汉族人肾透明细胞癌细胞系的建立

目的:取汉族人临床标本,建立肾透明细胞癌(ccRCC)细胞系,初步研究该细胞系的生物学特性.方法:2005～2007年间共采集43例ccRCC新鲜手术标本(包括肾原位肿瘤、骨转移、淋巴结转移肿瘤及癌栓),于手术后30～60 min内用植块法进行体外培养,记录传代超过50代的细胞株的生长曲线,测定集落形成率,对细胞进行染色体分析,病理学检查,流式细胞术检测及NOD-SCID鼠荷瘤实验.结果:绝大部分原代细胞传代次数在5代内,其中5例可连续传代5代以上,4例传代超过10代.仅1例来源于骨转移组织的原代细胞(命名为RCC05-TXJ)及1例来源于原位ccRCC的原代细胞(命名为RCC05-ZYJ)可稳定连续传代.RCC05-TXJ经历21个月传110代,群体倍增时间19.2 h,染色体众数为75,集落形成率为41%;RCC05-ZYJ经历18个月传160代,群体倍增时间为16.5 h,染色体众数为55,集落形成率为37%.免疫组化显示CA9及CD133阳性,流式细胞术分析发现随细胞传代增多CA9及CD133表达明显增高(P＜0.05).两株细胞在NOD-SCID鼠体内均有良好的致瘤及转移性,但是转移倾向明显不同.结论:应用汉族人肾透明细胞癌组织成功建立了2个转移潜能不同的细胞系,随着传代次数增加,肿瘤干细胞比例增加.     

肾透明细胞癌中谷胱甘肽S-转移酶M3基因的表达及其启动子区CpG岛的甲基化水平

目的:检测肾透明细胞癌(ceRCC)中谷胱甘肽S-转移酶M3(GSTM3)基因表达水平,观察其启动子区CpG岛的甲基化水平,探讨GSTM3基因甲基化与ccRCC发生和转移的关系.方法:半定量RT-PCR检测ccRCC高转移潜能细胞系(RCC05-TXJ)、低转移潜能细胞系(RCC05-ZYJ)、24例原位ccRCC及其癌旁肾组织和14例ccRCC转移组织的GSTM3基因的表达水平.用去甲基化剂5-Aza-CdR干预RCC05-ZYJ,RT-PCR检测处理前后GSTM3基因的表达变化.用巢式BSP(nes-ted bisulfite sequencing PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织的GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点.采用巢式MSP(nested methylation specific PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织、8例ccRCC转移组织甲基化情况.结果:RCC05-TXJ中GSTM3基因表达强度低干RCC05-ZYJ.5-Aza-CdR处理RCC05-ZYJ后,GSTM3基因表达强度高于处理前.24例原位ccRCC中17例GSTM3基因的表达强度低于其在癌旁肾组织中的表达强度,其余7例原位ccRCC中GSTM3基因的表达强度不低干其在癌旁肾组织中的表达.10例原位ccRCC及其癌旁和8例转移组织中,癌组织GSTM3基因启动子甲基化阳性为4例,癌旁组织2例(P=0.628),转移组织1例(P=0.314),差异无统计学意义.结论:GSTM3基因表达与ccRCC的发生、转移密切相关,其启动子区CpG岛甲基化会降低该基因的表达;初步筛选出ecRCC中GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点,为后续研究奠定了基础.     

汉族人肾透明细胞癌肺转移小鼠模型的建立及肺转移细胞亚株的筛选

目的:建立可稳定传代的肾透明细胞癌小鼠肺转移模型，并在此基础上初步筛选出肾透明细胞癌特异性鼠肺转移细胞亚株，为后续研究奠定基础。方法:选用本实验室前期建立的肾透明细胞癌细胞株RCC05-TXJ，体外扩增培养制成细胞悬液后注射于NOD-SCID小鼠颈背部皮下，成瘤后取出瘤组织接种于另外NOD-SCID小鼠的肾包膜下，待有肉眼可见瘤块后，处死小鼠并取出肿瘤组织接种于新NOD-SCID小鼠的肾包膜下，反复数轮，直至出现稳定的鼠肺转移模型。此时取模型鼠肺转移组织，一部分继续接种于新鼠肾包膜下，反复数轮，尝试以转移组织诱导肺转移；另一部分进行原代培养，细胞经体外扩增纯化后制成悬液接种于新鼠肾包膜，数轮循环至产生肺转移，筛选能产生稳定鼠肺转移的细胞亚株。整个筛选过程均观察记录原位成瘤、淋巴及肺转移形成情况，并对肿瘤组织进行病理组织学观察及CA9（肾癌标志）、CD133（干细胞标志）表达检测。结果:以RCC05-TXJ细胞株接种所致NOD-SCID小鼠颈背部皮下肿瘤组织作为移植瘤材接种鼠肾包膜在第2轮即出现鼠肺转移，此后3~6轮以鼠肺转移组织移植肾包膜下，均能成功诱导转移。以鼠肺转移组织原代培养RCC细胞均获成功，第6轮原代培养细胞扩增纯化后制成的细胞悬液（RCC05-TXJ-L）接种于鼠肾包膜下，出现特异性肺转移，重复2轮实验结果稳定。RCC05-TXJ-L细胞具有生长速度快（传代时间约为2 d）、原位成瘤时间短（1周左右）、接种后转移性较强、CA9及CD133表达升高等特点。结论:RCC05-TXJ在NOD-SCID小鼠体内多轮反复筛选可建立稳定的肾细胞癌鼠肺转移动物模型；在此基础上筛选出的肺转移性细胞亚株RCC05-TXJ-L可稳定诱导NOD-SCID鼠产生肺部转移。     

人肾细胞癌原位移植裸鼠模型的建立及转移相关基因表达分析

目的:建立原位移植裸鼠模型,筛选同一标本来源的转移性和非转移性肾细胞癌(RCC).方法:采用皮下移植法、细胞悬液原位注射法、肾周筋膜内法、组织块原位移植肾包膜下法对BALB/c裸小鼠接种(或注射)RCC组织块(或细胞悬液),观察各种方法的成瘤及转移情况,并采用免疫组化方法初步对比分析了VEGF、bFGF、P16、Bcl-2、C-met在裸小鼠体内的转移性和非转移RCC的表达情况.结果:(1)组织块原位移植肾包膜下法成瘤率及转移率最高,分别为73.3%(11/15)、20%(3/15).(2)与原发灶相比,转移灶中VEGF表达明显升高(P<0.05),C-met表达明显降低(P<0.05),bFGF、Bcl-2、P16表达降低但无统计学差异(P>0.05).结论:组织块原位移植肾包膜下法是切实有效的RCC转移模型制作方法.采用该法在裸鼠中获得了人转移性和非转移RCC,免疫组化分析证实了转移性RCC中新血管生成因子VEGF表达显著增加.     

免疫磁珠法分离纯化人肾癌CD133~+细胞实验研究

目的:本研究通过分析CD133+细胞在肾细胞癌患者肿瘤组织的表达情况,寻找肾癌中CD133+细胞分离纯化方法,探寻CD133+细胞与肾癌发生中的作用。方法:①应用胎盼蓝拒染试验检测细胞活性。②应用免疫磁珠法分离纯化肿瘤组织中CD133+细胞。③应用流式细胞仪检测肾透明细胞癌标本中CD133+细胞表达情况。结果:30例肾透明细胞癌中CD133+比为(13.08±1.39)%,与病理分级、临床分期无关。免疫磁珠法分离纯化CD133+纯度为(75±2.4)%,细胞活性不受影响。结论:免疫磁珠技术纯化肾癌CD133+细胞成熟有效,CD133+细胞可能是肾癌干细胞。     

肾癌干细胞的培养鉴定及其凋亡的实验研究

目的探讨肾癌干细胞在肾癌的发生发展中的作用。方法收集肾癌细胞检测其CD133表达情况,并研究其凋亡特性;然后将其悬浮于含有表皮生长因子(EGF)和成纤维生长因子(bFGF)的无血清培养基中培养7d,收集干细胞球,同时收集利用含10%胎牛血清培养基培养的肾癌细胞作阴性对照,分别检测其CD133表达情况,并研究其凋亡特性。结果悬浮培养2d后出现肾癌干细胞球,培养7d后干细胞球明显增多,收集干细胞球,用流式细胞仪检测发现表达CD133+细胞约占(8.25±1.43)%,阴性对照中CD133+细胞只占(1.22±0.34)%,并且较前者具有较高的凋亡率。结论利用无血清体外培养并收集悬浮生长的肾癌细胞的方法可以从肾癌细胞中获取肾癌干细胞;肾癌干细胞较一般瘤组织有较低的凋亡率,维持着肿瘤的无限增殖。     

嫌色细胞肾细胞癌和肾嗜酸细胞腺瘤CD117的表达及意义

目的 研究CD117在肾上皮性肿瘤中的表达.方法 采用免疫组织化学方法 ,观察33例嫌色细胞肾细胞癌(RCC)、10例肾嗜酸细胞腺瘤、151例透明细胞RCC、33例乳头状RCC和3例黏液管状梭形细胞癌组织中CD117的表达.结果 33例嫌色细胞RCC中,29例(87.9%)CD117阳性;10例肾嗜酸细胞腺瘤中,9例CD117阳性;透明细胞RCC、乳头状RCC和黏液管状梭形细胞癌中均未见CD117表达.结论 CD117高表达是嫌色细胞RCC和肾嗜酸细胞腺瘤的特征之一,CD117免疫组织化学染色结果 有助于肾上皮性肿瘤的鉴别诊断.     

不同生长环境中膀胱癌干细胞相关标志物CD44、CD133表达情况的初步研究

目的探讨在不同环境中观察膀胱癌细胞表达癌干细胞相关标志物CD44、CD133的变化情况,为进一步研究人体膀胱癌干细胞提供背景资料和前期数据。方法采用免疫组织化学与流式细胞术等技术,以膀胱癌5637细胞系为研究对象,通过建立体外培养、皮下移植瘤以及裸鼠淋巴结转移模型等模拟不同的生长微环境,观察CD44、CD133等癌干细胞相关标志物的表达情况。结果在体外培养环境中,膀胱癌5637的细胞膜蛋白CD44阳性表达,CD133则阴性表达;膀胱癌裸鼠移植瘤中CD44阳性表达,而CD133弱阳性表达。与体外培养体系比较,流式细胞术检测发现膀胱癌细胞5637中的CD44阳性表达水平无显著变化,而CD133阳性表达水平显著高于体外培养体系（P〈0.01）;在裸鼠淋巴结转移模型中,转移淋巴结均有CD44、CD133阳性表达。结论体内外环境的改变可以调控膀胱癌细胞中部分癌干细胞相关标志物的变化,也提示膀胱癌5637细胞系存在癌干细胞。     

肾癌OS-RC-2细胞CD133的表达及意义

目的: 培养肾癌干细胞球,研究其表面分子特性.方法: 肾癌细胞悬浮于含有表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的无血清培养基中培养,培养7天后收集细胞球,流式细胞仪检测CD133及CD34的表达.结果: 悬浮培养2天后出现肾癌干细胞球,培养7天后干细胞球明显增多,流式细胞仪检测发现表达CD133+CD34-细胞约占(8.33±1.26)%,对照肾癌细胞组表达CD133+CD34-细胞只占(1.24±0.36)%;干细胞球通过含10%胎牛血清培养基继续培养,又恢复原来的生长特点.结论: 利用无血清悬浮培养方法得到的肾癌干细胞球高表达干细胞表面分子标记CD133.     

大肠癌细胞中Oct4与CD133的表达及意义

目的探讨大肠癌细胞中转录因子Oct4及干细胞标志物CD133抗原的表达情况及相关意义。方法采取术后大肠癌石蜡包埋的组织标本30例,应用免疫组化的方法分别检测癌组织及癌灶外邻近正常组织中Oct4及CD133抗原的表达情况。结果其中83.3%(25/30)的癌细胞标本中检测到Oct4+细胞,73.3%(22/30)检测到CD133+细胞。而且标本中CD133+细胞的比例与Oct4+细胞的比例呈正相关(r=0.586,P<0.05)。癌灶外邻近正常组织中检测到CD133+细胞与Oct4+细胞均显著少于癌组织(P<0.01)。结论大肠癌细胞中均有Oct4与CD133的表达,两者呈现正相关性,提示两者间可能存在相互调节的机制,其关系及相关意义有待进一步研究。     

干细胞与肿瘤干细胞

目的了解干细胞、肿瘤干细胞和恶性肿瘤关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述肿瘤干细胞与干细胞的关系、肿瘤干细胞与恶性肿瘤发生发展的关系、研究现状、前景及存在的问题。结果正常干细胞和肿瘤干细胞之间存在很强的相似性,其中淋巴造血系统恶性肿瘤和少数实体瘤干细胞分离鉴定的成功有力支持了肿瘤干细胞理论。结论肿瘤干细胞理论可解释很多恶性肿瘤的生物学行为,但目前仍迫切需要相关分离、纯化、鉴定实体瘤干细胞的思路和方法。     

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

miR-622抑制肺癌细胞的生长

目的探讨miR-622对H460肺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法利用脂质体瞬时转染方法将miR-622模拟物及其对照核苷酸转染至肺癌细胞内。miRNA定量试剂盒检测miR-622的表达。CCK-8试剂盒检测细胞增殖。生物信息学分析miR-622的靶点。蛋白印迹方法检测K-Ras蛋白的表达。构建含K-Ras mRNA的3'非翻译区的报告基因载体,检测萤火虫/Renilla荧光素酶活性。结果转染miR-622模拟物可提高miR-622的表达,并使H460和16HBE-T的细胞增殖率分别降至(58.60±4.27)%和(65.17±4.67)%,P均<0.01。生物信息学分析K-Ras为miR-622的一潜在靶点。转染miR-622模拟物可明显抑制K-Ras蛋白的表达。共转染miR-622模拟物和K-Ras-3'UTR报告基因,可使萤火虫/Renilla荧光素酶的活性降低至(60.22±2.50)%。结论 miR-622可通过负性调控靶点K-Ras抑制肺癌细胞的增殖。     

多发肾透明细胞癌11例磁共振影像分析

目的 描述多发肾透明细胞癌的MR影像表现.方法 回顾性分析2008年1月至2010年12月解放军总医院共11例经病理证实的多发肾透明细胞癌的MR影像资料及临床资料,重点分析病灶的分布、大小、外形、信号,增强特点.结果 11例多发肾细胞癌患者,其中6例女性,5例男性,年龄36 ～ 69岁,平均50.6岁,共发现24个病灶.9例患者为双肾多发病变,单侧肾多发病变为2例.T2加权图像高信号的有16个病灶(16/24),所有病变均可见假包膜,出血的有4例(4/24),含有脂质的为12例(12/24),囊变的有18例(18/24),动态增强扫描各期持续强化的有22例(22/24),快进快出的有2例(2/24).所有病变呈现中度至明显强化.5例患者的多发病变MR表现一致,6例患者的多发病变MR表现并不一致.结论 多发肾细胞癌通常为两肾多发.同一患者的多发病变即使病理类型一致,MR表现可能不同.     

透明细胞乳头状肾细胞癌的研究进展

2016年WHO正式将透明细胞乳头状肾细胞癌作为一种肾细胞癌新类型。该肿瘤可以为散发性也可以发生于终末期肾病或Von Hippel?Lindau综合征（VHL综合征）,具有相对特征性的病理组织学形态、免疫表型和分子遗传学特点,诊断时应与透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌以及Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌相鉴别。鉴于透明细胞乳头状肾细胞癌生物学行为相对惰性或低度恶性,因此准确诊断对指导临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。     

Huge clear cell squamous cell carcinoma of the head

To the editor:An 85-year-old woman,presented with a macula in the front region of parietal bone one year ago,which was slightly protruding from the epidermis without pain and pruritus.After scratching,ulceration and the scope was increasing gradually.A month ago,the tumor was about walnut size,and now about egg size,accompanied with bleeding when knocked,without special feeling.Apart from this,the patient has been suffering from hypertension,diabetes for many years.The size of the tumor was 6 cm × 7 cm × 8 cm,dark red,hard shell,endoplasmic soft.The surface was contaminated,oozy,scabing,poor activity,the boundary was not clear,and pressing with no feeling.The pathological examination showed squamous cell carcinoma (SCC),as shown in Figure 1.Immunohistostaining revealed positive staining for PAS and ABPAS in the tumor tissue.We also performed immunohistostaining analysis,such as keratins AE1/AE3,EMA,cytokeratin 7,cytokeratin 18,cytokeratin 20,vimentin,S-100,HMB45,CD68,CKH and CD34.Of which,keratins AE 1/AE3,cytokeratin 18,CKH,CD34 and EMA were positive,others were negative.The tumor was diagnosed as huge clear cell SCC.After expansion excision,skin grafting,abdominal skin surgery,postoperative recovery was uneventful,and flakiness has survived well.     

Lingual squamous cell carcinoma surrounded by granular cell tumor

The granular cell tumor (GCT) is an uncommon, benign lesion with a preference for subcutaneous sites. In the head and neck, the tongue is the most common site, followed by the larynx. We experienced a case of a 27-year-old woman with lingual squamous cell carcinoma (SCC) surrounded by GCT. The pathological findings established that the lesion was SCC covered by GCT in the midline of the tongue. The size of the mass was very small, however, so we excised it in a diamond shape. There is an interesting association between GCTs and other malignant neoplasms. However, no causal relationship between GCT and these other carcinomas has been established. Here we report on an SCC coexisting with GCT at the same site as a median tongue lesion and review the literature.     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处.文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系.     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。