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相似文献
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1.
目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒(HCV)的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物先进行基因克隆,而后制备病毒样颗粒做为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达100IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可定性检测血浆或血清样本及血液制品中的人丙型肝炎病毒HCV的基因型及含量,对于该疾病的研究及临床治疗都具有重要的意义。  相似文献   

2.
目的建立一种快速、准确、特异和定量检测人细小病毒B19的实验检测方法。方法以B19病毒NS1基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,建立对细小病毒B19进行荧光定量检测的实验方法。同时利用荧光定量PCR技术检测本院收集的490例孕妇血清。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子浓度为2.5mmol/L时,反应的本底最低,荧光信号最强。该方法的灵敏度为1.0×101拷贝,有较好的特异性和重复性。检测的490例临床孕妇血清标本,人细小病毒B19DNA阳性为44例,感染率为8.9%(44/490)。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应,能够准确快速定量检测血清中的人细小病毒B19。  相似文献   

3.
周安 《遵义医学院学报》2011,34(5):526-528,532
目的采用TaqMan荧光探针定量PCR技术与免疫荧光技术定量定性检测牛血清中呼肠孤病毒。方法以携带有Reovirus保守系列的重组质粒作为标准品,优化定量PCR体系,建立标准曲线,用Vero细胞培养不同病毒评价方法的特异性;用FITC标记的抗Reovirus病毒蛋白单克隆抗体对感染不同滴度Reovirus的Vero细胞培养物进行直接免疫荧光检测,用Vero细胞培养不同病毒评价方法的特异性。结果 Taq Man Real-time PCR方法检测灵敏度可达1.0×102拷贝/l,线性范围为109~103;免疫荧光法对Reovirus检测具有很高的特异性。结论以TaqMan荧光探针检测Reovirus荧光定量PCR方法,灵敏度高、特异性强,辅以免疫荧光定性检测方法,可以作为牛血清感染Reovirus的定量和定性检测。  相似文献   

4.
鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的建立检测鸭疱疹病毒1型(鸭瘟病毒)的实时荧光定量PCR方法,为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法根据病毒DNA聚合酶基因的序列,设计引物和探针,采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR,用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照,构建标准曲线,对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价,同时与传统PCR方法进行比较研究。结果标准曲线表明在2.3×105~2.3×10拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒,说明有很好的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为1.22~6.69以及2.09~8.84,说明有较好的重复性;对非鸭瘟病毒DNA无扩增,说明有很好的特异性;在对病毒DNA的检测方面,比传统PCR的敏感性高出104倍。结论成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。  相似文献   

5.
手足口病肠道病毒核酸检测方法的比较研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的比较和评价肠道病毒、EV71、CoxA16核酸的检测方法。方法采用RT—PCR和荧光探针PCR(Realtime PCR)方法检测病人和正常人群粪便标本,并对检测结果进行统计学分析。结果在EV71病毒和CoxA16病毒核酸检测方面,RT—PCR和荧光探针PCR检测结果一致,其中荧光探针PCR敏感性更高,经统计学检验学分析,两法对EV71病毒和CoxA16病毒核酸的检测率无不同,两法的阳性率结果比较,无显著性差异,两种检测方法之间的吻合度较强,检测结果基本一致。但是,在肠道病毒核酸检测中,两种方法RT-PCR和荧光探针PCR检测结果有统计学意义(P〈0.05)。结论采用RT—PCR和荧光探针PCR对于EV71、CoxA16病毒临床诊断、研究、预防和控制具有重要意义,RT—PCR和荧光探针PCR诊断技术稳定、可靠,又可缩短检验时间。荧光探针PCR方法较RT—PCR方法更敏感,更能减少实验室的交叉污染。荧光探针PCR方法应进一步改进,以提高检出率。  相似文献   

6.
诺瓦克样病毒实时荧光定量PCR检测方法研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的建立贝类中GⅡ型诺瓦克样病毒的实时荧光定量PCR检测方法。方法针对GⅡ型诺瓦克样病毒保守序列,设计出简并引物与探针,建立GⅡ型诺瓦克样病毒实时荧光定量PCR检测方法。并用该方法和常规PCR法对127份贝类标本进行检测。结果研究方法对GⅡ型诺瓦克样病毒检测准确和重复性好,灵敏度为10拷贝。标准曲线的线性范围为101~105拷贝,相关系数为0.9986,并且对贝类标本的检出率显著高于常规PCR。结论本研究建立了GⅡ型诺瓦克样病毒的实时荧光定量PCR检测方法,可用于贝类中GⅡ型诺瓦克样病毒污染状况及其突发事件的快速定量检测。  相似文献   

7.
荧光探针定量PCR技术   总被引:9,自引:7,他引:2  
何蕴韶 《中国医药导刊》2001,3(4):307-308,306
PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。  相似文献   

8.
目的建立丙肝病毒核心抗原(HCVcAg)的荧光定量型生物条形码检测体系,并对检测体系进行方法学评价。方法制备标记有HCVcAg多抗及特异DNA链的金纳米颗粒探针(NP探针)和标记有HCVcAg单抗的磁性微球探针(MMP探针),形成MMP探针-HCVcAg-NP探针复合物,再利用去杂交将NP探针上标记的DNA链释放出来,通过荧光定量PCR方法鉴定这些释放的DNA链可确定丙肝病毒的存在。结果建立了HCVcAg的荧光定量型生物条形码检测体系,检测灵敏度可达100fg/ml,是相应的HCVcAg ELISA检测方法的104倍。结论本研究为发展高灵敏度丙肝病毒的荧光定量型生物条形码检测试剂盒奠定了基础。  相似文献   

9.
荧光定量PCR技术及其在肿瘤研究中的现状   总被引:1,自引:0,他引:1  
蒋奎荣  刘训良 《医学综述》2003,9(5):288-289
自Mullis1 985年发明PCR技术以来 ,PCR技术已广泛应用于生命科学研究的各个领域 ,荧光定量PCR(fluorescencequantitativepolymerasechainreaction,FQ PCR) [1] 是 1 995年由美国PE(PerkinElmer)公司研制出来的一种核酸定量技术。该技术较常规PCR具有简便、灵敏、准确等优点 ,在临床具有广阔的应用前景。本文就其原理、特点及在肿瘤研究方面的应用简要综述如下。1 荧光定量PCR技术原理及过程FQ PCR的分子生物学基础是按常规PCR方式进行体外基因扩增 ,即在PCR反应体系中加入一荧光标记的探针 ,该探针能与扩增基因的某一区域的…  相似文献   

10.
目的评价基因微阵列分型方法与实时荧光定量PCR技术检测人乳头瘤病毒及其对宫颈癌患者诊断的意义。方法基因微阵列检测人乳头瘤病毒21种亚型;实时荧光定量PCR技术定量检测人乳头瘤病毒6/11型和16/18型。结果基因微阵列检测人乳头瘤病毒较实时荧光定量PCR技术阳性检出率更高(P<0.05),而在特异性上无显著差异(P>0.05)。两种方法联合检测可以提高检测特异性和敏感度。结论基因微阵列分型方法可用于宫颈癌筛查,而实时荧光定量PCR技术对宫颈癌患者疗效判断和预后更有意义。  相似文献   

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