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相似文献
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1.
用~3H-TdR参入法及半固体琼脂培养法,检测出本室自建小鼠胸腺基质细胞林中的M TEC_1能自发分泌集落刺激因子(CSF)样生物活性因子。用抗IL-6单抗不能封闭MTEC_1-SN的支持骨髓细胞增殖的作用。根据细胞形态学分析,MTEC_1-SN主要促进CFU-GMM和CFU-GM形成。表明MTEC_1细胞除能自发分泌IL-1及IL-6外,尚能自发分泌CSF样活性因子,其主要成份可能为GM-CSF。  相似文献   

2.
选用术中切除的病人淋巴结,以PHA作刺激剂,诱生出高活性人淋巴结复合细胞因子。采用噻唑蓝掺入法(MTT法)对IL-1、IL-2、IL-6及TNF的生物活性及分泌动力学进行了检测,并将复合淋巴因子用于体外Mφ激活试验。结果表明,淋巴结细胞不仅可分泌上述因子,且具有较高的生物活性。IL-1的分泌高峰在48h,分泌量为400U/ml,IL-2的分泌高峰在12h,达1000U/ml,IL-6的分泌高峰为24h,为100U/ml,TNF分泌高峰在48h,对L_(929)。细胞杀伤率为46%,复合细胞因子对Mφ具有很强的激活作用。同时发现,各活性因子的分泌时相呈现不一致性。这对临床过继免疫治疗具有重要的参考价值。  相似文献   

3.
MTSC_1是本室建立的一株小鼠胸腺基质细胞,免疫组织化学及电镜鉴定为上皮细胞来源。MTSC_1能自发分泌多种细胞因子,包括IL-1,IL-6,GM-CSP。鉴于IL-1能诱导IL-8产生,我们采用Boyden盲端小室法检测了MTSC_1的培养上清。实验结果表明M-TSC_1培养上清对小鼠外周血白细胞具有强烈的趋化活性,被趋化的细胞主要为多形核白细胞。当培养上清  相似文献   

4.
目的 探索脂多糖(lipolysaccharide,LPS)干预气道上皮细胞细胞因子的分泌及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的表达.方法 培养A549细胞株,0、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0、50.0、100.0 μg/mL的LPS干预A549细胞2、4、8、24、30、48 h以后收集细胞上清液及细胞质总蛋白,ELASA法检测A549细胞IL-1、IL-6、IL-8、IL-11的分泌,Western blot 法检测相应的PKC的表达.结果 不同浓度LPS干预A549细胞相同时间后细胞因子IL-1、IL-6、IL-8、IL-11的分泌量及PKC的表达量之间的差异均有统计学意义(P<0.01);PKC的表达和IL-11的分泌之间具有相关性(P<0.05).结论 LPS干预细胞因子IL-1、IL-6、IL-8、IL-11的分泌及PKC的表达,且LPS干预细胞因子IL-11的分泌可能和PKC信号通路有关.  相似文献   

5.
目的 探讨负载膀胱癌冻融抗原对树突状细胞(DCs)分泌IL-12的影响。方法 反复冻融法获得膀胱癌细胞株BIU-87细胞抗原;联合应用重组人的GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导健康志愿者DCs并负载膀胱癌肿瘤抗原;用ELISA法检测第3、6和9天培养细胞的上清液,评价DCs分泌IL-12 p70的能力。结果 联合应用重组人的GM-CSF、IL-4和TNF-α可在体外诱导出DCs;经ELISA方法检测,不同时期的DCs分泌IL-12的量不同,而且负载抗原DCs较未负载抗原DCs有更强的分泌能力(P〈0.05)。结论 IL-12 p70的分泌量受DCs的成熟状态及某些刺激信号的影响,膀胱癌冻融抗原是其刺激信号之一。  相似文献   

6.
目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)自分泌细胞因子及其体内外杀瘤过程中多种细胞因子含量的变化,探讨CIK细胞对抗肿瘤的作用机制.方法:取正常人的外周肝素抗凝血分离外周血单个核细胞(PBMC),体外诱导成CIK细胞;同时建立人胃癌高侵袭转移瘤(OCUM-2MD3)细胞裸鼠腹膜移植模型.检测CIK细胞中白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等细胞因子的分泌及其对OCUM-2MD3细胞株体内外杀瘤时上述细胞因子的变化.结果:①CIK细胞培养过程中其上清液IL-2、TNF-α、INF-γ、GM-CSF含量随时间增长而升高,至2周左右达最高峰,随后下降;②体外培养CIK细胞以E:T=25:1对OCUM-2MD3肿瘤细胞作用后,IL-2含量减低明显(P<0.05),TNF-α、GM-CSF含量均降低,INF-γ含量升高;③体内抗瘤实验结果表明,CIK治疗组血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF的含量均较生理盐水对照组显著增高(P<0.05).结论:CIK细胞分泌的细胞因子在2周左右具有最大生物学活性;CIK细胞可能通过其自身分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF等细胞因子参与抗肿瘤作用.  相似文献   

7.
目的研究免疫抑制剂他克莫司(Tacrolimus,FK506)在体外对全血细胞因子分泌的影响。方法健康志愿者全血加入不同浓度FK506,经佛波酯(PMA)和离子霉素(IONO)刺激后,用Bio-Plex悬浮蛋白芯片系统检测上清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF以及G-CSF的水平。结果同对照组相比,高浓度组FK506(20ng/ml)能显著抑制IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF和G-SCF的分泌(P<0.05);中浓度组FK506(5ng/ml)能有效抑制GM-CSF的分泌,两组之间的差异有显著性(P<0.05)。结论FK506对全血细胞促炎症细胞因子IL-6,IFN-γ和TNF-α的分泌有较强的抑制作用,同时对IL-2,IL-12,IL-17以及集落刺激因子因子GM-CSF,G-CSF也有明显抑制作用。因此FK506发挥免疫抑制功能可能通过抑制免疫细胞分泌各类细胞因子来实现。同时,由于FK506与细胞因子的分泌有剂量依赖关系,有望可以通过FK506浓度水平与细胞因子的抑制水平的依赖关系来评估临床病人FK50...  相似文献   

8.
目的:研究“补血活血”要药当归的主要有效成分-当归多糖(APS)对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达造血生长因子GM-CSF、IL-3的影响。方法:采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学、核酸探针原位杂交等实验技术。结果:APS诱导的胸腺细胞、脾细胞培养上清液可促进早期造血祖细胞CFU-Mix增殖分化;APS诱导可促进胸腺细胞、脾细胞表达GM-CSF、IL-3蛋白及mRNA。结论:APS可促进淋巴细胞表达造血生长因子GM-CSF、IL-3,进而促进人早期造血细胞发生。  相似文献   

9.
组织工程皮肤分泌细胞因子的初步研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的研究组织工程皮肤培养液中IL-1β、IL-6和IL-8的分泌情况.方法收集组织工程皮肤制备过程中单层成纤维细胞(fibroblast,FB)培养液、胶原凝胶真皮替代物(dermal equivalent, DE)、复合壳多糖DE和复合壳多糖皮肤替代物(skin equivalent, SE)培养液标本,ELISA法检测其中IL-1β、IL-6和IL-8分泌量.结果复合壳多糖真皮基质促进FB、角质形成细胞(keratinocyte KC)分泌IL-6、IL-8.SE分泌的IL-6、IL-8在DE加KC之后和SE形成分层表皮时形成两个高峰.结论 FB、KC在壳多糖组织工程皮肤中混合器官型培养时分泌IL-6和IL-8较明显,这些细胞因子可在创面愈合中发挥重要作用.  相似文献   

10.
中医药对类风湿性关节炎细胞因子调节作用的研究进展   总被引:4,自引:0,他引:4  
细胞因子(cytokines, CK)参与了类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的整个病理过程中,根据其细胞来源的不同,可将类风湿性关节炎的细胞因子分为两大组,一组为主要由T细胞产生的淋巴因子,包括IL-2、IL-4、IL-10、IFNγ、TNFβ等;另一组为主要由单核或巨噬细胞产生的单核因子如IL-1、IL-6、TNFα、IL-8、GM-CSF、TGFβ等.它们通过自分泌、旁分泌与自身受体结合的方式在自身细胞,邻近细胞(旁分泌)及远处细胞(内在分泌)之间的信息网络中,起信息传递递质的作用,对细胞增殖、分化和分泌有刺激(上调)和抑制(下调)的调节功能,在RA的发病中具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正负反馈的免疫调控作用.当免疫调节功能失调,致炎CK占优势时,则诱导关节炎症发生或迁延发展.近年来,国内学者就中医药对RA细胞因子调节作用进行了一系列的临床和实验研究,在RA不同证型CK变化,中药复方、单性药或中药提取药及针灸对RA细胞因子调节作用方面取得了一定进展,现综述如下.  相似文献   

11.
Recently, the alteration of peripheral T cells has become a focus of attention in research on Crohn's disease (CD). To examine the characteristics of peripheral T cells in CD patients, we analyzed the expression of a memory T cell marker (CD45RO(Bright)CD3+) and the cytokine production by peripheral helper and cytotoxic T cells in patients with CD. With the use of monensin to prevent the secretion of cytokines under stimulation, we measured the count of intracellular cytokine-positive cells for production of interferon (IFN)-gamma, tumor necrosis factor (TNF)-alpha, interleukin (IL)-2, IL-4, IL-6, IL-10, and granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) in the peripheral T cell population using flow-cytometry. The counts of lymphocytes, T cells, and helper T cells in patients with CD were significantly lower than in normal volunteers. Although no difference in the counts of lymphocytes, total T cells, helper and cytotoxic T cells was observed, the counts of intracellular cytokine producing helper T cells in IFN-gamma, TNF-alpha or GM-CSF were significantly higher in active cases than in quiescent cases. These results suggest that stable CD patients are immunosuppressive, and activation of some kinds of T-cells, especially Th1-associated cytokine producing T-cells, correlate with disease progression. Th1-associated cytokine analysis of peripheral T cells may be one of the useful markers to evaluate the activeness of Crohn's disease.  相似文献   

12.
目的:在体外探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中的作用。方法:首先取C57BL/6小鼠股骨、胫骨骨髓细胞,按培养过程中干预因素不同分为 磷酸盐缓冲液(phosphate buff ered saline,PBS)刺激组(PBS组,n=6)、NGF刺激组(NGF组,n=6)、粒巨噬细胞集落刺激 因子(granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4共刺激组(GM-CSF+IL-4组,n=6)、NGF加GM-CSF和 IL-4共刺激组(NGF+GM-CSF+IL-4组,n=6),培养第7天采用流式细胞仪比较各组间CD11c+细胞阳性率和CD8a−亚型比 例;然后用GM-CSF+IL-4刺激培养未成熟的DCs,经CD11c免疫磁珠阳性分选得到纯化的未成熟DCs,将其分为PBS组 (n=6)、NGF组(n=6)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(LPS组,n=6)、NGF+LPS组(n=6),分别用PBS,NGF,LPS, NGF+LPS诱导细胞成熟,24 h后酶联免疫吸附分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中IL-6, IL-10和IL-12的水平。结果:1) NGF组CD11c+DCs百分比高于PBS组,低于GM-CSF+IL-4组(均P<0.05);GM-CSF+IL-4 组与NGF+GM-CS F+IL-4组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),且在4组中均以CD8a−DCs为主;2)NGF可以增强 LPS诱导的DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12(均P<0.05),而单独NGF刺激对DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12无影响(均P>0.05)。 结论:NGF可以诱导小鼠骨髓细胞向CD11c+DCs的定向分化,并且以CD8a−亚型为主;NGF能增强LPS诱导的DC分泌 IL-6,IL-10和IL-12。  相似文献   

13.
Background The prospects of using immature CD8a^+ dendritic cells (DC2) to establish transplant immunologic tolerance and treatments for autoimmune diseases in the future are promising. However, the methods for inducing DC2 are still being explored. The present study was aimed to investigate the optimal in vitro conditions for preparing large numbers of predominant DC2 from murine bone marrow cells. Methods Three groups of bone marrow cells cultured under different conditions were examined, namely a cytokine-induced experimental group (cytokine group), a control group with a low concentration of granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF, low GM-CSF group) and a control group without endogenous cytokines. The cytokine group was cultured with 5 ng/ml GM-CSF, 25 ng/ml Fit3 ligand (FIt3L), 20 ng/ml interleukin 4 (IL-4) and 100 ng/ml stem cell factor (SCF). The low GM-CSF control group was cultured with 0.4 ng/ml GM-CSF, 25 ng/ml FIt3L and 100 ng/ml SCF, without IL-4. The control group without exogenous cytokines was cultured without additional cytokines. All cells were cultured at 37℃ under 5% CO2. On days 3, 7 and 16, 4-color flow cytometry was carried out to analyze the cell phenotypes, and the total cell numbers were counted to analyze the cell yields. Phase-contrast microscopy was used to observe the cell morphologies. Results The cytokine group exhibited higher proportions of typical immature CD8a^+ DC, especially on day 3, but the total cell number and DC2 proportion decreased during prolonged culture. The low GM-CSF control group showed the same tendencies as the cytokine group on days 16 and 22, but produced higher total cell numbers (P 〈0.05) with lower DC2 proportions and cell numbers. The control group without exogenous cytokines spontaneously generated a certain proportion of DC2, but with low total cell and DC2 numbers that decreased rapidly, especially during prolonged culture (days 7 and 16, P 〈0.05), Conclusions Culture in the presence of 5 ng/ml GM-CSF, 25 ng/ml FIt3L, 20 ng/ml IL-4 and 100 ng/ml SCF can rapidly induce large quantities of predominant immature CD8a^+ DC from murine bone marrow cells. Therefore, these represent optimal culture conditions for preparing murine immature DC2 in vitro.  相似文献   

14.
Cytokine expression of T cells in chronic myeloid leukemia   总被引:1,自引:1,他引:0  
  相似文献   

15.
目的探讨从肝癌患者外周血中大量快速分离树突状细胞(DC)有效方法。方法自肝癌患者外周血中分离出单个核细胞(PBMC);PBMC与Gm-CSF及IL-4共培养;检测培养前后DC表面HLA-DR及B7-2表达水平及DC诱导T细胞增殖能力。结果GM-CSF及IL-4联合刺激选择性使PBMC中DC大量增殖,并通过增强DC表面HLA-DR及B7表达[从(12.8±1.1)、(15.1±1.0)增至19.1±1.7)、(21.6±1.5),P<0.01]进一步增强DC免疫功能[由(6820±140)增至(14090±180)min-1,P<0.01]。结论联合应用GM-CSF及IL-4能够从肝癌患者血中制备出大量高免疫活力DC。  相似文献   

16.
目的探讨因子组合FL+TPO+SCF+IL-6对脐血CD34 +细胞的体外扩增效应.方法采用Mini-MACS分离纯化出CD34+细胞, 在无基质接触的液体悬浮培养体系培养,通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪技术、集落形成试验等动态测定细胞扩增情况.结果培养4周后,FL+TPO+SCF+IL-6组细胞总数、集落形成数均比扩增前显著增加(P<0.05),并且能维持一定比例的CD34+、Th y-1+细胞;SCF+IL-3+IL-6+GM-CSF+EPO组在第2周时集落形成数已降低,第4周时集落形成数、CD34+细胞基本检测不到.结论与经典因子组合SCF+IL-3+IL-6+G M-CSF+EPO相比,因子组合FL+TPO +SCF+IL-6能在较长时间内有效扩增脐血造血干/祖细胞, 是一个优化组合方案.  相似文献   

17.
目的探索不同级别小鼠来源的骨髓细胞对体外制备优势DC2细胞的影响。方法取SPF级和健康普通级C57BL/6小鼠股、胫骨骨髓细胞及脾细胞,设细胞因子诱导的实验组、低浓度GM-CSF对照组、无外源细胞因子对照组及脾细胞组。骨髓细胞采用GM-CSF,IL-4,Flt3L和SCF的不同细胞因子浓度和组合体外培养诱导。脾细胞培养2d去除大部分淋巴细胞,第3天采用流式细胞术4色荧光标记法分析细胞表型,骨髓细胞诱导的各组同样于第3天采用流式细胞术分析细胞表型,比较不同级别小鼠骨髓细胞所诱导的DC2细胞的表型和比例。结果SPF来源的小鼠骨髓细胞诱导的各组第3d在CD11c+的DC细胞群中CD8α+DC2所占比例及不成熟DC2的比例均高于普通级小鼠,显示普通鼠来源的骨髓细胞更倾向于产生成熟的DC,不易诱导产生高比例的不成熟的DC2。对两种动物脾细胞DC2的分析结果表明,普通鼠脾脏中CD8α-MHCⅡ+的成熟DC1比例为75.58%,远远超过SPF鼠的30.60%。结论小鼠的微生物级别可影响耐受性DC的诱导效果,采用SPF级小鼠来源的骨髓细胞体外制备优势DC2细胞效果优于普通级鼠,原因可能与普通鼠接触微生物较多,免疫系统更易于产...  相似文献   

18.
陈功  陈祥  朱丹丹  王自谱  张小洁  信照亮 《浙江医学》2018,(10):1027-1032,1044
目的初步研究蛛网膜下腔出血(SAH)状况下IL-6对大鼠蛛网膜细胞极化状态的影响。方法细胞免疫化学法(ICC)鉴定培养的大鼠蛛网膜细胞对CK8+18、Vimentin和CD68的表达;采用体外培养的大鼠蛛网膜细胞,经极化诱导剂粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)分别刺激后,采用ELISA法检测极化相关因子IL-12、IL-6和IL-10的变化,观察其是否发生极化;然后用凝血酶作为激活剂活化蛛网膜细胞在体外模拟SAH状况,再采用IL-6刺激活化的蛛网膜细胞和正常(非活化)蛛网膜细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法观察CD68、CK8+18、IL-12和IL-23、精氨酸酶-I(Arg-I)的RNA(相对)表达水平。结果(1)培养细胞的蛛网膜细胞标志CK18+18和Vimentin、巨噬细胞标志CD68表达阳性。(2)GM-CSF可诱导蛛网膜细胞IL-6和IL-12p40表达增高,而M-CSF未能诱导IL-10表达变化。(3)凝血酶可诱导蛛网膜细胞发生高Arg-I的M2极化。(4)IL-6刺激剂量大则CD68表达早持续时间短的时间模式。(5)IL-6刺激剂量与蛛网膜细胞极化的时间模式明显不同,实验组1、3、7、14d时IL-23表达均增高,对照组IL-23、IL-12p40和Arg-I在刺激14d才增高。结论培养的蛛网膜细胞具有单核巨噬细胞的特性;蛛网膜细胞仅能被极化诱导剂诱导M1极化,未发生M2极化,与外周明显不同;在模拟SAH状况下蛛网膜细胞呈持续的M1型极化,低IL-10的M2型极化状态,显示其极化能力不良,这将不利于蛛网膜下腔中溶血产物的清除和相关SAH后并发症的发生、发展;SAH状况下蛛网膜细胞经IL-6刺激后发生M1/M2极化,其时间和表现模式多样,为IL-6作为“预测SAH预后的标志因子”提供了新证据。  相似文献   

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