齐墩果酸通过Wnt/β-catenin信号通路诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:探讨齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)能否通过Wnt/β-catenin信号通路诱导骨肉瘤U2OS和KHOS细胞发生凋亡.方法:体外培养骨肉瘤U2OS和KHOS细胞,给予OA处理后,MTT法检测细胞的增殖率,TOP-Flash Reporter Assays检测骨肉瘤细胞TCF/LEF的转运活性,We...     

Wnt/β-catenin 信号通路相关因子与结肠癌患者预后的关系

目的 研究Wnt/β-catenin 信号通路相关因子与结肠癌患者预后的关系,为结肠癌的分子分期提供理论基础.方法 选取620例结肠癌患者临床资料及病理蜡块,挑选Wnt/β-catenin信号通路中有争论的相关因子Wnt1、β-catenin、TCF4及增殖、转移相关靶基因MMP7、CD44v7、Survivin、c-Myc、Cyclin D1、PPARγ,应用组织芯片及免疫组化技术研究Wnt/β-catenin信号通路相关因子在结肠正常组织及癌组织中的表达,应用Cox单因素及多因素分析探讨它们在结肠癌组织中的表达与结肠癌患者预后的关系.结果 Cox单因素及多因素分析结果示结肠癌组织中MMP7、Survivin表达是影响结肠癌患者肿瘤死亡的危险因素,阳性患者预后差(P<0.05).结论 结肠癌组织中MMP7、Survivin表达是影响结肠癌患者肿瘤死亡的危险因素.     

Wnt/β-catenin通路异常在卵巢癌中的研究进展

如何早期诊断早期治疗成为当今卵巢癌研究的重要课题。β-catenin作为Wnt信号通路的细胞粘附和信号转导分子,被认为在卵巢癌发生过程中起到了关键作用,被认为在卵巢癌发生过程中是早期事件。预示着β-catenin有可能成为临床发现与治疗卵巢癌的分子靶标。     

结肠癌中S100A2的表达及其与Wnt/β-catenin通路的相关性

目的探讨钙结合蛋白S100A2与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、pGSK-3β在人结肠癌组织中的表达和意义以及相关性。方法采用免疫组化和Western blot方法检测42例结肠癌及癌旁正常组织中S100A2、β-catenin和pGSK-3β的表达情况,分析它们与结肠癌临床病理参数的关系,进一步采用Pearson等级相关分析其相关性。结果①免疫组化显示S100A2和β-catenin主要定位于癌细胞核和(或)细胞质,而pGSK-3β主要定位于癌细胞质;②Western blot结果显示S100A2、β-catenin和pGSK-3β在结肠癌组织中均高表达,明显高于癌旁正常组织(P<0.01),三者在结肠癌DukesC+D期中的表达明显高于A+B期(P<0.01),在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01);③S100A2分别与β-catenin、pGSK-3β的表达呈明显正相关(r=0.637,P<0.01;r=0.626,P<0.01)。结论 S100A2可能通过调节Wnt/β-catenin通路关键分子而参与结肠癌的发生、发展。     

NGX6对Wnt/β-catenin通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响

目的:探讨NGX6基因对结肠癌Wnt信号转导通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响,明确NGX6在Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用机制.方法:(1)构建β-catenin野生型真核表达载体pcDNA3.1( )-β-catenin(WT),(2)转染外源性pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)及pCMV-myc-NGX6于COS-7细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测转染NGX6前后TCF-4的转录活性.(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6单独转染COS-7细胞及结肠癌SW620细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测TCF-4的转录活性,并采用Western blot的方法检测两组细胞核内β-catenin及TCF-4的表达.结果:(1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1( )-β-catenin(WT);(2)pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)与pCMV-myc-NGX6共转染COS-7细胞较pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)单独转染时TCF-4荧光素酶活性明显下降(P＜0.05);(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6转染COS-7及SW620细胞后TCF-4荧光素酶活性较空白质粒转染组下降(P＜0.05);(4)NGX6转染COS-7及SW620后核内β-catenin及TCF-4的表达下降.结论:NGX6对结肠癌中Wnt/β-catenin通路的β-catenin/TCF/LEF转录活化具有负性调节作用,其作用机制可能与NGX6抑制β-catenin的核转位有关.     

鼻咽癌相关基因6在人结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用

目的:探讨鼻咽癌相关基因6(NGX6)对结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子的影响,明确NGX6与Wnt通路之间是否存在反馈调节.方法:将pCMV-myc-NGX6真核表达载体及pCMV-myc空白载体瞬时转染结肠癌细胞系SW620,Western印迹检测转染NGX6前后Wnt/β-catenin信号...     

Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用

[目的]探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用.[方法]采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达;转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量.[结果]β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达.在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少,而在未分化癌中胞浆内累积明显增多.未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较,β-catenin的表达有统计学差异,P值分别为0.0195和0.0003.通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80～123.6倍.[结论]低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用.     

糖尿病足创面中Wnt/β-catenin通路变化与细胞因子、凋亡基因的相关性研究

目的:研究糖尿病足(DF)创面中Wnt/β-catenin通路变化与细胞因子、凋亡基因的相关性。方法:选择我院收治的DF患者作为DF组,同期因外伤收治的非糖尿病患者作为对照组。收集DF组的创面组织和对照组的正常皮肤组织,测定Wnt/β-catenin通路分子、凋亡基因的mRNA表达量以及细胞因子的含量。结果:DF组创面中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的mRNA表达量以及血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量明显低于对照组,糖原合酶激酶-3(GSK-3β)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的mRNA表达量以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量明显高于对照组;Wnt1、β-catenin与VEGF、IGF-1、bFGF、Bcl-2呈正相关,与TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3呈负相关;GSK-3β与VEGF、IGF-1、bFGF、Bcl-2呈负相关,与TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3呈正相关。结论:糖尿病足创面中Wnt/β-catenin通路受到抑制且与细胞因子分泌、凋亡基因表达的改变有关。     

Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂与骨质疏松

Wnt/β-catenin信号通路是重要的细胞信号转导途径,在细胞的增殖、分化中发挥重要作用。目前的研究表明Wnt/β-catenin信号通路在骨代谢中发挥重要作用,该通路的异常与骨质疏松的发生有关。Wnt/β-catenin拮抗剂可以抑制Wnt/β-catenin信号通路,导致通路表达异常,进一步研究Wnt/β-catenin信号通路拮抗剂,设计出阻断该通路拮抗剂的物质,可为骨质疏松的治疗提供一种新的途径。     

Fas通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活调控肝癌细胞增殖

目的 探究肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas)调控肝癌细胞株增殖的潜在分子机制。方法 收集正常肝细胞LO2和肝癌细胞株Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和SK-hep1,实时荧光定量PCR法检测Fas基因表达,运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Fas基因表达与肝癌的关系,设计特异性靶向Fas的siRNA,敲低肝癌细胞中Fas基因的表达,通过噻唑蓝(MTT)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,双荧光素酶实验检测β-连环蛋白(β-catenin)介导的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子(LEF)转录活性,蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)/β-catenin信号通路下游靶基因八聚体结合转录因子3/4(Oct3/4);G1/S-特异性周期蛋白-D1(CCND1);血管内皮生长因子(VEGF);B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(Bmi)的表达。结果 TCGA肝癌样品中Fas基因表达谱结果显示,肝癌组织Fas ...     

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对卵巢癌细胞CAOV3增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖。方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择适当的淫羊藿苷浓度并探讨其对卵巢癌细胞CAOV3生长、增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测β-catenin及Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达水平,利用Western blot法检测β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,淫羊藿苷能显著抑制CAOV3的生长增殖;倒置显微镜下发现淫羊藿苷能使CAOV3细胞形态发生明显变化;RT-PCR检测结果表明淫羊藿苷可降低β-catenin的mRNA的表达以及抑制Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明淫羊藿苷可下调β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达。结论 淫羊藿苷可以抑制人卵巢癌细胞CAOV3增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路诱导人晶状体上皮细胞的凋亡和细胞周期阻滞

目的 探讨姜黄素对人晶状体上皮细胞株SRA01/04（HLEC-SRA01/04）细胞周期和凋亡的影响及其相关分子机制,为姜黄素治疗和预防后发性白内障提供理论依据。方法 体外培养HLEC-SRA01/04细胞,加入终浓度分别为0 μmol/L（对照组）以 及20、40和60 μmol/L的姜黄素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测各组细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测HLEC-SRA01/04细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western blot法检测姜黄素对HLEC-SRA01/04细胞中caspase-9、caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin B1、CDK1、β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果 MTT显示：随着姜黄素的浓度逐渐增加,HLEC-SRA01/04细胞较对照组抑制率逐渐增高（P<0.001）;随着作用时间的延长,各实验组HLEC-SRA01/04细胞增殖抑制率均逐渐增高（P<0.001）;流式细胞仪结果显示：各组中HLEC-SRA01/04细胞凋亡率和细胞G2/M期比例随姜黄素浓度增加逐渐增高,而线粒体膜电位随着姜黄素浓度增加逐渐下降（P<0.001）。Western blot 实验显示：随着姜黄素浓度的增加,HLEC- SRA01/04细胞中caspase-3、caspase-9和Bax的表达量逐渐增高,Bcl-2、Cyclin B1、CDK1和β-catenin的表达量逐渐降低,同时Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白Cyclin D1和c-myc表达量也逐渐降低。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HLEC-SRA01/04细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G2/M期,从而诱导其凋亡。     

结肠癌中TLRs、Wnt/β-catenin的表达与肿瘤的相关性研究

结肠癌是一种严重危害人类健康的恶性肿瘤,在我国青年人的发病率呈现日益增长的趋势.TOLL样受体(TLRs)与Wnt/β-catenin (β-连环蛋白)蛋白在结肠癌患者中会高表达,具有促进结肠癌发生发展的作用.本文就TLRs与Wnt/β-catenin两者信号通路在结肠癌发生发展中的相互调节关系这一新的认识进行阐述.     

SOX7基因对肝癌细胞凋亡、氧化应激 及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨过表达SOX7对肝癌细胞凋亡、活性氧（ROS）水平及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人肝癌Huh-7细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组（Vector组）和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组（pcDNA3.1-SOX7组）。转染48 h,Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒、DCFH-DA法及Western blotting分别检测细胞凋亡率、ROS含量及SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3蛋白表达。MTT法检测pcDNA3.1转染24 h、48 h和72 h的细胞活力。结果pcDNA3.1-SOX7重组质粒组SOX7蛋白表达明显高于空白组（P < 0.05）。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力及β-catenin和cyclin D1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率、ROS含量及cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高（P < 0.05）。结论过表达SOX7可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡机制与细胞内ROS水平提高及Wnt/β-catenin信号通路抑制有关。     

Supervilin通过Wnt/β-catenin通路调控斑马鱼胚胎集中延伸运动

目的探究Supervillin在斑马鱼胚胎发育过程中的作用及分子机制。方法利用Clustal Omega和DNAman软件,分析比较斑马鱼Svil和人类SVIL氨基酸序列同源性。利用RT-PCR和原位杂交技术,分析斑马鱼Svila(Svil蛋白在斑马鱼体内的亚型)在早期胚胎发育中的表达模式。注射反义吗啡环寡核苷酸链(MO),抑制斑马鱼中Svila表达,观察胚胎形态变化。通过Western Blot技术检测β-catenin蛋白表达与核定位情况,并用RT-PCR检测Wnt/β-catenin靶基因表达。结果在斑马鱼早期胚胎发育过程中,Svila属于母源性表达,随着发育时间呈表达上升趋势。利用MO降低Svila表达,斑马鱼胚胎发育发生畸变,体轴弯曲,可能与胚胎集中延伸运动受阻有关。Svila的表达影响β-catenin的核转运及Wnt/β-catenin信号通路激活。结论 Svila通过激活Wnt/β-catenin信号通路调控斑马鱼早期胚胎的集中延伸运动。     

双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.     

Wnt/β-catenin信号通路在心肌纤维化中的作用研究进展

Wnt/β-catenin信号通路是一种在胚胎发育,细胞增殖分化、迁移,干细胞更新等中起关键作用的蛋白质家族。Wnt/β-catenin信号通路的失调常常会导致各种严重的疾病,例如肿瘤、心脏疾病、肺部疾病、肝脏疾病、骨骼疾病、神经疾病等。大量研究表明,Wnt/β-catenin信号通路在心肌纤维化发病机制中起重要作用,本文结合最新研究成果,从心肌纤维化相关疾病的角度对Wnt/β-catenin通路进行综述,为预防心肌纤维化提供新的思路,进一步达到防治心血管疾病的目的。