灯盏花素小肠吸收影响因素的研究

目的观察灯盏花素在体小肠吸收的影响因素。方法应用大鼠在体肠循环单向灌流法,以高效液相色谱（HPLC）法测定灯盏花素中灯盏乙素含量,研究灯盏花素在小肠不同肠段、不同pH、不同浓度下的吸收情况,并考察转运蛋白对药物小肠吸收的影响。结果：灯盏花素在不同质量浓度下,未发现饱和现象,吸收速率基本保持不变;在pH6.0-7.4条件下,灯盏花素的小肠吸收不受pH的影响;不同小肠部位对其吸收速率基本相同;加入P-糖蛋白（Pgp）抑制剂后药物吸收率没有明显变化;加入多药耐药相关蛋白2（MRP2）抑制剂后药物吸收率显著增加。结论：灯盏花素在整个肠段均有吸收;其吸收机制为被动扩散;P-gp对灯盏花素的小肠吸收基本没有影响,而MRP2可降低灯盏花素的吸收。     

在体单向肠灌流模型研究千金子甾醇在大鼠肠吸收特性

目的：研究千金子甾醇在大鼠肠道内的吸收情况以及P-糖蛋白（ P-gp）和多药耐药相关蛋白（ MRP2）对千金子甾醇肠吸收的影响。方法采用大鼠在体单向肠灌流模型,运用高效液相色谱法测定十二指肠、空肠、回肠、结肠灌流液中千金子甾醇的含量,计算吸收速率常数（ Ka ）和表观渗透系数（Papp）。结果千金子甾醇在大鼠结肠的Ka 及Papp最高（P＜0．05）。加入P-gp抑制剂盐酸维拉帕米后,千金子甾醇在结肠段的Ka 及Papp显著增加;而加入MRP2抑制剂吲哚美辛后,千金子甾醇在大鼠结肠段的Ka及Papp普遍降低。结论千金子甾醇在肠道中的主要吸收部位为结肠,推测千金子甾醇可能为P-gp的底物,而非MRP2的底物。     

缬沙坦大鼠在体肠吸收动力学

通过大鼠在体单向肠灌流模型(SPIP),采用反相高效液相色谱法测定大鼠肠液中缬沙坦的浓度,研究缬沙坦的肠吸收动力学与P-糖蛋白(P-gp)和有机阴离子转运多肽(OATP)对缬沙坦肠吸收的影响。结果表明,缬沙坦为全肠段吸收,吸收速率与灌流液的pH和肠段部位有关,吸收速率按十二指肠、空肠、结肠和回肠顺序下降。缬沙坦在十二指肠的非线性吸收动力学参数为Ka=0.328 h-1;Vm=72.652μmol/(L.h);Km=10.968μmol/L;Vms=69.115μmol/(L.h);Kms=0μmol/L。空肠、结肠和回肠的吸收速率常数分别为(0.595±0.091),(0.586±0.153)和(0.551±0.030)h-1。与原药组相比,含P-gp抑制剂药物组Papp显著增加,含OATP抑制剂药物组Papp显著减少(P<0.05)。缬沙坦的肠吸收机制为主动转运-被动扩散混合吸收,符合非线性动力学过程。     

野黄芩苷和野黄芩素在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性

目的:研究黄酮类化合物野黄芩苷(scutellarin)和野黄芩素(scutellarein)在Caco-2单层细胞模型中的吸收和转运特性。考察缓冲液、作用时间、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂、多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)抑制剂对野黄芩苷和野黄芩素吸收转运的影响。方法:利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)。结果:两化合物在磷酸盐缓冲液和Hanks缓冲液中的Papp有差异。在磷酸盐缓冲液中野黄芩苷AP→BL侧无转运,BL→AP侧的Papp为(0.74～1.58)×10-6cm/s;野黄芩素在AP→BL侧与BL→AP侧的Papp分别为(4.33～6.79)×10-6cm/s和(1.3...     

灯盏花素大鼠小肠吸收特性的研究

目的 :研究灯盏花素最佳吸收部位和探讨灯盏花素的吸收机理。方法 :采用大鼠在体循环方法研究灯盏花素的小肠吸收和肠壁通透性。结果 :在 5 0～ 40 0ug/ml浓度范围内吸收量与浓度呈线性关系 ,无高浓度饱和现象 ,P值基本保持不变 ;在pH 6 0至pH 7 4范围内吸收不受pH影响 ;在各肠段的百分吸收率和肠壁通透系数均无明显差异 ;促吸剂Tween 80和大豆磷脂对灯盏花素具有明显的促进吸收作用 ;吸收动力学参数为 :ka=0 0 163± 0 0 0 64min-1,ke=0 0 668± 0 0 15min-1。结论 :灯盏花素在大鼠小肠主要以被动扩散方式吸收 ,提高药物溶解度和采用促吸方法提高通透性 ,将能有效地促进灯盏花素的吸收 ,达到提高生物利用度的目的 ;灯盏花素在整个肠段均有吸收 ,可以将灯盏花素研制成缓释片剂     

辣椒素对P-糖蛋白和细胞旁途经转运透过的作用

目的：通过研究P-糖蛋白（P-gp）底物罗丹明123（R123）在空肠、回肠和结肠转运时辣椒素的作用,探究辣椒素对肠粘膜上P-gp功能的影响。方法使用体外扩散池法技术,分别取SD雄性大鼠的空肠、回肠和结肠肠段标本,计算各肠段中吸收方向（mucosa to serosa, M-S）和分泌方向（serosa to mucosa, S-M）R123的表观渗透速率（Papp）。用荧光分光光度计测定R123和荧光素钠（CF）在接收室中的浓度。结果在辣椒素作用下,R123经空肠粘膜透过时,吸收方向与空白组相比显著增高,分泌方向显著降低,但其在回肠及结肠M-S组及S-M组表观渗透系数Papp与空白组相比均没有显著性差异。CF经空肠粘膜透过时,M-S组及S-M组Papp与空白组相比均显著增高;经回肠和结肠粘膜透过与空白组相比没有显著性差异。结论辣椒素影响P-gp底物R123和细胞旁转运药物CF经肠粘膜透过的作用具有肠段差异性,对R123和CF的影响仅存在于空肠,表明辣椒素是一种较弱的P-gp抑制剂和粘膜通道改善剂。可能与P-gp和紧密连接在肠粘膜上的逐渐变化的分布有关。     

灯盏花素脂质体肺部给药对急性肺损伤大鼠血栓调节蛋白表达的影响

目的 探讨灯盏花素脂质体肺部给药对急性肺损伤大鼠血栓调节蛋白表达的影响.方法 随机将雄性SD大鼠48只分为生理盐水组、灯盏花素脂质体组、急性肺损伤组和灯盏花素脂质体干预组.检测肺组织W/D比值、MPO含量和BALF中蛋白含量,应用荧光定量PCR技术SYBR Green Ⅰ荧光染料法,检测肺组织血栓调节蛋白(thrombomodulin, TM) mRNA的表达水平.结果 与急性肺损伤组相比,灯盏花素脂质体干预组大鼠肺组织W/D比值、MPO含量和BALF中蛋白含量明显降低,而肺组织TMmRNA的表达水平明显升高.结论 灯盏花素脂质体肺部给药能够减轻LPS致大鼠急性肺损伤的程度,促进肺组织TM的产生.     

灯盏花素对大鼠缺血-再灌注心肌细胞凋亡和bcl-2表达的影响

目的 :探讨灯盏花素 (breviscapine,BRE)对大鼠缺血 -再灌注 (ischemia/reperfusion ,I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl 2表达的影响。方法 :采用TUNEL法、免疫组化和原位杂交方法 ,观察I/R心肌细胞死亡和凋亡抑制基因的bcl 2表达。结果 :(1)灯盏花素组凋亡心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R组 (P <0 0 5 ) ;(2 )灯盏花素组bcl 2蛋白 (mRNA)表达阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R组 (P <0 0 1)。结论 :(1)灯盏花素能够显著减少大鼠I/R心肌细胞凋亡 ;(2 )灯盏花素通过上调凋亡抑制基因bcl 2的表达可能是其减少大鼠I/R心肌细胞凋亡的机制之一。     

灯盏花素对糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的 检测灯盏花素对实验性糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长冈子(VEGF)表达的影响,探讨灯盏花抑制糖尿病视网膜病变的可能机制.方法 采用链尿佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,将动物随机分为糖尿病组(10只×2)和注射用灯盏花素治疗组(10只×2),另取等量正常大鼠做对照组.治疗组在出现糖尿病表现后按每日20 mg/kg腹腔注射灯盏花素溶液,糖尿病组和对照组同期注射等量生理盐水.注射后2、8周取左眼视网膜行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),右眼行免疫组化分别观察VEGF mRNA和蛋白的变化.结果 2周糖尿病组VEGF mRNA较对照组明显增加(P<0.05),蛋白表达无明显变化;灯盏花素治疗组VEGF较糖尿病组无明显变化.8周糖尿病组VEGF mRNA和蛋白表达均较2周时明显增加(P<0.05),而治疗组两者较糖尿病组明显减少(P<0.05).结论 灯盏花素明显抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF表达,提爪灯盏花素nf能通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF而缓解其糖尿病视网膜病变.     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾组织VEGF表达的影响

目的:观察灯盏花素对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠的肾组织VEGF表达的影响。方法:选择STZ诱导的糖尿病SD大鼠模型,将其分为正常对照组、糖尿病组、糖尿病灯盏花素治疗组,采用免疫组化法检测肾组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果:糖尿病模型组较正常对照组肾组织VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05),灯盏花素治疗组较模型组肾组织VEGF蛋白表达降低(P<0.05)。结论:灯盏花素通过调控VEGF表达,具有减缓糖尿病肾病的发生和发展作用。     

脱水穿心莲内酯在大鼠体内的口服生物利用度和肠道处置(英文)

目的研究脱水穿心莲内酯在大鼠体内的口服生物利用度和肠道处置,为其在临床的使用和开发提供有用的信息。方法研究脱水穿心莲内酯在大鼠体内的药代动力学行为。采用Caco-2细胞模型和大鼠在体肠灌流模型研究脱水穿心莲内酯在大鼠体内的肠道处置。结果脱水穿心莲内酯的口服绝对生物利用度是11.92%。在Caco-2细胞模型中,脱水穿心莲内酯从基底膜到顶端膜方向转运的表观渗透系数(5.37×10-5cm/s)约等于其从相反方向转运的表观渗透系数(4.56×10-5cm/s),表明外排转运蛋白没有参与脱水穿心莲内酯的细胞转运。大鼠在体肠灌流模型中,脱水穿心莲内酯在不同肠段的吸收没有显著性差异,同时没有代谢。脱水穿心莲内酯经胆汁排泄,其排泄量约占吸收量的0.1%。在P-糖蛋白和乳腺癌蛋白抑制剂的作用下,脱水穿心莲内酯在不同肠段的吸收和胆汁排泄量都没有提高(P>0.05)。结论脱水穿心莲内酯的口服生物利用度是11.92%。它在肠道中的吸收较好,不进行代谢。外排转运蛋白例如P-糖蛋白和乳腺癌蛋白不参与脱水穿心莲内酯的细胞转运。     

乳糖化-去甲斑蝥素及其纳米粒在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制

目的 研究乳糖化-去甲斑蝥素（Lac-NCTD）及其壳聚糖纳米粒（Lac-NCTD-NPs）的细胞摄取、转运机制。方法 采用Caco-2细胞单层模型研究Lac-NCTD和Lac-NCTD-NPs的摄取和跨膜转运;考察了时间、温度、pH值、药物质量浓度、吸收抑制剂和促进剂对药物跨膜吸收的影响,并比较两种剂型吸收过程的差异。结果 Lac-NCTD以主动转运为主要方式被细胞摄取和转运,少部分通过旁路转运。药物的摄取和时间呈正相关,与温度呈负相关。P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白2（MRP2）抑制剂能增加Lac-NCTD的细胞摄取（P＜0.05）。药物从基底侧（basolateral,BL）到肠腔侧（apical,AP）的渗透系数（P_app(BL→AP)）大于P_app(AP→BL)。内吞抑制剂氧化苯砷对药物的转运无影响,旁路转运促进剂去氧胆酸钠能增加药物转运。结论 Lac-NCTD主要以主动转运方式被吸收,少部分通过旁路转运被Caco-2细胞摄取和转运,此过程受P-gp和MRP2外排蛋白作用,且药物纳米粒的摄取和转运较其溶液均有增加。     

愈痫灵方对难治性癫痫大鼠多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1表达的作用

目的：探讨“愈痫灵”方对红藻氨酸（KA）致痫难治性癫痫模型大鼠海马及颞叶皮质区多药耐药相关蛋白1（MRP1）、P糖蛋白（P-gp）、层黏连蛋白（LAP）以及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法（1）造模：在脑立体定位仪引导下,海马区微量进样器注入KA1.0μL（即1.0μg）点燃发作,选取发作行为级别在Racines标准Ⅳ级以上者,以丙戊酸钠及卡马西平灌胃干预14 d后,再次以亚惊厥剂量KA0.5μL复燃,筛选再次发作级别在Ⅳ级以上或持续状态大鼠,且脑电图检测有癫痫样波放电者为造模成功的耐药难治性癫痫模型鼠。（2）分组与处理：造模成功鼠随机分为愈痫灵方干预组、拉莫三嗪对照组、模型组,另设假手术对照组、空白对照组共5组,分别给予“愈痫灵”汤剂、拉莫三嗪及同等体积的蒸馏水(2 mL/d)灌胃30 d。（3）标本处置与检测：采用免疫组织化学技术,检测多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1在海马与颞叶皮层的表达。结果与假手术对照组、空白对照组间比较,造模成功组海马区及颞叶皮质区MRP1、P-gp、LAP、MCP-1的表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,愈痫灵、拉莫三嗪干预处理后能显著降低模型鼠海马区MRP1、P-gp表达水平（P<0.05）,海马区及颞叶皮质区LAP、MCP-1的表达差异均无统计学意义(P>0.05);愈痫灵方组与拉莫三嗪组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组间颞叶皮质区LAP、MCP-1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论耐药性癫痫大鼠模型海马及颞叶皮质区多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1表达均明显升高,逆转与降低海马区MRP1、P-gp的表达可能是“愈痫灵”方抗耐药性癫痫作用机制之一。     

缺氧对多药耐药相关蛋白2 表达及调控机制的影响

药物外排转运蛋白对药代动力学参数变化起着关键性作用。近年来研究较多的外排型转运蛋白除了P-糖 蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)外,多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)逐渐成为了研究的热点。肿瘤微缺氧环境中一些信号转导通路、转录因子参与MRP2基因 的表达调控,这些因子包括过氧化物酶体增殖剂激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARα)、核因 子-κB(nuclear factor κB,NF -κB)、孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)、组成 型雄烷受体(constitutive androstane receptor,CAR)和microRNA等,但MRP2在缺氧条件下的调控机制尚不完全清楚,且 是一个很复杂的过程。MRP2作为最主要的外排转运蛋白之一,多种常用药物及抑制剂是其底物,MRP2的表达变化 会显著影响这些底物药代动力学(吸收、分布、代谢、排泄)。同时,缺氧状态下MRP2不仅是由单一的信号通路或者 某个转录基因调控,而是涉及多个信号通路以及诸多基因,从而构成一个调控网络。     

食管、贲门癌组织中P-糖蛋白与多药耐药相关蛋白的表达

目的:检测食管癌、贲门癌组织中P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达.方法:应用免疫组化方法检测50例食管癌、50例贲门癌及各自相应癌旁正常组织中P-gp和MRP的表达.结果:食管癌与相应癌旁正常组织中P-gp的阳性表达率分别为2%,2%,而MRP为76%和42%;贲门癌与相应癌旁正常组织中P-gp的阳性表达率为54%,30%,而MRP为42%与20%.食管癌组织中MRP的表达、贲门癌组织中P-gp和MRP的表达均高于相应癌旁组织(P＜0.05).MRP与食管癌的分化程度有关,P-gp与MRP与贲门癌的分化程度有关(P均＜0.05).2者与食管癌或贲门癌的浸润深度、淋巴结转移均无关(P＞0.05).食管贲门癌组织中MRP与P-gp的表达无相关性(rs=0.173,P＞0.05).结论:食管癌的多药耐药与MRP有关;而贲门癌的多药耐药则为P-gp和MRP共同参与.P-gp和MRP可反映食管贲门癌的分化程度,但不能反映其浸润和转移等生物学特征.     

人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培养法及其评价

 目的 利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(human colon adenocarcinoma cell line)单细胞层的方法。方法 使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)和荧光黄通透量等指标,评价其完整性;通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性,评价其细胞极化程度;通过RT-PCR评价其对主要药物转运蛋白表达的影响。结果 使用短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER>500 Ω·cm2,漏出标志物荧光黄表观分配系数(apparent permeability,Papp)<5×10-5 cm/s,表明单细胞层的完整性良好。同时肠腔侧(apical,AP)AKP活性显著升高,表明单细胞层出现明显的极性分化。短期培养与21天培养所得的Caco-2单细胞层中,药物转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的RNA表达水平基本一致。结论 含丁酸的无血清培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。