应用抑制消减杂交（SSH）克隆肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因

目的 克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异性表达基因。方法 将肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDDP）作为实验组。肺腺癌细胞（SPC-A-1）作为对照组,应用抑制消减杂交技术,构建实验组特异表达cDNA消减文件;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后,将获得的阳性克隆进行测序序和同源性分析（Genebank）。结果 建立了一个肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDPP）特异表达cDNA消减文库,斑点杂交初步筛选显示23个克隆中有SPC-A-1/CDPP特异表达cDNA片断,测序和同源性分析表明2个cDNA片断为新序列,其余cDNA片断与已知基因有96%～100%的同源性。结论 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列;抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。     

人白细胞介素—15cDNA真核表达载体的构建及其在肺癌细胞？…

目的 观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达,方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ构建ＰＬ－ＩＬ－１５－ＳＭ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转染到人肺鳞癌细胞（ＰＧ细胞系）和小鼠肺腺癌细胞（ＬＡ７９５细胞系）。经Ｇ４１８条件培养筛选,获得阳性细胞克隆。再经ＣＴＬＬ－２细胞增殖法阳性细胞ＩＬ－１５的表达活性。结果 获得３个ＰＧ     

阿霉素诱导的HCC—9204细胞系凋亡细胞cDNA文库构建及策略

阿霉素诱导的ＨＣＣ┐９２０４细胞系凋亡细胞ｃＤＮＡ文库构建及策略杨帆张晓东王文亮（第四军医大学病理学教研室西安７１００３３）关键词细胞凋亡ｃＤＮＡ文库中图号Ｒ７３细胞凋亡是机体生长发育，细胞分化和病理状态中细＊国家自然科学基金资助项目Ｎｏ．３９４７０...     

两个新维甲酸特异激活表达的cDNA序列的生物学功能测定

两个新维甲酸特异激活表达的ｃＤＮＡ序列的生物学功能测定雷薇黎伯铨吴我们在发现全反式维甲酸（ＲＡ）可引起食管癌细胞系生长抑制及终末分化的基础上，结合ＲＡ作用的分子机制，开辟了一条分离肿瘤抑制基因或促分化基因的新途径，建立了ＲＡ诱导前后的肿瘤细胞系的ｃ...     

人白细胞介素-15cDNA真核表达载体的构建及其在肺癌细胞中的表达

目的观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达。方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ,构建ｐＬ－ＩＬ－１５－ＳＮ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转染到人肺鳞癌细胞（ＰＧ细胞系）和小鼠肺腺癌细胞（ＬＡ７９５细胞系）。经Ｇ４１８条件培养筛选,获得阳性细胞克隆。再经ＣＴＬＬ－２细胞增殖法测阳性细胞ＩＬ－１５的表达活性。结果获得３个ＰＧ细胞和４个ＬＡ７９５细胞阳性克隆,ＩＬ－１５活性测定显示其表达水平在２４ｈ内分别在１４２～２０１或１３８～１７８Ｕ／（ｍｌ·１０６细胞）。结论ＩＬ－１５ｃＤＮＡ转导的人和小鼠肺癌细胞可表达有生物学活性的ＩＬ－１５。     

维甲酸诱导人肺腺癌细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＲＡ）诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到：①细胞体外生长速度减慢、堆叠性生长消失、胞浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡；②双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；③细胞ＤＮＡ合成能力降低；④细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；⑤细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶（ＴＧａｓｅ）基因早期即被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２分化相关基因表达进而启动细胞分化。     

维甲酸对人肺腺癌细胞系分化作用的实验研究

为阐明癌症发生的内在机制和探索肿瘤分化治疗与基因治疗的合适途径，作者应用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到（１）细胞体外生长速度减慢，堆叠性生长消失，细胞出出现空泡，细胞逐渐衰老和死亡；（２）双层软琼脂中细胞集落形成爱到明显抑制；（３）细胞ＤＮＡ合成能力降低；（４）细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；（５）细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特征

目的 建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法 以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系SPC-A-1为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP;MTT法测定药物敏感性,透射和扫描电镜观察形态变化,常规染色体检测分析染色体变化。结果 用192d建成人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP,它对顺铂的耐药指数为11.2,对顺铂、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、长春新碱和足叶乙甙等药物有不同程度的耐药性,但对羧基喜树碱无耐药性,电镜观察可见SPC0-A-1/CDDP细胞胞核不规则,较大,有丰富的微绒毛。结论 本研究建立了稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系（SPC-A-1/CDDP）,可应用于下游实验。     

维甲酸诱导人肺腺细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２，观察到：（１）细胞体外生长速度减慢、堆叠性长消失、泡浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡。（２）双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；（３）细胞ＤＮＡ合成能力降低；（４）细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征动力学改变；（５）细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶基因早期被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－     

以PAC和BAC克隆为探针筛选cDNA文库

目的 建立噬菌体Ｐ１衍生的人工染色体（ＰＡＣ）和细菌人工染色体（ＢＡＣ）筛选人正常肝ｃＤＮＡ文库的方法,并期望分离到与肝癌相关的新基因。方法 用位于１７ｐ１３．３肝癌杂合性缺失区内的ＰＡＣ５７９和ＢＡＣ１５２９克隆为探针,以噬菌斑杂交筛选人正常肝ｃＤＮＡ文库,并对分离出的ｃＤＮＡ阳性克隆进行部分测序和计算机序列比较及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,进一步确定可能与肝癌相关的新基因。结果 以ＰＡＣ５７９为