川芎嗪对转化生长因子β1诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响

目的观察川芎嗪对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响。方法采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原表达以模拟肾脏疾病中的细胞纤维化,实验分为5组:空白组,对照组,川芎嗪高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10μg/ml)组。MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖抑制率,ELISA法检测肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原的表达。结果川芎嗪高剂量(100μg/ml)能够抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖(P<0.01);川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞中Ⅳ型胶原的表达,以高剂量组(100μg/ml)效果最为显著(P<0.01)。结论川芎嗪可抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌。     

L158,809和西拉普利对系膜细胞基质蛋白分泌的影响

目的：观察并比较新型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)-L158，809和血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)～西拉普利对体外培养人肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：体外培养人胎肾小球系膜细胞，首先观察不同葡萄糖浓度(5．6mmol和30mmol)和药物浓度(1μmol、10μmol、100μmol和500μmol)以及不同刺激时间(24h、48h和72h)对系膜细胞增殖的影响；然后将系膜细胞分为低糖(葡萄糖5．6mmol)对照组、高糖(葡萄糖30mmol)对照组、L158,809组(葡萄糖30mmol L158，809 10μmol)和西拉普利组(葡萄糖30mmol 西拉普利10μmol)，48h后测定系膜细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量(酶免法和放免法)。结果：与低糖对照组相比，高糖对照组系膜细胞增殖过度，细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量明显升高；而西拉普利组和L158，809组系膜细胞增殖和细胞上清液中TGF-β1、基质蛋白含量均明显低于高糖对照组。结论：高糖可刺激体外培养系膜细胞过度增殖，促进其对TGF-β1和多种基质蛋白的分泌，L158，809和西拉普利均可明显抑制高糖这种促增殖和促基质蛋白分泌的作用。     

银杏内酯B对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1及细胞外基质分泌的影响

目的观察银杏内酯B对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(MC)转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达及纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)分泌增加的抑制作用。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组、银杏内酯B高、中、低剂量组,分别于6、12、24h后ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1、FN、LN、ColⅣ蛋白含量,荧光半定量RT-PCR法检测TGF-β1基因表达的变化。结果正常培养的大鼠肾小球系膜细胞可分泌一定量的FN、LN、ColⅣ及TGF-β1,LPS刺激后各成分分泌量均明显增加,银杏内酯B高、中、低剂量组在各个时间点相对于LPS刺激组各观察指标均受不同程度的抑制,并且银杏内酯B可抑制LPS刺激后TGF-β1mRNA的增高表达,而且这种抑制作用呈现剂量依赖效应。结论银杏内酯B能够抑制LPS刺激引起的系膜细胞分泌细胞外基质的增加,这种抑制作用可能通过TGF-β1调节。     

L158,809和西拉普利对体外培养系膜细胞TGF-β1表达和细胞外基质蛋白分泌的影响

目的：观察血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)L158，809和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂西拉普利对体外培养人肾小球系膜细胞转化生成因子(TGF—β1)表达和纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：分别在不同葡萄糖浓度(5.6mmol／L和30mmol／L)和药物浓度(1、10、100和500μmol／L)下体外培养人肾小球系膜细胞，分别于24、48和72h后测定细胞增殖。然后将系膜细胞分为低糖(5．6mmol／L)对照组(LG)、高糖(30mmol／L)对照组(HG)、L158，809(10μmol／L)组和西拉普利(10μmmol／L)组，48h后，分别用RT-PCR法测定TGF-β1表达，ELISA和放射免疫法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度。结果：与低糖对照组相比，高糖对照组系膜细胞过度增殖，细胞上清液中TGF-βl、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度明显升高，TGF-βlmRNA表达也显升高；而L158，809组和西拉普利组TGF-β1和细胞外基质(ECM)蛋白水平明显低于高糖对照组，且TGF-β1mRNA水平亦表达明显降低。结论：高糖可刺激体外培养系膜细胞过度增殖，TGF-β1表达增高，ECM蛋白分泌明显增加，而L158，809和西拉普利均可抑制高糖环境下上述现象。     

Influences of Chinese medicinal on TGF-β1 and CTGF secreted by mesangial cells in rats fostered by high glucose combining Ang Ⅱ

目的 探讨益气养阴消癥通络中药对高糖联合血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)培养的大鼠肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的影响,为进一步研究其防治糖尿病肾病(DN)的作用机理提供依据.方法 原代培养肾小球系膜细胞(MCs),实验共分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+ AngⅡ组、中药血清组、厄贝沙坦血清组.于第5代时,予高糖、高糖联合AngⅡ刺激,并同时进行益气养阴消癥通络中药及厄贝沙坦西药血清干预,48 h后ELISA法检测细胞上清TGF-β1、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的蛋白含量,Western blot检测CTGF蛋白表达水平.结果 与低糖对照组比较,其他组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显升高;与高糖+ AngⅡ组比较,厄贝沙坦血清、中药血清组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显下降(P＜0.01).结论 益气养阴消癥通络中药可能通过抑制CTGF表达而有效降低TGF-β1的水平,从而抑制细胞外基质的合成,发挥其保护肾脏的作用.     

消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞增殖和TGF-β1表达的影响

目的观察消渴颗粒剂对高糖刺激后系膜细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法培养正常大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入中药含药血清后,用MTT法和激光共聚焦显微镜分别观察系膜细胞增殖和TGF-β1的表达。结果消渴颗粒剂含药血清在48h可抑制高糖对大鼠系膜细胞的促增殖作用,在72、96 h可对抗高糖对系膜细胞增殖的抑制作用,96 h最为明显(P<0.05)。高糖刺激后TGF-β1在肾小球系膜细胞内表达增多,消渴颗粒剂明显减少系膜细胞内TGF-β1表达(P<0.05)。结论消渴颗粒剂可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖引起的TGF-β1过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

益气养阴消癥通络中药对高糖联合AngⅡ培养大鼠肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1和结缔组织生长因子的影响

目的探讨益气养阴消癥通络中药对高糖联合血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)培养的大鼠肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的影响,为进一步研究其防治糖尿病肾病(DN)的作用机理提供依据。方法原代培养肾小球系膜细胞(MCs),实验共分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+AngⅡ组、中药血清组、厄贝沙坦血清组。于第5代时,予高糖、高糖联合AngⅡ刺激,并同时进行益气养阴消癓通络中药及厄贝沙坦西药血清干预,48 h后ELISA法检测细胞上清TGF-β1、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的蛋白含量,Western blot检测CTGF蛋白表达水平。结果与低糖对照组比较,其他组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显升高;与高糖+AngII组比较,厄贝沙坦血清、中药血清组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显下降(P<0.01)。结论益气养阴消癥通络中药可能通过抑制CTGF表达而有效降低TGF-β1的水平,从而抑制细胞外基质的合成,发挥其保护肾脏的作用。     

肾上腺髓质素在人肾小管上皮细胞系对转化生长因子β1的拮抗作用

目的探讨肾上腺髓质素(AM)在人肾小管上皮细胞系(HK-2)对转化生长因子β1(TGF-β1)生物学效应的影响.观察系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平与肾小管间质病变的关系.方法体外细胞培养实验分为4组(1)TGF-β1组;(2)AM组;(3)AM+TGF-β1组;(4)对照组.以3H-TdR掺入法测定细胞增殖;细胞总胶原的合成和分泌以3H-脯氨酸掺入量及培养液内3H-羟脯氨酸放射性活性来判断;E1.ISA法检测培养液中的纤连蛋白(FN)含量;FN、Ⅳ型胶原和TIMP-1mRNA的表达采用RT-PCR法;25例系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平测定采用放射免疫法.并设对照组.结果(1)AM对TGF-β1的生长抑制作用无明显影响;(2)AM呈浓度依赖性抑制TGF-β1刺激的胶原合成和分泌,与TGF-β1组相比,AM(10-8mol/L)分别抑制了8%(P＞0.05)和30%(P＜0.05)的胶原合成和分泌,AM(10-7mol/L)则分别抑制了57%(P＜0.05)和64%(P＜0.01);并且AM明显抑制TGF-β1刺激的FN分泌,AM+TGF-β1组FN分泌(20ng/μl±5ng/μl)较TGF-β1组(28ng/μl±6ng/μl)降低了30%(P＜0.05);AM显著抑制TGF-β1刺激的Ⅳ型胶原、FN及TIMP-1mRNA的表达;(3)肾小管间质轻度病变组重度病变组患者血浆AM水平较对照组分别增加了1.2倍和2.2倍(P＜0.01),其中重度病变组较轻度病变组血浆AM水平高出0.5倍(P＜0.01).结论在HK-2细胞,AM具有拮抗TGF-β1促进细胞外基质沉积的作用;原发性肾小球肾炎患者血浆AM水平较正常人明显升高,且与小管间质病变程度有关.     

丹参注射液对血管紧张素Ⅱ致肾小球硬化的干预作用

目的观察丹参注射液对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致肾小球硬化的干预作用。方法采用AngⅡ刺激系膜细胞增殖,同时加入不同浓度的丹参注射液分别对系膜细胞作用24h。观察系膜细胞PAI-1 mRNA、培养上清液中的PA l-1蛋白和TGF-β1的含量的变化。结果丹参干预组对由AngⅡ刺激大鼠肾脏系膜细胞而产生的PAI-1mRNA以及蛋白表达的升高具有抑制作用(均P0.01),且与丹参注射液的浓度密切相关。丹参大、中剂量干预组还明显下调了因AngⅡ刺激后TGF-β1的表达增加(均P0.01)。结论丹参注射液具有抗肾小球硬化的作用。