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相似文献
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1.
目的 观察Skp2在肝癌组织及细胞中表达,及其对HepG2细胞增殖.凋亡及侵袭的影响。方法 利用 siRNA 沉默 HepG2中Skp2的表达。采用qRT-PCR检测肝癌组织及细胞中Skp2 mRNA的表达, CCK-8.流式细胞术和Transwell小室测定干扰Skp2表达后对细胞的增殖.凋亡和侵袭力的影响, ELISA法测定MMP2和MMP9水平,Western blot法检测caspase-3.P27的表达。结果 肝癌组织中Skp2 的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。与NC-Skp2组比较,siRNA- Skp2组Skp2 mRNA水平显著降低,细胞的增殖能力受抑制,凋亡能力增强,细胞侵袭力下调(P<0.05)。此外,与NC- Skp2组比较,siRNA- Skp2组HepG2细胞分泌MMP2和MMP9能力明显降低,caspase-3.P27蛋白水平明显增加(P<0.05)。结论 Skp2的表达与细胞HepG2的增殖.凋亡和侵袭密切有关,siRNA可以降低HepG2细胞的增殖和侵袭,诱导细胞凋亡。  相似文献   

2.
目的 研究HBV及其抗原成分是否诱导HepG2细胞表达IL-8及其相关机制。方法 以人肝胚瘤细胞株HepG2和HepG2.2.15细胞为研究对象,比较分析两种细胞株细胞上清液中IL-8的表达,并将能够表达完整HBV病毒颗粒或HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBx蛋白的质粒pSM2、pHBs-EGFP、pHBe-EGFP、pHBc-EGFP和pHBx-EGFP转染HepG2细胞,以ELISA技术分析细胞上清液的IL-8表达情况。在转染pSM2、pHBx-EGFP质粒的HepG2细胞中加入核转录因子NF-κB抑制剂SN50,以凝胶阻滞电泳和ELISA技术分析细胞中核转录因子NF-κB活性和细胞上清液中IL-8含量。结果 HepG2.2.15细胞上清液中IL-8显著高于HepG2细胞;转染HBV全基因组序列表达质粒pSM2和HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBx蛋白的质粒pSM2、pHBs-EGFP、pHBe-EGFP、pHBc-EGFP、pHBx-EGFP后,HepG2细胞能够表达完整的HBV颗粒或HBV抗原,其中转染质粒pSM2和pHBx-EGFP的HepG2细胞上清液中IL-8的含量显著高于空载体质粒pcDNA3.1和pEGFP-N1转染的HepG2细胞。EMSA分析提示随着NF-κB抑制剂SN50抑制HepG2细胞中NF-κB的活性,转染质粒pSM2和pHBx-EGFP的HepG2细胞上清液中IL-8的含量逐渐减少。结论 在体外细胞模型中,HBV及其抗原成分很可能通过影响细胞核转录因子NF-κB活性进而诱导肝细胞表达IL-8。  相似文献   

3.
目的 探讨竹节香附素A对人肝癌细胞 HepG2增殖的影响。方法 将不同质量浓度的竹节香附素A与 HepG2细胞共同培养,采用 MT T比色法及细胞集落形成法检测竹节香附素A对HepG2细胞生长、增殖的影响。结果 竹节香附素A对 HepG2 细胞生长的 IC50 为 894 μg/mL。与未处理组相比,5、10、20、40 μg/mL 的竹节香附素A分别与 HepG2 细胞共同培养 72 h,在培养 24 h 时的细胞增殖抑制率分别为:(24.81±0.55)%、(39.17±1.30)%、(62.45±7.56)%、(79.93±5.48)%,在培养 48 h 时的抑制率为 (35.67±0.81)%、(49.73±9.18)%、(71.62±1.03)%、(87.06±1.84)%,在培养 72 h 时的抑制率为 (42.52±1.31)%、(59.75±7.47)%、(78.85±3.15)%、(91.36±0.84)%;顺铂对照组在细胞培养 24、48、72 h 的抑制率分别为 (2.60±0.53)%、(60.55±5.66)%、(82.61±8.95)%。竹节香附素A各剂量的作用与未处理组相比,在各时间点均有显著差异 (P<0.001);与顺铂相比,竹节香附素A起效更快,24 h 检测具有显著差异 (P<0.001);5、10、20 μg/mL 剂量在 24 h 以外的时间点与顺铂相比无差异,40 μg/mL 剂量在各时间点对 HepG2 细胞的抑制作用仍较顺铂的作用强 (P<0.01)。集落形成实验显示,对照组的集落形成率为 45.47%;而竹节香附素A 1.25、2.5、5 μg/mL 3个剂量组仅分别为 15.73%、7.2%、3.33%,即集落形成抑制率分别为 (66.75±1.66)%、(84.25±3.11)%、(92.55±2.33)%,与对照组相比有显著差异 (P<0.001)。结论 竹节香附素A对 HepG2 细胞增殖有明显抑制作用,在一定范围内随着试药质量浓度的升高和作用时间的延长而增强。  相似文献   

4.
目的 观察沉默细胞内氯离子通道蛋白1(chloride channel protein 1,CLIC1)的基因表达后对胃癌BGC-823细胞增值、侵袭、迁移以及周期和凋亡的影响。方法 化学合成针对CLIC1的靶向siRNA (CLIC1 siRNA组),以转染脂质体试剂细胞(MOCK组)和空白细胞(CTRL组)作为对照。用MTT、流式细胞术以及Transwell分别观察细胞的增值、周期、凋亡、侵袭和迁移能力的变化。结果 转染24h、48h和72h后,CLIC1 siRNA组与MOCK组、CTRL组相比,其增殖能力均显著增强(P<0.05);转染48h后CLIC 1siRNA组G2/M期细胞明显增多(P<0.05)、凋亡率显著降低(P<0.05)、侵袭及迁移细胞数明显下降(P<0.05)。结论 CLIC1在胃癌的发生、发展及侵袭迁移中过程发挥重要作用。  相似文献   

5.
目的研究丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法运用CCK-8检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖活性的影响。运用流式细胞仪检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞凋亡率的影响。划痕实验检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验比较丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞侵袭转移能力的影响。Western blot法检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果CCK-8法发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。流式细胞术分析发现丹酚酸B能诱导人喉癌Hep-2细胞发生凋亡。划痕实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的迁移能力。Transwell实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的体外侵袭能力。Western blot法检测发现测丹酚酸B能有效降低人喉癌Hep-2细胞PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平。结论丹酚酸B在体外能够有效抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时抑制喉癌细胞的体外侵袭转移能力。其作用可能与下调PI3K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平相关。  相似文献   

6.
目的 探讨联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(NPs)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G2/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加(P<0.01),抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子(p-STAT3)以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。  相似文献   

7.
目的 观察亚麻木酚素(SDG)对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法 在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的SDG(5、10、20、40 μmol/L),MTT观察细胞增殖情况;Transwell小室评价细胞侵袭能力;Hochest染色观察细胞凋亡情况;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;Real Time PCR、Western Blotting检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA和蛋白表达。结果 SDG呈时间-浓度依赖性抑制A549细胞的增殖(P<0.05)。细胞侵袭能力明显下降、凋亡比率和Caspase-3活性明显升高、MMP-2 mRNA和蛋白的表达显著下降(P<0.05)。结论 SDG呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞的增殖和侵袭,其机制可能与其促凋亡、抑制MMP-2的表达有关。  相似文献   

8.
目的 构建含小分子肽P1-GFP融合基因慢病毒载体, 用携带P1-GFP融合基因的慢病毒感染MSC, 使MSC具有靶向性, 将靶向MSC注入小鼠体内后观察MSC在小鼠脾脏的定位及与淋巴细胞的关系。方法 用组织片贴壁法培养健康人脐带间充质干细胞, 用基因工程技术构建含小分子肽P1-GFP融合基因慢病毒载体并感染人脐带间充质干细胞, 通过尾静脉将转入P1-GFP融合基因的MSC注入小鼠体内, 18 h后免疫组化染色观察GFP在小鼠脾脏的定位。 结果 培养的健康人脐带间充质干细胞生长良好, MSC感染含P1-GFP融合基因的慢病毒18 h后MSC开始出现绿色荧光, 随着培养时间的延长, 荧光强度逐渐增强, 72 h达高峰。靶向MSC表达髓系干细胞的表面标记 CD105(90.0%)/CD44(98%),CD73(85.0%)/CD90(98.5%)。将靶向MSC经尾静脉注入小鼠体内, 18 h后小鼠脾脏出现大量GFP阳性细胞, 并与脾脏淋巴细胞密切接触。结论 本研究成功构建了含P1-GFP融合基因的靶向MSC, 靶向MSC成功定向脾脏, 并与脾脏淋巴细胞密切接触, 可用于后续的实验研究。  相似文献   

9.
黄恺飞 《医学教育探索》2010,41(11):1823-1828
目的 研究藤黄酸对人胃癌 BGC-803 细胞增殖和转移相关能力的影响及其机制。方法 MTT、Hoechst 染色法检测藤黄酸对 BGC-803 细胞的增殖和凋亡的影响;侵袭小室模型等方法检测藤黄酸对 BGC-803 细胞侵袭、黏附、迁移的影响;运用 RT-PCR、Western-blotting 法分析藤黄酸对胃癌细胞凋亡和转移相关基因 bcl-2、bax、细胞黏附分子-1 (ICAM-1) mRNA 和蛋白表达的影响。结果 藤黄酸抑制 BGC-803 细胞的生长,其抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系。低浓度的藤黄酸处理 BGC-803 细胞后,可明显降低胃癌细胞的黏附、迁移和侵袭能力。随着藤黄酸浓度的增大,bcl-2、ICAM-1 mRNA 和蛋白表达均下调,bax mRNA 和蛋白表达上调。结论 藤黄酸对胃癌细胞 BGC-803 有明显的生长抑制作用,具有显著的促肿瘤细胞凋亡作用和抑制肿瘤细胞转移相关性质,其机制可能与下调 bcl-2、ICAM-1 及上调 bax 的表达有关。  相似文献   

10.
目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G0/G1期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。  相似文献   

11.
目的建立食蟹猴脐带间充质干细胞的分离培养方法。方法新鲜食蟹猴脐带剪碎为糊状,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养,观察细胞形态特征,流式细胞技术分析细胞抗原标志的表达,并检测其体外多向分化潜能。结果运用组织贴块法可以从新鲜脐带中分离到贴壁生长、阳性表达CD29、CD44、CD90的成纤维细胞样细胞。这些细胞在体外诱导培养后可分别检测到脂滴、骨和软骨细胞。结论运用组织贴块培养法可用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液从食蟹猴脐带中分离到间充质干细胞。  相似文献   

12.
目的 通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法 应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用MTT测定细胞增殖曲线,应用流式细胞仪行检测细胞周期。利用Transwell小室试验后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果 miR-181b-5p模拟物促进细胞增殖,促进S期的转变,加速细胞周期进程;miR-181b-5p抑制物抑制细胞增殖,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,延缓细胞周期进程。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目151±11个相比,miR-181b-5p模拟物组184±9个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目35±6个相比,miR-181b-5p模拟物组48±5个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高(P<0.05)。结论 miR-181b-5p在SLK细胞中高表达,其对SLK细胞的增殖、侵袭和迁移能力可能存在正向调控作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。  相似文献   

13.
目的 筛选胶质母细胞瘤中差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),探讨其在胶质母细胞瘤生长及侵袭中的作用。方法 选取8例配对的胶质母细胞瘤瘤体组织与瘤周正常脑组织进行高通量杂交实验,筛选表达差异最显著的lncRNA,建立该lncRNA过表达和干扰表达的人胶质母细胞瘤细胞模型。利用CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 筛选出在胶质母细胞瘤中高表达的lncRNA MIR210HG,并针对lncRNA MIR210HG成功建立了过表达和干扰表达胶质母细胞瘤细胞株。体外实验发现,过表达lncRNA MIR210HG后胶质母细胞瘤细胞增殖能力增强、凋亡细胞比例下降、侵袭和迁移能力增强,干扰lncRNA MIR210HG表达后胶质母细胞瘤细胞增殖能力下降、凋亡细胞比例升高、侵袭和迁移能力下降,与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 LncRNA MIR210HG能促进胶质母细胞瘤细胞增殖、抑制凋亡,并增强细胞侵袭和迁移,有望成为胶质母细胞瘤治疗的新靶点。  相似文献   

14.
全骨髓法培养大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的方法,研究MSC的生物学特性。方法贴壁培养法分离纯化大鼠MSC,体外培养和连续传代,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化;利用四唑盐比色(MTF)法测定MSC的生长曲线;流式细胞仪(FCM)鉴定MSC膜抗原。结果原代分离的MSC在接种后48h贴壁,细胞形态为椭圆形、多角形及短梭形,12天时细胞呈长梭形并达到90%单层融合。经传代扩增,细胞进一步纯化。细胞传代后2天内处于潜伏期,3天后进人生长期,7天后进入平台期。FCM检测CIM5、CD90阳性率分别为19.60%、95.38%。结论贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSC,用此方法培养的细胞生长稳定,增殖能力活跃,具有MSC的一般生物学特性,为其成为组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持。  相似文献   

15.
人脐带间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的探讨人脐带间质干细胞(MSC)的分离、纯化、扩增方法,研究其基本生物学特性.方法无菌条件下收集剖宫产新生儿脐带,分别用组织块贴壁法和酶消化法获取脐带间质干细胞,进行原代培养.应用DMEM/F12培养液进行纯化和扩增培养.用流式细胞仪检测MSC的细胞表面标志.绘制细胞生长曲线并测定细胞周期.结果两种分离方法均可获得MSC,原代培养12~14 d后可达90%融合,细胞可传代20代以上.流式细胞仪检测结果显示,脐带MSC强表达CD13、CD29、CD44、CD105,弱表达CD106,不表达CD34、CD11a、CD14、CD31、CD45.结论脐带MSC在体外有较强的增殖能力,可作为组织工程的种子细胞.  相似文献   

16.
[目的]研究石榴皮多酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。[方法]四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测石榴皮多酚对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡。[结果]石榴皮多酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖有抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性;石榴皮多酚能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,使癌细胞周期被阻滞在G2-M期。[结论]石榴皮多酚可抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,诱导癌细胞凋亡,并阻滞癌细胞在G2-M期。  相似文献   

17.
目的:分析Tip30表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法:聚乳酸-羟乙酸(polylactic-co-glycolic acid, PLGA)纳米粒介导腺相关病毒质粒pAAV-Tip30真核表达质粒转染HepG2细胞。RT-PCR检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2,MMP-9和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA水平;Western印迹 检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;Transwell法检测肝癌细胞迁移能力;四氮唑盐(MTS)法和细胞集落形成实验检测细 胞增殖能力;细胞-细胞黏附试验、细胞-基质黏附实验检测Tip30表达对肝癌细胞黏附能力的影响。结果:过表达Tip30 基因的HepG2肝癌细胞明显降低了MMP-2,MMP-9的mRNA表达和蛋白的翻译;肝癌细胞的增殖、锚定非依赖性生长及 肝癌细胞迁移能力均明显受到抑制。结论:体外实验研究证明Tip30基因可抑制肝癌细胞侵袭转移的能力。  相似文献   

18.
马瑾  王建承 《医学研究杂志》2018,47(10):118-125
目的 探讨microRNA-372(miR-372)靶向调控SDC1基因表达抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭的机制研究。方法 收集人胰腺癌及癌旁组织手术标本;qRT-PCR和免疫组化法检测组织中miR-372和SDC1表达;筛选miR-372表达水平最高的人胰腺癌细胞系进行分组和转染,实验分成6组,即空白对照组、阴性对照组、miR-372 mimic组、miR-372 inhibitor组、siRNA-SDC1组和miR-372 inhibitor+siRNA-SDC1组;双荧光素酶报告基因试验验证miR-372和SDC1基因的靶向关系;CCK8法、流式细胞术、划痕试验及Transwell试验分别检测各组细胞转染后增殖能力、凋亡情况、迁移及侵袭能力;qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞转染后SDC1和上皮细胞标志物E-cadherin及间质表型细胞标志物Vimentin的表达水平。结果 SDC1蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。胰腺癌中miR-372、SDC1表达与肿瘤分化程度、转移和TNM分期显著相关(P<0.05)。双荧光素酶报告基因试验结果显示SDC1是miR-372的靶基因。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-372 mimic组和siRNA-SDC1组细胞的生长、迁移和侵袭受到抑制,凋亡率增加,SDC1和Vimentin的表达水平明显降低,E-cadherin的表达水平明显升高(P均<0.05);而miR-372 inhibitor组的趋势与miR-372 mimic组和siRNA-SDC1相反(P均<0.05);然而,miR-372 inhibitor+siRNA-SDC1组与空白对照组和阴性对照组比较,各项指标差异均无统计学意义。结论 miR-372可能通过靶向抑制SDC1基因表达,抑制人胰腺癌细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化。  相似文献   

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