,L3）之间WT1基因表达阳性率及中位表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）;AL患者中,WT1基因表达阳性组CR率显著低于阴性组,阳性组缓解后半年内复发率显著高于阴性组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;初治组、复发组及未缓解组AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平明显高于完全缓解组和对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞中表达水平可作为临床评估疾病的发生发展、判断预后及检测微小残留病（MRD）的指标。