动态观察依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1,CTGF,Smad7和α-SMA的影响

目的：动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β1)、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、Smad7和平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA)表达的影响,探讨依那普利对肾小管上皮细胞转分化的影响。方法：雄性SD大鼠64只,采用单侧输尿管梗阻模型,将实验大鼠分为假手术组（16只）、模型组（24只）和治疗组（24只）,治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 mg/（kg·d）灌胃。分别于造模后3,7,14,21 d取梗阻侧肾组织进行HE染色,观察肾脏组织病理结构变化,并进行肾间质损伤指数评分;应用real-time PCR法检测肾组织TGF-β1和CTGF mRNA的表达,应用Western 免疫印迹检测肾组织α-SMA,Smad7和CTGF蛋白的表达。结果：随着梗阻时间的延长,单侧输尿管梗阻模型鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加。TGF-β1和CTGF mRNA以及α-SMA和CTGF蛋白表达逐渐增加,Smad7蛋白表达逐渐减少。依那普利治疗后,肾间质损伤指数下降,TGF-β1和CTGF mRNA以及α-SMA和CTGF蛋白表达较模型组降低,Smad7蛋白表达较模型组增加,依那普利对各时间点 TGF-β1 mRNA的表达均有明显的下调作用,对 CTGF mRNA,α-SMA,CTGF和Smad7蛋白对以单侧输尿管梗阻术后3,7,14 d作用最明显。结论：依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化, 以单侧输尿管梗阻后14 d内效果最好,这一作用可能与抑制肾组织TGF-β1,CTGF和α-SMA的表达,增加肾组织Smad7的表达有关。     

氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效观察

目的：观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾 组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor, PDGF)表达的影响。方法：将15只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和氟非尼酮组(n=5)。对模型组和氟非尼酮 组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻模型。氟非尼酮组从造模前24 h开始以氟非尼酮[125 mg/(kg.d)]溶于 0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)中灌胃,模型组和假手术组以等体积0.5% CMC-Na灌 胃。于术后14 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变;用免疫组织化学检测 Col I,Col III,α-SMA,PDGF,CTGF的蛋白表达;用RT-PCR检测Col I,Col III,PDGF,CTGF mRNA表达。结果：模 型组肾间质损伤指数、胶原相对面积评分及Col I,Col III mRNA和蛋白表达均较假手术组增高(P<0.05),氟非尼酮治 疗后明显改善(P<0.05)。模型组肾组织α-SMA,PDGF,CTGF蛋白表达及PDGF,CTGF mRNA表达均较假手术组明显 增加(P<0.05),氟非尼酮治疗后表达均明显减少(P<0.05)。结论：氟非尼酮(125 mg/kg.d)能够显著改善单侧输尿管梗阻 大鼠肾间质纤维化,其作用机制与抑制肌成纤维细胞的活化及关键促纤维化因子PDGF和CTGF的表达有关。     

依那普利对大鼠肾间质纤维化中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察依那普利对肾间质纤维化大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨依那普利抗肾间质纤维化的作用机制.方法:将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和依那普利治疗组.对治疗组和模型组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻的动物模型.术后14 d处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色以观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学方法检测Col Ⅰ,TGF-β1,P-Smad2/3和Smad7的蛋白水平表达,用RT-PCR方法检测TGF-β1,和Smad7mRNA水平表达.结果:模型组肾间质损伤指数、胶原相对面积及间质内Col Ⅰ表达均较假手术组增高(P<0.01),依那普利治疗后好转.假手术组肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达、p-Smad2/3蛋白表达较低,模型组表达明显增强(P<0.01),依那普利治疗后明显减弱(P<0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7蛋白及mRNA表达,模型组肾组织Smad7表达明显减弱(P<0.01),依那普利治疗后Smad7表达较模型组增强(P<0.01).结论:依那普利可以通过影响单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中的TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7而起到抑制纤维化的作用.     

依那普利对大鼠肾间质损害中骨成形蛋白-7及其受体表达的影响

目的 研究血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织骨成形蛋白-7(BMP-7)及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6表达的影响.方法 采用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,治疗组于造模前24 h～造模后7 d以依那普利10 mg/(kg·d)灌胃,另设假手术组为正常对照,造模7天后,应用免疫组织化学法观察肾脏BMP-7、TGF-β1蛋白表达,半定量RT-PCR法检测肾脏BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、AIX-2、ALK-3、ALK-6mRNA表达水平.结果 与假手术对照组相比,UUO大鼠肾脏BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2和ALK-3mRNA表达明显减少,TGF-β1蛋白表达明显增高,而给予依那普利治疗后能够显著上调BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2和ALK-3的表达,下调TGF-β1的表达,减轻肾间质纤维化.结论 依那普利可显著上调BMP-7及其受体表达,减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与抑制TGF-β1的致纤维化活性有关.     

肾间质纤维化组织中组织型转谷氨酰胺酶和结缔组织生长因子共表达

目的:探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)和结缔组织生长因子(CTGF)在肾间质纤维化组织中的表达及二者的关系.方法: 采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型.将大鼠随机分为假手术组(5只)、模型组(6只)、依那普利治疗组(6只).术后9天处死各组大鼠,肾组织标本用过碘酸-席夫染色(PAS)确证肾间质纤维化病变.以免疫组织化学染色方法观察肾组织内tTG 和CTGF的表达部位,以及细胞外基质成份纤维连接蛋白(FN)的表达变化.用Western蛋白印迹方法分析肾组织内tTG 和CTGF蛋白表达水平.结果: 假手术组大鼠tTG,CTGF和FN分别在肾小管、肾间质区仅有微量表达,肾小球内无阳性表达;模型组大鼠tTG、CTGF和FN在肾小管、肾间质区的表达信号比假手术组强;依那普利治疗后三者表达减少.双重染色结果显示,在模型组肾间质tTG阳性表达部位同时表达CTGF,并且强度相似.Western blot结果显示,模型组tTG和CTGF蛋白水平明显高于假手术组;依那普利治疗组tTG和CTGF蛋白水平明显低于模型组.各组大鼠肾内tTG蛋白水平与CTGF蛋白水平之间(r=0.683,P<0.05)以及tTG蛋白水平与肾间质内FN半定量水平之间(r=0.737,P<0.05)均有显著相关关系.结论: tTG和CTGF可能共同参与肾间质纤维化,依那普利减轻肾间质纤维化的作用可能通过下调两者的表达而实现.     

依那普利对大鼠肾间质纤维化中肾小管上皮细胞凋亡的作用

目的：观察依那普利对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响,探讨依那普利抗肾间质纤维化的 作用机制。方法：将24只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=8)和依那普利治疗组(n=8)。对模型组和依 那普利治疗组大鼠行左侧输尿管结扎术,建立单侧输尿管梗阻(unilateral urethral obstruction,UUO)模型。术后14 d处 死大鼠,留取梗阻侧肾组织分别进行HE和Masson染色,观察各组大鼠肾组织病理改变,用脱氧核糖核苷酸末端转移 酶介导的缺口末端标记法[terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated (dUTP) nick end-labeling,TUNEL]染色检查肾小 管上皮细胞凋亡,免疫组织化学及蛋白质印迹法检测Fas相关死亡结构域(Fas-associated death domain,FADD)、凋亡蛋 白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的 蛋白表达。结果：HE染色、Masson染色显示模型组肾间质损伤指数、肾间质纤维化指数均较假手术组明显增高(均 P<0.05),依那普利治疗组肾间质损伤指数、肾间质纤维化指数均较模型组明显降低(均P<0.05)。TUNEL染色显示模 型组肾小管上皮细胞凋亡计数较假手术组明显增多(P<0.05),依那普利治疗组肾小管上皮细胞凋亡数较模型组明显减 少(P<0.05)。免疫组织化学及蛋白质印迹法显示模型组肾组织FADD,APAF-1和CHOP的蛋白表达均较假手术组明显 增多(均P<0.05),依那普利治疗组肾组织FADD,APAF-1和CHOP的蛋白表达均较模型组明显降低(均P<0.05)。结论： 依那普利可通过抑制UUO大鼠的肾小管上皮细胞凋亡而起到抑制肾间质纤维化的作用。     

金匮肾气汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化缺氧的影响及作用机制

目的探讨金匮肾气汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化缺氧的影响及作用机制。方法雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组、金匮肾气汤组、依那普利组,每组6只,采用左侧输尿管结扎术造模,UUO术后第1天开始灌胃,金匮肾气汤1.8 g/kg,依那普利10 mg/kg,每日1次。第21天处死大鼠,取梗阻肾组织,HE和Masson染色观察肾组织病理改变,免疫荧光检测Tomato Lectin、Hypoxyprobe-1和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肾组织的表达, Western Blot检测转化生长因子-β1 (TGF-β1)、骨形态发生蛋白(BMP-7)和HIF-1α在肾组织的表达。结果与模型组比较,金匮肾气汤治疗后,HE和Masson染色结果提示梗阻肾肾盂扩张减轻、肾实质变厚,间质胶原阳性面积减少,Western Blot检测梗阻肾组织中TGF-β1蛋白表达下调、BMP-7蛋白表达上调(P0.05);免疫荧光检测显示梗阻肾组织中血管密度增加、缺氧改善,HIF-1α表达下调(P0.05)。结论金匮肾气汤可以减轻UUO大鼠梗阻肾组织纤维化,其作用机制可能与其改善肾间质缺氧有关。     

益气活血法对肾间质纤维化影响的实验研究

目的 观察益气活血中药拮抗肾间质纤维化的作用及对转化生长因子β1mRNA表达的影响.方法 将30只大鼠随机分假手术组(对照组)、模型组和治疗组(中药组),采用单侧输尿管梗阻(UUO)模型,术后第14天观察梗阻肾组织病理改变,应用免疫组织化学方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的表达.结果 模型组TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原的表达增加,肾间质病变加重,与对照组相比有显著差异(P＜0.05);治疗组与模型组相比,TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原的表达下调,肾间质病变面积明显缩小,差异有显著性(P＜0.05).结论 益气活血中药可能通过下调TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原的表达,从而阻抑肾间质纤维化的进展.     

维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨维甲酸（at-RA）对单侧输尿管梗阻大鼠（UUO）肾间质纤维化的影响.方法将26只大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,结扎单侧输尿管造成梗阻性肾病模型.术后9天处死大鼠,取梗阻侧肾做组织学检查,HE染色,用免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）.结果维甲酸显著减轻肾小管间质损害,治疗组肾间质炎细胞浸润和肾间质CTGF、α-SMA表达显著低于对照组.结论维甲酸减轻UUO模型大鼠肾小管间质损害和炎细胞浸润,降低CTGF表达,抑制α-SMA表达,从而减轻肾间质纤维化.     

P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节

目的：动态观察P21在单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠模型中的表达，以及依那普利对其表达的调节。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（SOR组）、单侧输尿管结扎组（UUO组）和依那普利治疗组（EnT组）。用免疫组织化学的方法检测3组大鼠术后7，14和21d肾小管上皮细胞P21的表达；用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）的方法检测肾脏p21 mRNA的变化；并观察依那普利对肾脏P21表达的调节。结果：在UUO大鼠模型早期，肾小管上皮细胞P21以及肾脏p21 mRNA的表达即有明显增高，随着梗阻时间的延长，P21的表达逐渐增强；依那普利能明显抑制P21的表达。结论：P21在UUO大鼠肾小管上皮细胞高表达，依那普利可抑制其表达。P21可能参与肾小管间质纤维化的发病过程。     

p27在大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其干预后的影响

目的：研究单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠肾小管上皮细胞p27的表达与肾间质纤维化的关系，并探讨血管紧张素转化酶抑制剂依那普利干预后p27表达的变化，以进一步阐述其抗纤维化机制。方法：90只SD大鼠随机分成假手术组（sham—operated rates，SOR）、UUO模型组、依那普利治疗组（UUO＋Enalaparil treated group，T—UUO）。于术后第7，14，21天分别处死各组大鼠10只。用HE染色动态观察肾脏病理变化，免疫组织化学法测定p27的表达及动态变化．RT—PCR法测定p27 mRNA的水平。结果：SOR组肾小管上皮细胞p27蛋白及肾皮质P27 mRNA的表达均强，UUO组随着间质纤维化程度的加重，p27 mRNA的表达逐渐减弱，而依那普利在UUO术后第14，21天能增强p27的表达。结论：（1）p27参与了UUO大鼠肾间质纤维化的发病过程；（2）UUO大鼠肾间质纤维化模型中依那普利抗间质纤维化机制部分是通过增强p27的表达。     

雷帕霉素抑制大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏结缔组织生长因子的表达

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）在肾脏间质纤维化发病机制中的意义,探讨雷帕霉素对其的调节作用。方法建立大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）动物模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹动态观察梗阻侧肾脏及假手术组结缔组织生长因子mRNA和蛋白的表达,并于第7、14天观察雷帕霉素对CTGF和纤维连接蛋白（FN）表达的作用。结果模型组及雷帕霉素组梗阻侧肾脏CTGF均明显增加（均P〈0．01）,雷帕霉素组比模型组的CTGF mRNA在第7天表达减少（P〈0．05）,CTGF蛋白在第7天（P〈0．05）、14天（P〈0．01）表达下调并且纤维连接蛋白的表达在第7天也下调（P〈0．05）。结论输尿管梗阻后肾脏CTGF mRNA和蛋白表达明显增加,在UUO早期雷帕霉素对CTGF、FN有一定的抑制作用,从而改善肾间质纤维化。     

三七总皂甙对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的作用及机制研究

目的观察三七总皂甙对单侧输尿管梗阻（UU0）大鼠肾间质纤维化的影响。方法将雄性SD大鼠80只随机分为4组：UUO组（UUU,n=20）、假手术组（SOR,n=20）、三七总皂甙组（PNS,50rag／（kg·d）,n=20）和氯沙坦组（ARB,20mg／（kg·d）,n=20）。从术后24小时开始,治疗组分别予PNS及ARB治疗,连续14天。于术后3、7、14天分别随机处死各组大鼠。行Masson染色观察肾间质病理学改变;化学比色法测定肾组织匀浆中羟脯氨酸的含量;采用Western蛋白印迹从蛋白水平观察金属蛋白酶1组织抑制剂（Tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）的表达情况。荧光定量PCR（Real—time PCR）从mRNA水平观察胶原I（CollagenI,Col—I）和纤维粘连蛋白（Fibroneetin,FN）的表达。结果UUO组肾脏呈进行性肾间质纤维化及肾间质胶原沉积的改变（P〈0．05）。PNS组与UUU组比较均不同程度地减轻了胶原在肾间质的沉积,改善了肾脏病理损害,抑制了TIMP-1的表达（P〈0．05）。结论PNS对UU0所致的大鼠肾脏纤维化的形成有明显的抑制作用,其机制可能与抑制TIMP-1的表达有关。     

福辛普利对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β激活激酶表达的下调作用

目的观察福辛普利对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏转化生长因子β激活激酶(TGF-activated kinase1,TAK1)表达的影响,及其对肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的保护作用。方法采用单侧输尿管结扎术致RIF大鼠模型。72只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、UUO模型组及福辛普利治疗组,每组24只。治疗组于术后2d给予福辛普利10mg/(kg.d)灌胃,假手术组与模型组每天给予等量生理盐水灌胃。各组分别于术后7、14、21d处死8只大鼠,采用HE及Masson染色观察梗阻侧肾脏病理变化,原位杂交、RT-PCR及Western blot检测肾组织TAK1的表达。结果模型组大鼠梗阻侧肾脏肾小管间质损伤指数明显高于同期假手术组(P0.05),福辛普利干预后肾小管间质损伤指数明显降低(P0.05);TAK1mRNA和蛋白表达情况:模型组各时间段TAK1表达升高,且随着病理损害的进展呈现下降趋势,但表达量仍显著高于同期假手术组(P0.05),经福辛普利干预后表达显著下降(P0.05)。结论福辛普利可能通过下调TAK1表达,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化的病程进展。