抗CD3/CD45双特异抗体激活的效应细胞对白血病细胞的杀伤效应

目的探讨双特异性抗体用于白血病自体干细胞移植体外净化的可能性。方法以抗ＣＤ３／ＣＤ４５双特异性抗体激活外周血单个核细胞,以ＨＬ６０为靶,用ＬＤＨ方法测定杀伤效应。结果靶效比例不同时,抗ＣＤ３／ＣＤ４５激活的效应细胞对ＨＬ６０细胞都表现出杀伤效应。结论抗ＣＤ３／ＣＤ４５可能用于骨髓／造血干细胞移植的体外净化。     

抗前列腺特异抗原/抗CD3双特异性单链抗体四聚体的活性研究

目的:研究抗前列腺特异抗原(PSA)/抗CD3双特异性单链抗体四聚体的生物活性.方法:利用流式细胞仪和51Cr释放试验评价双特异性单链抗体四聚体的抗原亲和活性和体外介导杀伤靶细胞的效果. 利用裸鼠前列腺癌模型分析其在体内介导细胞毒T淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤的能力.结果:抗PSA/抗CD3双特异性单链抗体四聚体可以特异性结合表达前列腺癌细胞和CD3阳性的淋巴瘤细胞,阳性结合率分别为70.4%和81%. 在体外,有细胞毒T淋巴细胞存在时该四聚体可引起前列腺癌细胞的裂解,在抗体浓度固定组和效应细胞/靶细胞比例固定组,靶细胞裂解率分别随着效应细胞/靶细胞比例和抗体浓度的增加而增加,最高裂解率分别可以达到(80.3±5.2)%和(78.6±5.5)%. 与对照组比较,接种前列腺癌细胞的裸鼠在体内注射激活的细胞毒T淋巴细胞的同时接受该四聚体的治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.0001).结论:抗PSA/抗CD3双特异性单链抗体四聚体具有良好的生物学活性,具有体外杀伤肿瘤细胞和体内抑制肿瘤生长的作用.     

抗EGFR/CD3双特异性抗体的制备与功能的初步研究

目的 构建抗表皮生长因子受体(anti-EGFR)和抗CD3(anti-CD3)的双特异性抗体(anti-EGFR/CD3),并在体外初步评价其杀伤肿瘤的功能. 方法 通过基因工程技术,利用 knobs-into-holes模式分别构建表达anti-EGFR-HC-knob、anti-EGFR-LC和anti-CD3-scFV-HC-hole的载体,共同转染 Expi 293F细胞,表达双特异性抗体,依次用抗体特异的亲和层析和分子排阻层析进行纯化,再用流式细胞仪和实时无标记细胞功能分析仪评价其体外结合能力和体外肿瘤杀伤功能. 结果 成功获得较高纯度的抗体.流式细胞仪体外结合实验结果显示,双特异性抗体能够同时与EGFR+的U87 Ⅷ脑胶质瘤细胞系、HCT-116结肠癌细胞系和CD3+的Jurkat T 淋巴瘤细胞系结合,具有2种抗体的功能,同时还能很好地激活T细胞(P<0.0001);在体外杀伤效果方面,双特异性抗体作用后杀伤效果明显高于其他抗体和对照组(均为 P<0.0001),具有很好的杀伤效果. 结论 用knobs-into-holes技术获得的anti-EGFR/CD3具有较好的生物活性,为双特异性抗体的肿瘤免疫治疗奠定了一定的基础.     

双功能抗体抗CD3/抗CyclinD1的制备及对子宫内膜癌细胞的杀伤作用

目的 :制备抗CD3/抗CyclinD1双功能抗体 ,探讨子宫内膜癌主动免疫治疗的可行性 .方法 :以化学交联方法将抗CD3单克隆抗体与抗CyclinD1单克隆抗体交联为双功能抗体 ,进行介导对子宫内膜癌细胞的杀伤作用 .结果 :该双功能抗体介导效应细胞对靶细胞的杀伤率为 6 1.2 3% ,高于单抗CD3(4 2 .15 % )的介导作用 (P <0 .0 1) ,并随着效靶比的提高杀伤率也升高 (78.96 % ) .结论 :采用化学交联法制备的抗CD3/抗CyclinD1双功能抗体具有主动免疫治疗宫颈癌的临床可行性 .     

CD4+CD25+T细胞对NK细胞活性的影响

目的 初步探讨CD4 CD25 T细胞对NK细胞杀伤活性的影响,以及TGF-β1分子在其中的作用.方法 磁珠分选纯化BALB/c小鼠脾脏CD4 CD25 T细胞与NK细胞,体外用ConA激活CD4 CD25 T细胞,将激活的CD4 CD25 T细胞与NK细胞共培养,并加入抗TGF-β1抗体,在共培养的24h和48h,用51Cr标记的YAC-1检测NK细胞的杀伤毒性.结果 初始CD4 CD25 T细胞在与NK细胞共培养的24h和48h能够显著抑制NK细胞活性,其抑制率分别为50.8%和49.1%,加入抗TGF-β1抗体后,抑制率变为:-0.1%、0.25%;ConA激活的CD4 CD25 T细胞在与NK细胞共培养的24h和48h也能显著抑制NK细胞活性,其抑制率分别为19%和20.9%,加入抗TGF-β1抗体后,抑制率变为25.2%、16.3%.结论 TGF-β1参与了CD4 CD25 T细胞对NK细胞毒性的抑制,并且,其在CD4 CD25 T细胞激活、不激活状态下的影响结果不同.     

双特异性抗体介导的CD3AK体外杀伤实验研究

目的:研究在双特异性抗体的介导下CD3AK细胞(CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞)对人小细胞肺癌细胞株LTEP-sml细胞毒作用。方法:用51Cr-Na2CrO4释放试验检测单抗(2D6、UCHT1)和双特异性抗体(WST-HT)与CD3AK共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性。结果:双特异性抗体外能明显增强CD3AK细胞对人小细胞肺癌的杀伤活性。结论:与单纯CD3AK相比加入双特异性抗体后的CD3AK细胞的细胞毒活性显著增强。     

抗CD20单链抗体-CD8-TCRζ融合基因转染的T细胞治疗人B细胞淋巴瘤的实验研究

目的:观察抗CD20单链抗体(single chain variable fragment,scFv)-CD8-TCRζ融合基因转染的T淋巴细胞在体内 外的抗人B细胞淋巴瘤作用,探讨利用CD20介导自体T淋巴细胞杀伤人B细胞淋巴瘤的可行性.方法:构建包含抗CD20scFv、CD8分子和CD3信号转导链ζ的融合基因,将其克隆入载体pcDNA3中,酶切鉴定正确后电转染入人外周血T淋巴细胞,诱导其表达抗CD20 scFv-CD8-TCRζ融合蛋白.流式细胞仪检测基因修饰后人T淋巴细胞结合CD20蛋白的功能;细胞杀伤试剂盒检测基因修饰后T淋巴细胞体外杀伤人B细胞淋巴瘤Raji细胞的能力;并在BALB/c裸鼠体内观察其对人B细胞淋巴瘤移植瘤的抑制效应.结果:成功构建、转染了抗CD20 scFv-CD8-TCRζ融合基因,并在人T淋巴细胞表面成功表达;流式细胞仪和细胞杀伤试剂盒检测结果表明经基因修饰后的人T淋巴细胞能特异性结合CD20抗原,并能特异性地杀伤人B细胞淋巴瘤Raji细胞,在裸鼠体内显著地抑制人B细胞淋巴瘤移植瘤的生长.结论:抗CD20 scFv-CD8-TCRζ融合基因转染的T淋巴细胞在体内外均能杀伤人B细胞淋巴瘤细胞,为进一步应用人T淋巴细胞杀伤作用治疗人B细胞淋巴瘤奠定了基础.     

抗CD3、CD7单抗-PAPs免疫毒素的构建及其联合杀伤效应

[目的]应用抗人T淋巴细胞单抗(抗CD3和抗CD7),分别与商陆抗病毒蛋白(PAPs)偶联构成两种免疫毒素,并探讨这两种免疫毒素在体外联合对T淋巴细胞和T淋巴母细胞(CEM细胞)的杀伤效应。[方法]选用抗CD3和抗CD7杂交瘤细胞制备单克隆抗体腹水,经纯化后以SPDP为交联剂,将两种单抗分别与商陆抗病毒蛋白偶联构建成抗CD3和抗CD7单抗免疫毒素;分别以及联合后对T淋巴细胞和CEM细胞进行体外细胞毒试验。[结果]构建的两种单抗-PAPs免疫毒素活性良好,其特异性杀伤T淋巴细胞和T淋巴母细胞CEM细胞的效应比单一抗CD3-PAPs和抗CD7- PAPs更强,对照组仅有轻微的杀伤效应。[结论]成功地构建了抗 CD3和抗 CD7单抗-PAPs免疫毒素,及其不同抗原决定簇的单抗免疫结合物,并证明联合应用抗CD3-PAPs和抗CD7-PAPs免疫毒素有相加的杀伤效果。     

抗CD71人-鼠嵌合抗体的体外抗肿瘤效应研究

目的 对抗CD71人-鼠嵌合抗体体外抗肿瘤效应进行研究。方法 以表达CD71分子的3种人类肿瘤细胞（K562，CEM和SMMC-7721）为靶细胞，以正常人外周血单个核细胞（PBMC）为效应细胞，在效/靶细胞比为50：1的条件下，测定嵌合抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应（ADCC）；以CEM和SMMC-7721为靶细胞，在有新鲜补体存在下，测定嵌合抗体的补体依赖性细胞毒效应（CDC）。结果 抗CD71人-鼠嵌合抗体（D2C）能够通过识别CD71分子，并通过人抗体Fe段介导ADCC。在有新鲜补体存在下，介导CDC。结论 抗CD71人-鼠嵌合抗体对CD71^ 肿瘤细胞可介导ADCC和CDC。     

人源化抗CD3单链抗体在大肠杆菌中的GST融合表达

目的 为构建新一代的小分子、高效的基因重组抗CD3/抗胶质瘤双特异性抗体提供一个合适的构件。方法 从质粒pZZ3中克隆出人源化抗CD3抗体的VH、HL基因后,构建人源化抗CD3单链抗体基因,将其克隆入表达载体pGEX-5X1中后转化大肠杆菌,以IPTG诱导表达。结果 SDS-PAGE分析表明,表达产物分子量为55kd,与其理论推算值相符。表达形式均以包涵体为主,表达量占菌体总蛋白的30%左右。Western blot证实,诱导后菌体总蛋白在55kd处出现特异性显色印迹。结论 人源化抗CD3单链抗体可以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达,为构建人源化双特异性抗体奠定了基础。