Transwell小室共培养条件下缺氧时视网膜色素上皮细胞对内皮细胞增殖的影响

目的 研究在Transwell小室共培养系统中,缺氧时视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)对血管内皮细胞增殖的影响.方法 培养并鉴定RPE细胞和人脐静脉血管内皮细胞,利用200 μmol/LCoC12造成细胞缺氧、Transwell小室建立细胞共培养模型.实验分为4组:对照...     

人脂肪间充质干细胞体外分化为视网膜细胞观察

目的:研究成人脂肪间充质干细胞(hAD-MSC)体外诱导分化为视网膜色素上皮细胞(RPE)、光感受器细胞和血管内皮细胞的情况.方法:分离、培养和鉴定hAD-MSC,用血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子诱导hAD-MSC向血管内皮细胞分化,并检测血管内皮细胞标志物血管内皮细胞Ⅷ因子(vWF)的表达情况.制备hAD-MSC体外诱导液,用诱导剂和诱导液共同诱导hAD-MSC向视网膜细胞分化,采用免疫荧光法检测hAD-MSC经诱导后表达光感受器细胞标志物视紫红质(Rhodopsin)和RPE细胞标志细胞角蛋白(Pan-CK)的表达情况.结果:免疫荧光法证实,分离培养的hAD-MSC经体外诱导后可表达RPE、光感受器细胞和血管内皮细胞的标志Pan-CK、Rhodopsin和vWF.结论:hAD-MSC经过体外诱导可以向视网膜RPE、光感受器细胞和血管内皮细胞分化.     

甘油三酯对血管内皮细胞GRK2表达时序性的研究

[目的]探讨甘油三酯对血管内皮细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)时序性表达的影响.[方法]体外培养人血管内皮细胞(EAhy926),在培养基中加入终浓度为150mg/L的甘油三酯进行时间效应实验,于0、3、6、12、24、36h收集细胞后立即进行蛋白抽提,用Westernblot检测甘油三酯作用后血管内皮细胞GRK2的改变.[结果]0、3、6、12、24和36h组GRK2/Actin灰度比值分别为0.31±0.02、0.41±0.02、0.49±0.03、0.54±0.04、0.61±0.11、0.59±0.05.随着甘油三酯作用时间延长,GRK2含量呈时间依赖性增加,24h达到高峰.[结论]甘油三酯可能通过上调血管内皮细胞的GRK2,导致内皮细胞功能障碍,从而参与了动脉粥样硬化的发生发展进程.     

Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用。方法将食管癌细胞株Eca-109分为6组，A：对照组，B：化疗组，C：化疗＋高剂量光敏剂治疗组，D：化疗＋低剂量光敏剂治疗组，E：高剂量光敏剂治疗组，F：低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24h后，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率；于化疗组加入化疗药（5-Fu＋DDP）作用12h，再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物（HPD）低剂量或高剂量，4h后行630nm激光照射，光能量密度30J／cm^2，照光后继续培育24h，开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率。结果除了低剂量光敏剂＋化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外．其余相互间差异均有统计学意义，高剂量光敏剂＋化疗组细胞抑制率较高，低剂量光敏剂组抑制率较低。结论在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间，光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素。两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异。相同光照能量密度及孵育时间下，孵育浓度越高，其杀伤效应越强。光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高，光动力与化疗有协同作用。     

光动力疗法对乳腺癌干细胞的作用研究

目的通过体外实验探索以血卟啉单甲醚作为光敏剂的光动力疗法(PDT)对乳腺癌干细胞的作用及可能机制,寻找可能抑制乳腺癌干细胞的有效方法。方法采用流式细胞仪从MCF-7乳腺癌细胞系中分离出表型为CD44+CD24-/lowESA+乳腺癌干细胞,分别检测MCF-7乳腺癌干细胞及分选后的乳腺癌干细胞在空白处理组、单纯光照组、单纯光敏剂组和PDT组相对应的细胞生长抑制率,并用流式细胞仪检测其早期凋亡率。结果流式方法分选的MCF-7乳腺癌干细胞系干细胞比例为(1.2±0.4)%。空白对照组、单纯照射组、单纯光敏剂组及PDT组MCF-7乳腺癌干细胞生长抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中PDT组较空白对照组、单纯照射组、单纯光敏剂组均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、单纯照射组、单纯光敏剂组及PDT组未分选MCF-7乳腺癌干细胞生长抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中PDT组较空白对照组、单纯照射组、单纯光敏剂组均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、单纯照射组及PDT组MCF-7乳腺癌干细胞与未分选MCF-7乳腺癌干细胞生长抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、单纯照射组、单纯光敏剂组与PDT组乳腺癌干细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中PDT组较空白对照组、单纯照射组、单纯光敏剂组均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论以血卟啉单甲醚作为光敏剂的PDT对乳腺癌干细胞具有一定程度的抑制作用,其抑制机制可能与诱导细胞凋亡有关,但是仍不可避免地存在耐受。因此单独使用PDT的治疗效果有限,需联合其他治疗以期达到更好的预后。     

人胎视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏

目的：冻存和复苏人胎视网膜色素上皮细胞，为视网膜色素上皮移植治疗视网膜色素变性提供组织来源。 方法：取第3代胰酶消化法获取的人胎儿视网膜色素上皮细胞进行冻存，复苏后经台盼蓝染色测定细胞存活率，角蛋白抗体免疫细胞化学染色鉴定细胞。 结果：复苏后的视网膜色素上皮细胞在体外生长良好，抗角蛋白反应阳性，细胞具有较高的存活率［(84.9%±3.2)%］。 结论：冻存和培养RPE细胞为细胞移植提供了一个良好的来源。     

5-氨基酮戊酸-光动力疗法对HaCaT细胞增殖活性、细胞凋亡、原卟啉Ⅸ及活性氧的影响

目的观察5-氨基酮戊酸-光动力疗法(ALA-PDT)对Ha Ca T细胞增殖活性、细胞凋亡、原卟啉IX(Pp IX)及活性氧(ROS)的影响。方法体外培养Ha Ca T细胞,分成4组,对照组不加任何刺激因素,ALA组单用1 mmol·L-1ALA溶液加入Ha Ca T细胞培养基中避光孵育3 h,PDT组单用红光治疗仪照射Ha Ca T细胞培养液30 min,ALA-PDT组在加入1 mmol·L-1ALA溶液于Ha Ca T细胞培养基中避光孵育3 h后,用红光治疗仪照射上述培养液30 min。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,荧光显微镜观察Pp IX的含量以及ROS检测试剂盒检测细胞内ROS的水平。结果对照组、ALA组、PDT组、ALA-PDT组细胞增殖活性分别为0.892±0.009、0.879±0.024、0.722±0.013、0.534±0.029;细胞凋亡率分别为(2.702±0.019)%、(2.697±0.031)%、(6.283±0.282)%、(32.601±1.897)%;ROS活性分别为(100.000±0.000)%、(101.333±3.786)%、(112.000±3.606)%、(135.000±16.000)%;PDT组细胞增殖活性、细胞凋亡率及ROS活性与对照组和ALA组比较差异有统计学意义(P<0.05);ALA-PDT组该3个指标与对照组、ALA组和PDT组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组和ALA组细胞内Pp IX的荧光比率分别为(4.000±1.000)%、(32.000±2.646)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ALA诱导Ha Ca T细胞内Pp IX的累积,Pp IX在PDT作用下产生大量ROS,继而抑制Ha Ca T细胞增殖,导致细胞凋亡。     

危重症患者经皮气管切开术和传统外科气管切开术疗效的对比研究

目的 比较经皮气管切开术(PDT)和传统外科气管切开术(ST)治疗危重患者的疗效及安全性.方法 回顾性分析47例PDT患者(PDT组)和24例ST患者(ST组)的手术时间、术中出血量、切口大小、切口愈合时间和并发症发生率.结果PDT组患者较ST组患者的手术时间[(6.2±1.2)min与(21.0±4.8)min]短、切口[(1.7±0.3)cm与(3.9±0.8)cm]小、术中出血量[(4.6±0.9)ml与(9.0±4.0)ml]少、切口愈合时间[(3.0±0.9)d与(6.0±1.1)d]短,且差异均有统计学意义(P＜0.05);PDT组患者除切口渗痰发生率(0)较ST组[4/24(16.7%)]低,且差异有统计学意义(P＜0.05)外,其余并发症发生率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PDT较传统的ST手术时间短、出血少、切口小、愈合快,且切口渗痰的发生率低,可推广应用于危重症患者.     

细菌脂多糖诱导人肺动脉内皮细胞表达P-MLCK

目的 探讨细菌脂多糖(LPS)对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)表达磷酸化肌球蛋白轻链激酶(phosphorylated myosin light chain kinase, P MLCK)的诱导作用.方法 体外培养HPAEC,分别给予生理盐水和2 μg/mL LPS孵育1 h,经免疫荧光显微镜和Western blotting检测P MLCK.结果 与生理盐水组比较,LPS刺激HPAEC后较生理盐水组细胞数量减少,细胞形态无明显改变.HPAEC在LPS刺激30、60 min后,P MLCK表达由0.41±0.05分别增加至0.82±0.43和1.56±0.07(P<0.05,P<0.01),同时LPS 30 min组和60 min组比较有显著性差异(P<0.05);LPS刺激60 min后P MLCK免疫反应细胞由1.25±2.1增加至16.4±4.8(P<0.01).结论 P MLCK可能与LPS诱导的急性肺损伤所致的内皮细胞屏障功能障碍有关.     

丹参单体对视网膜色素上皮细胞增殖抑制的实验研究

目的 研究丹参单体(IH764-3)对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的抑制作用.方法 将传代培养的RPE细胞分别加入含丹参单体1、2、3、4、5 mg/L培养液培养24、48、72、96、120h,应用噻唑蓝比色法检测不同浓度丹参单体对RPE细胞的抑制作用.结果 丹参单体对RPE细胞的增殖有明显抑制作用,24、48h时4mg/L组与5mg/L组抑制率相比差异无统计学意义(P>0.05),其余时间点时各组之间抑制率相比差异有统计学意义(P均<0.01),5mg/L组72h与96h及96h与120h时抑制率差异无统计学意义(P>0.05),其余各组各时间点之间抑制率相比差异有统计学意义(P均<0.01),丹参单体120h时的IC50剂量为2 4mg/L.结论 丹参单体对RPE细胞的增殖有抑制作用,呈时间依赖性及剂量依赖性,可能是一种有价值的防治增殖性玻璃体视网膜病变的药物.     

组织工程细胞支架及其细胞亲和性改进研究进展

综述近年来组织工程中有关细胞在材料上粘附的机理研究并从生物学观点和材料观点来分析影响细胞亲和性的因素，介绍了目前研究中的改性生物医学材料细胞亲和性的研究方法，并对今后的研究提出了建议。     

脂肪组织来源的基质细胞向神经元样细胞分化

目的：研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性，为神经移植探索新的细胞来源。方法：采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化，以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果：从成年大鼠的脂肪组织中分离出基质细胞，在体外生长形态类似成纤维细胞，可以维持在未分化状态稳定增殖，体外扩增可超过10多代。β-巯基乙醇可诱导这种细胞向神经元样细胞分化，分化的细胞早期表达巢蛋白，后期则表达神经元的标志物——神经元特异性烯醇化酶和神经微丝，在最适合的诱导条件下约60％～85％的细胞表达这两种神经元的标志物。结论：脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的干细胞。     

视网膜神经节细胞与无长突细胞间示踪剂偶联

目的：研究兔眼视网膜神经节细胞与无长突细胞问示踪剂偶联循环的特征。方法：采用细胞显微注射方法将神经生物素注射入视网膜组织单个活体OFF—α神经节细胞中，终止注射后，用4％甲醛固定，1：600Cy3-链亲合素反应，并用共焦显微镜测定在偶联的神经节细胞和无长突细胞中通过缝隙连接扩散的示踪剂的量。结果：在被注射的神经节细胞(GD)树突区及树突区之外可见未注射的神经节细胞(G1)被染色，此外还可见数十个胞体较小、位于内核层的无长突细胞被染色，无长突细胞可分为两类亚群，一类为明亮的细胞(A1)，另一类为暗的细胞(地)。Gl染色的明亮程度与Al一致，偶尔发现偶联的神经节细胞比任何偶联的无长突细胞明亮。神经生物素在GC之间和无长突细胞之间经缝隙连接扩散具有时间—密度效应。结果：OFF—α神经节细胞和无长突细胞间存在缝隙连接，神经节细胞间也存在直接缝隙连接。     

The Effects of Anordrin on Luteal Cells, Decidual Cells and Trophoblast Cells in Vitro

ＡｎｏｒｄｒｉｎｉｓａｓｔｅｒｏｉｄｗｉｔｈａｌｏｓｓｏｆｏｎｅｃａｒｂｏｎａｔｏｍａｔＡｒｉｎｇ（２α,１７α－ｄｉ－ｅｔｈｙｎｙｌ－Ａ－ｎｏｒ－ａｎｄｒｏｓｔａｎｅ,２β,１７β－ｄｉｏｌｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）．Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｅｒｆｏｒｍｅｄｐｒｅｖｉｏｕｓ－ｌｙｈａｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｉｔｈａｓａｎｔｉｆｅｒｔｉｌｉｔｙａｎｄｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅａｒｌｙ－ｐｒｅｇｎａｎｃｙｆｕｎｃ－ｔｉｏｎｏｂｖｉｏｕｓｌｙ［１－３］．Ｃｌｉｎｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｃ…     

胚胎干细胞/诱导多能干细胞向肝细胞诱导分化的研究进展

人胚胎干细胞(ESCs)/诱导多能干细胞(i PSCs)诱导生成的肝细胞为研究肝细胞分化分子机制、肝病细胞模型的建立提供了很好的研究平台,且诱导生成的肝细胞为新药开发、体外研究药物代谢、药物的肝脏毒性及药物间的相互作用提供了很好的细胞来源,有望成为肝细胞移植和生物型人工肝的理想种子细胞来源。但目前ESCs/i PSCs向肝细胞诱导分化过程中,仍存在诱导效率不高及功能较弱等问题,成为诱导来源肝细胞用于基础和临床研究的瓶颈。     

从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激 DC成熟     

脂肪组织干细胞分化为神经元样细胞研究

目的 :探索脂肪组织提取物 (PLA)细胞分化为神经元样细胞的可能性 ,为PLA细胞分化潜能的研究及其在神经科学领域的应用提供依据。方法 :以大鼠的PLA细胞为实验对象 ,利用 β 巯基乙醇 (β BME)、丁酸酯羟基茴香醚 (BHA)等作为分化诱导因子 ,对各阶段细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果 :诱导培养 2h后 ,大多数存活的细胞转变为类似于神经元的形态 ,分化培养基诱导 5h后 ,从简单的双极细胞到复杂的多极细胞均有出现 ,并可见部分神经元样细胞拉成网状 ,大多数存活细胞表现为NSE染色阳性。结论 :PLA细胞在体外培养条件下 ,可以向神经元样细胞分化。提示PLA细胞可能作为一种新的成体多能干细胞在神经科学领域加以利用。     

急性髓细胞白血病树突状细胞诱导T细胞对自体白血病细胞毒性作用的研究

目的　研究急性髓细胞白血病 (AML)树突状细胞 (DC)诱导 T细胞对自体白血病的细胞毒性作用。方法　分离 AML 患者外周血单个核细胞 (MNC) ,在含有 GM- CSF、IL- 4、TNF- α等刺激因子的培养体系中培养7～ 14 d,通过形态学和免疫表型鉴定 DC。通过反复冻融的方法获取白血病抗原肽 ,分别以白血病抗原肽及白血病抗原肽 - HSP90复合物方式脉冲 DC,再将 DC与自体 T淋巴细胞共同孵育 ,以乳酸脱氢酶的方法检测经不同抗原方式激活的自体 T淋巴细胞对白血病细胞的杀伤效应。结果　急性白血病患者外周血 MNC中培养出 DC为 (6～11)× 10 4 / 10 6 MNC,经两种抗原方式激活的自体 T淋巴细胞对自体白血病细胞的杀伤活性分别为 (6 2 .0 7±8.2 9) %和 (35 .33± 9.0 4 ) % ;体外培养的 AML 患者外周血 MNC可诱导分化出大量 DC。结论　单纯白血病抗原肽与白血病抗原肽 - HSP90复合物方式脉冲的 DC均能够激活自体白血病特异性 T淋巴细胞 ,但后者具有更强的激活能力。     

内皮祖细胞定向分化平滑肌细胞的实验研究

目的内皮祖细胞是一种理论上非常合适的血管组织工程种子细胞,最终分化成成熟内皮细胞。实验拟证实内皮祖细胞可以定向分化成平滑肌细胞。方法以猪为实验动物,采集骨髓单核细胞,分离培养内皮祖细胞,然后应用血小板衍生生长因子(PDGF)BB诱导内皮祖细胞定向分化。通过免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞类型。结果经过诱导的内皮祖细胞定向分化成平滑肌细胞。未经诱导的细胞分化成内皮细胞。结论内皮祖细胞不仅可以分化成内皮细胞,而且可以在PDGF-BB作用下分化成平滑肌细胞,是一种理想的血管组织工程种子细胞来源。     

内皮祖细胞定向分化平滑肌细胞的实验研究

目的 内皮祖细胞是一种理论上非常合适的血管组织工程种子细胞,最终分化成成熟内皮细胞.实验拟证实内皮祖细胞可以定向分化成平滑肌细胞.方法 以猪为实验动物,采集骨髓单核细胞,分离培养内皮祖细胞,然后应用血小板衍生生长因子(PDGF)BB诱导内皮祖细胞定向分化.通过免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞类型.结果 经过诱导的内皮祖细胞定向分化成平滑肌细胞.未经诱导的细胞分化成内皮细胞.结论 内皮祖细胞不仅可以分化成内皮细胞,而且可以在PDGF-BB作用下分化成平滑肌细胞,是一种理想的血管组织工程种子细胞来源.