通脑灵对缺氧条件下培养的神经细胞热休克蛋白(HSP70)表达的影响

我们以往的研究表明通脑灵可明显提高缺氧损伤后神经细胞的存活率和活性 [1]。但其神经保护作用机制尚有待进一步探讨。为此 ,本实验采用新生大鼠神经细胞缺氧模型 ,结合热休克蛋白 ( HSP70 )表达变化 ,探讨通脑灵保护神经细胞缺氧损伤的机制。1　材料与方法1 .1　主要试剂　多     

通脑灵对原代培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用

目的:研究缺氧/缺糖对皮层神经细胞的损伤及通脑灵颗粒剂对其保护作用。方法:取体外原代培养8d的大鼠大脑皮层神经细胞,换以低糖无血清培养基,并置于95%N2和5%CO2的缺氧罐中5h造成神经细胞缺氧。用神经细胞存活率及神经细胞线粒体活性来评价神经细胞活力;用乳酸脱氢酶(LDH)漏出量作为评价损伤的指标。结果:原代培养皮层神经细胞缺氧5h,再给氧24h后,神经细胞存活率及线粒体活性明显降低,LDH释放量显著增加。通脑灵颗粒剂可显著对抗缺氧/缺糖对皮层神经细胞的损伤,剂量依赖地抑制LDH释放量的增加。结论:通脑灵颗粒剂对皮层神经细胞缺氧/缺糖损伤具有保护作用。     

大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布

目的;观察SD大鼠单侧液压脑损伤后凋亡相关基因（bcl-2,bax）在脑组织中的表达特点。方法：采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化和原位杂交方法,以及计算机显微图像分析技术,观察SD大鼠脑损伤后12 b脑内bcl-2、bax蛋白和mRNA的阳性细胞分布。结果：液压打击伤后bcl-2、bax基因在损伤侧大脑皮质、海马表达明显增强,挫裂伤组织内的血肿周边bcl-2、bax基因表达亦明显增强,阳性细胞受打击能量传递的影响呈梯度分布。结论：大鼠液压脑损伤后bcl-2和bax基因的表达分布受打击能量和脑内血肿的影响,并与脑损伤后迟发性神经元死亡（delayed neuron death,DND）密切相关。     

通脑灵对NMDA介导神经细胞内游离钙离子浓度的影响

目的 :研究通脑灵对 N-甲基 - D-门冬氨酸 (NMDA)介导的神经细胞内游离钙离子 ([Ca2 + ]i)浓度的影响。方法 :应用标记示踪法 ,以 Fura- 2 / AM为荧光指示剂观察通脑灵对 NMDA介导的神经细胞内游离钙离子浓度的影响。结果 :5 0 0μm ol· L- 1 NMDA可使神经细胞内 [Ca2 + ]i明显增高 ,与对照组比较有显著性差异 (P<0 .0 1)。通脑灵可阻止 NMDA介导的神经细胞内 [Ca2 + ]i超载。结论 :通脑灵通过抑制 NMDA介导的钙离子超载而发挥对神经细胞的保护作用     

MK-801对海马脑片培养缺氧缺糖损伤中bcl-2、bax蛋白质表达的影响

目的 :观察NMDA受体拮抗剂MK -80 1对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法 :将体外培养 2周的海马脑片随机分为正常对照组 (HOTC)、单纯缺氧缺糖组 (OGD)和预加MK -80 1后再缺氧缺糖组 (MK -80 1+OGD) ,作HE染色 ,Bcl -2、Bax免疫组化反应染色。结果 :HOTC组、OGD组和MK -80 1+OGD海马脑片CA1区均有不同程度Bcl -2、Bax蛋白表达和细胞缺失形成的空洞。HOTC组MK -80 1+OGD组Bcl-2蛋白的表达均强于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ;Bax蛋白的表达均弱于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ,同时细胞缺失形成的空洞有所减少。结论 :MK -80 1可以引起缺氧缺糖性海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达变化并减轻其锥体细胞损伤程度     

脑室内注射bFGF对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞凋亡及bcl-2、bax的影响

中风为当今世界三大死亡原因之一，但多数中风不会使病人急性死亡，约2／3病人存活一年以上。因此，控制病情发展，促进神经功能恢复至关重要。     

survivin在脑胶质瘤中的表达及其与bcl-2、bax相关性的研究

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在脑胶质瘤中的表达,及其与bcl-2、bax蛋白表达的相关性.方法:应用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法),检测40例脑胶质瘤瘤组织中survivin、bcl-2、bax蛋白的表达,与正常脑组织10例进行对照.结果:胶质瘤中survivin蛋白阳性表达率为42.5%,明显高于正常脑组织的阳性表达率0%(P＜0.05),其中Ⅲ级、Ⅳ级阳性表达率分别为50.0%、80.0%,明显高于Ⅰ～Ⅱ级的阳性表达率16.7%(P＜0.01);survivin蛋白表达与bcl-2蛋白表达呈正相关(P＜0.01),而与bax蛋白表达呈负相关(P＜0.05).结论:survivin可通过抑制肿瘤细胞凋亡,对脑胶质瘤的发生、发展起作用;survivin可能与凋亡相关基因bcl-2、bax在脑胶质瘤的发展中分别起协同和拮抗作用.     

前列腺癌组织中bcl-2和bax蛋白表达的临床病理意义

目的检测bcl-2和bax蛋白在前列腺癌组织中的表达情况,并探讨其与前列腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化检测bcl-2和baX蛋白在32例前列腺癌及癌旁组织中的表达情况。结果bcl-2和bax蛋白在前列腺癌组织中的阳性表达率分别为53．1％和43．6％（17／32和14／32）,而在癌旁组织中的阳性表达率分别为6．3%和100％（2／32和32／32）,两者比较有显著性差异（P〈0．05）。bcl-2蛋白的表达与前列腺癌分化程度及临床分期密切相关（P〈0．05）。bcl-2蛋白的表达与前列腺癌患者年龄无显著相关性（P〉0．05）。结论bcl-2和bax蛋白可能参与前列腺癌的发生发展,有望成为前列腺癌诊断和判断预后的分子标志物。     

甲状腺素对胎鼠脑bcl—2和bax基因表达的影响

目的　研究甲状腺素对胎鼠脑bcl 2和bax基因表达的影响。方法　采用丙基硫氧嘧啶灌胃制备甲减孕鼠模型 ,出生后小鼠即为先天性甲减鼠 ,另一组出生后即日起用腹腔注射T4,剂量为 2 μg/ 10 0g·d-1(替代组 ) ,采用逆转录 -聚合酶链反应检测胎鼠出生后 1、5、10d胎鼠bcl 2和bax基因的表达。结果　bax基因在甲减胎鼠脑第 1天表达最高 ,随着鼠龄增长 ,表达降低 ;正常第 1天胎鼠及替代组胎鼠脑未检测到bax表达 ;bcl 2基因在第 1天甲减胎鼠表达高于正常对照组 ;第 5天、第 10天降低 ;bcl 2在替代组鼠脑中表达较甲减组高。结论　甲状腺激素对bcl 2和bax基因表达的不同影响 ,在脑细胞凋亡中有重要的作用。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注神经元凋亡、bcl-2和bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(Epo)对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白bc l-2、bax表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为6组,缺血再灌注治疗A组、B组、C组、D组(分别在缺血前30 m in及再灌注后2 h、6 h、12 h腹腔注射Epo 3 000 IU.kg-1)、缺血再灌注组(E组)和假手术组(F组)。观察Epo对大鼠脑缺血再灌注后脑组织的病理变化,Epo、bc l-2、bax的表达及神经细胞凋亡情况。结果(1)A组、B组、C组及F均未见明显病理性改变,D组及E组显示梗死区神经元缺血改变;(2)各组均可见不同程度Epo阳性表达细胞,且A组、B组、C组较D组、E组表达明显增多(P<0.05);(3)TUNEL法见A组、B组、C组、F组凋亡阳性细胞较D组、E组明显减少(P<0.05);(4)A组、B组、C组bc l-2蛋白表达较D组、E组、F组明显增多(P<0.05),而bax蛋白表达较D组、E组及F组明显减少(P<0.05)。结论Epo通过调控凋亡相关基因bc l-2/bax的比率而发挥抗神经元凋亡的脑保护作用。     

外源bax基因表达对人视网膜色素上皮细胞bcl-2表达的影响

０引言视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞是视网膜重要的功能细胞之一，其异常增生或退行性变，都会引起感光细胞结构或功能障碍而致盲，详细机制尚不清楚［１，２］．我们的前期实验证实，ｂａｘ表达增强、或ｂｃｌ－２／...     

癃闭康对实验性大鼠前列腺增生组织bax/bcl-2表达的影响

[目的]观察实验性大鼠前列腺组织bax/bcl-2的表达及癃闭康对其的影响.[方法]雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、前列康组、癃闭康低、中、高不同剂量组.去势加丙酸睾丸酮注射法复制前列腺增生模型,干预后观察前列腺湿重、前列腺指数、bax/bcl-2的表达及病理变化.[结果]bax在对照组大鼠前列腺组织中表达呈强阳性,在模型组表达呈弱阳性;各治疗组bax表达均强于模型组;bcl-2蛋白在对照组大鼠前列腺组织中表达呈弱阳性,在模型组表达呈阳性,各治疗组bcl-2蛋白均为弱阳性表达;光镜下组织结构接近对照组.[结论]癃闭康可能通过调节bax/bcl-2的表达促进前列腺增生的上皮细胞凋亡而抑制前列腺组织增生.     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

乳化异氟醚对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及bcl-2、bar表达的影响

目的 观察乳化异氟醚(8%体积分数)对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA与蛋白水平表达的影响.方法 利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分正常培养组、模型组、脂肪乳组、乳化异氟醚(终浓度0.28 mmol/L).各组心肌细胞做相应分组处理后,利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率,并用透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因bcl-2 mRNA、box mRNA的表达.Western blot定量检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 乳化异氟醚组和脂肪乳组均可显著降低细胞凋亡率(P＜0.05),但乳化异氟醚组与脂肪乳组比较降低更明显(P＜0.05).乳化异氟醚可显著上调Bcl-2表达(P＜0.05)、下调Bax表达(P＜0.05);脂肪乳对Bcl-2和Bax表达无影响(P>0.05).结论 乳化异氟醚及其其中的成分之一脂肪乳可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡;乳化异氟醚对缺氧复氧损伤的抗凋亡作用与其心肌细胞Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关.     

大剂量孕激素治疗对子宫内膜腺癌细胞凋亡和bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的探讨大剂量孕激素治疗对子宫内膜腺癌组织细胞凋亡及其调控基因bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法选取2000～2005年收住院手术治疗、资料完整的子宫内膜腺癌患者病理标本30例,应用原位细胞凋亡检测技术(TUNEL)检测孕激素治疗前后子宫内膜腺癌组织细胞凋亡指数,其中16例采用免疫组化S-P法检测bcl-2和bax蛋白表达.结果孕激素治疗前后子宫内膜腺癌组织细胞凋亡指数、bcl-2和bax蛋白表达率分别为(6.00士5.68)和(27.67±2.41)、87.50%和75.00%、100.00%和93.75%.孕激素治疗后子宫内膜腺癌组织中细胞凋亡指数较治疗前明显增加(P＜0.01),其变化与bcl-2及bax蛋白表达无关.结论大剂量孕激素治疗通过促进细胞分化、增加细胞凋亡而达到治疗子宫内膜腺癌的目的.     

纳米磁性靶向药囊对人肝癌裸鼠移植瘤bcl-2/bax蛋白表达的影响

目的观察纳米磁性5-Fu药囊靶向治疗人肝癌裸鼠移植瘤对肿瘤细胞凋亡bcl-2及bax蛋白表达的影响。方法透射电镜观察各组移植瘤形态学特征，免疫组化SABC法测定bcl-2和bax蛋白表达水平。结果电镜观察可见B组（5-Fu）和D组（纳米磁性5-Fu药囊加内磁场）肿瘤组织大量癌细胞凋亡。B和D组bcl-2蛋白表达水平低于A组（生理盐水对照）、C组（纳米磁性5-Fu药囊）和E组（纳米磁小体加内磁场）（P〈0．01），D组bcl-2蛋白表达水平低于B组（P〈0．01）；B组和D组bax蛋白表达水平高于其他三组（P〈0．01），D组bax蛋白表达水平高于B组（P〈0．01）。结论纳米磁性5-Fu药囊靶向治疗能够降低bcl-2蛋白表达，增加bax蛋白表达，促进人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡，提高5-Fu抗肿瘤作用。     

喉鳞癌组织中bcl-2和bax蛋白表达的临床意义

目的:探讨基因bcl-2在喉鳞癌中的表达及其与bax的关系,以及在喉癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组化法测定110例喉鳞癌标本及20例正常粘膜中bcl-2及bax的表达。结果:正常粘膜几乎不表达bcl-2,喉鳞癌标本中表达率47.3%,和病理分级、淋巴结转移情况相关;bax蛋白在喉鳞癌阳性表达率为66.4%;bcl-2和bax呈负相关。结论:bcl-2与bax关系密切,在与喉癌的发生、发展中起作用,有望作为早期诊断的指标基因治疗靶点。     

survivin在食管鳞状细胞癌中的表达及其与bcl-2,bax表达的相关性

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)中的表达,及其与bcl-2、bax基因表达的相关性.方法:应用SP免疫组织化学法检测85例食管鳞癌组织及对应癌旁正常食管黏膜组织中survivin,bcl-2和bax蛋白的表达.结果:食管鳞癌组织中,survivin蛋白的表达率为77.64%,显著高于癌旁正常食管黏膜组织的表达率7.06%(P＜0.05).survivin蛋白表达与食管鳞癌的TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).survivin表达与bcl-2蛋白表达呈正相关(P＜0.05),而与bax蛋白表达无关(P＞0.05).结论:survivin在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用,可能成为食管鳞状细胞癌基因治疗的新靶点.survivin基因可能与bcl-2基因在食管鳞癌的发展中协同作用.     

神经酰胺对人内皮细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 观察外源性神经酰胺(C2-ceramide)对内皮细胞凋亡及相关基因bax和bcl-2表达变化的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞,加药组加入终浓度分别为5、12.5、25、50 μmol/L的C2-ceramide,对照组加入体积分数为0.1%的无水乙醇.采用TUNEL法检测细胞凋亡,用RT-PCR、Western blot技术对bax mRNA、bcl-2 mRNA及蛋白表达进行分析.结果 加药组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组(P＜0.05),且具有时间和剂量依赖性;加药组bax mRNA及蛋白的表达较对照组显著升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA及蛋白的表达较对照组则显著降低(P＜0.05).结论 外源性神经酰胺通过上调bax及下调bcl-2表达水平,改变bax/bcl-2值,从而诱导内皮细胞凋亡.