转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室杀蚊幼毒效的观察

目的 观察转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻实验室对淡色库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊不同龄期幼虫杀灭效果. 方法 利用不同浓度的工程藻,分别作用于淡色库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊敏感品系Ⅲ龄幼虫,以及它们不同龄期的幼虫,并设计阴性及空白对照,分别于24H、48H计数死亡率,从而分析基因蓝藻的杀蚊幼毒效.结果 工程藻对三种蚊种Ⅲ龄幼虫均具有杀灭作用,对淡色库蚊、白纹伊蚊幼虫杀灭效果较高,对中华按蚊幼虫效果较差.48H对以上三种蚊虫Ⅲ龄幼虫的杀灭率分别为100％、100％和42％;工程藻对低龄幼虫的杀灭效果高于高龄幼虫,即龄期越低对工程藻的敏感性越高,杀蚊毒效与龄期呈负相关. 结论 转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻具有明显杀蚊幼效果,为今后蚊虫防治提供了新的方法.     

大链壶菌对三属蚊幼虫的比较灭蚊实验

目的：观察并比较大链壶菌对致倦库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊幼虫的实验感染和杀灭情况。方法：在相同实验条件下用生物测定的方法分别观察、比较三属蚊幼虫实验组及对照组的死亡率和校正死亡率，同时比较蚊幼虫被大链壶菌感染后6、24、48、72h各时段的死亡率。结果：平均死亡率致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫实验组明显高于对照组，而中华按蚊幼虫两组无明显差别。三属蚊幼虫的平均校正死亡率两两有差别。平均死亡率致倦库蚊幼虫以感染后6、24、48h较高，白纹伊蚊幼虫以感染后48h较高。未观察到中华按蚊幼虫被大链壶菌感染的征象。结论：致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫对大链壶菌易感染，中华按蚊幼虫不易感染。     

苏云金杆菌H-14灭蚊幼虫的实验观察

苏云金杆菌H-14(Bacillus thuringiensis H-14,简称Bt H-14)杀灭蚊幼具有很高的效果。用18×10~3/ml Bt H-14(含芽孢数)处理致倦库蚊和白纹伊蚊效果可达100％。不同龄期和不同蚊种幼虫对Bt H-14敏感度不同。导致幼虫的死亡原因为晶体毒素使中肠细胞的细胞器发生病理改变,影响能量代谢和酶活性而死亡。少数晚期4龄幼虫吞食Bt H-14后可继续化蛹,但后代的繁殖均受到一定的影响。     

荆州市城区2018—2020年白纹伊蚊抗药性监测分析

目的 掌握荆州市城区登革热传播媒介白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平，为合理选择和使用杀虫剂，指导白纹伊蚊的防制提供科学依据。方法 2018—2020年的6—10月在荆州市城区采集白纹伊蚊的卵和幼虫，带回实验室饲养，取3龄末～4龄初的蚊幼虫进行幼虫浸渍法监测；取羽化后3～5天的未吸血健康雌蚊进行成蚊接触筒监测。用SPSS 22.0软件对监测结果分析。结果 2018—2020年，白纹伊蚊幼虫对高效氯氰菊酯、氯菊酯和敌敌畏为高抗(LC₅₀=0.095 834 mg/L、0.163 511 mg/L、0.193 573 mg/L);对高效氯氟氰菊酯为中抗(LC₅₀=0.034 359 mg/L);白纹伊蚊幼虫对溴氰菊酯的抗性水平升高，由中抗(LC₅₀=0.005 410 mg/L)变为高抗(LC₅₀=0.056 935 mg/L);白纹伊蚊幼虫对吡丙醚、Bti和双硫磷的抗性有所下降，分别由高抗、中抗和中抗(LC₅₀=0.006 774 mg/L、0.010 318 mg/L、0.029...     

表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌杀蚊幼活性及增效剂型测试

目的 构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用.方法 分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得分别表达AaIT和Cyt2Ba的工程菌株,经IPTG诱导后,用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白的表达;测试不同浓度工程菌菌液对于蚊幼虫的杀灭效果;并将有效的工程菌制成干粉剂,检测其干粉末及其配剂对蚊幼虫的杀灭效果.结果 AaIT和Cyt2Ba重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,但AaIT重组蛋白对蚊幼虫不具有毒性.表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌菌液对白纹伊蚊和致倦库蚊幼虫均具有明显的杀灭作用,48 h的LC50分别为3.00×106和1.25×107 cells/mL,其中对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果要显著优于对致倦库蚊幼虫的杀灭效果(P<0.001),并且表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌干粉末及其配剂均具有较好的杀蚊幼虫效果.当该工程菌干粉末与干酵母粉、小麦粉和白胡椒粉分别按4:1、1:1和1:4比例制成配剂处理蚊幼虫48 h后,结果显示当质量比为1:1时,配剂杀蚊幼效果显著提高(P=0.044),并且白胡椒粉末配剂效果要显著好于干酵母粉和小麦粉配剂(P=0.002).结论 表达Cyt2Ba的重组大肠埃希菌对蚊幼虫具有较好的杀灭作用,合适配剂的使用可以增强其在蚊虫防制中的效果.     

龙岩地区白纹伊蚊孳生现状调查分析

目的：探讨城市白纹伊蚊的孳生现状与密度。方法：调查孳生地种类，捕捞幼虫计数密度，户外诱捕成蚊计算棘叮率（只/人工小时）和调查群众对蚊虫知识的知晓率。结果；龙岩市白纹伊蚊孳生地广泛。幼虫密度以废酒坛，建筑工地，轮胎，废缸类等最高，最高密度依次达960条/勺，900条/勺，500条/勺和93条/勺，成蚊刺叮率以建筑工地，酒厂，修车场和花圃为高，分别为186只/人工小时，112只/人工小时，18只/人工小时和10只/人工小时，群众对蚊虫知识的知晓率低。仅为16.3%。结论：龙岩市白蚊伊蚊孳生地也与以往有所不同，建筑工地，轮胎，废酒坛等已成为目前白纹伊蚊重要的孳生地。必须通过综合治理消除白纹伊蚊孳生地。其中加强蚊虫知识宣传是控制白纹伊蚊危害的重要环节。     

武汉市登革热媒介白纹伊蚊对常用杀虫剂的敏感性研究

目的 了解武汉市白纹伊蚊常用的化学杀虫剂、生长调节剂及部分生物杀虫剂对野外白纹伊蚊幼虫的敏感性,为当地白纹伊蚊的防控提供科学依据。方法 采集武汉市白纹伊蚊野外种群,经实验室鉴定计数,白纹伊蚊幼虫 1 847只,蛹302只,实验室饲养至F₁代,试虫为F₁代三龄幼虫。采用幼虫浸渍法测定幼虫对不同杀虫剂（96.85%溴氰菊酯、99.00%氯菊酯、87.40%双硫磷、95.56%残杀威、97.00%吡丙醚、95.00%S-烯虫酯、98.70%除虫脲）及 7 000 ITU/mg Bti对白纹伊蚊的敏感性;白纹伊蚊二龄幼虫被武昌罗索线虫寄生后,每天统计幼虫死亡情况,绘制存活曲线。结果 武汉市白纹伊蚊幼虫对双硫磷、溴氰菊酯、氯菊酯、残杀威LC₅₀分别为0.023 40、0.036 37、0.200 0、1.562 9 mg/L,对双硫磷和溴氰菊酯较为敏感。对S-烯虫酯、吡丙醚和除虫脲IE₅₀分别为0.000 310、0.000 412、0.009 594 mg/L,对S-烯虫酯和吡丙醚较为敏感。Bti对白纹伊蚊LC₅₀为0.002 697 mg/L,在蚊幼虫∶线虫=1∶5和1∶10的感染比例时,蚊幼虫死亡率分别为77.42%和95.04%,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.000 1）。结论 武汉市白纹伊蚊幼虫防控时,双硫磷、溴氰菊酯可作为快速杀灭手段,也可以选用S-烯虫酯和吡丙醚等生长调节剂。同时,生物测定表明生物防治剂武昌罗索线虫对白纹伊蚊幼虫也有较好的防控效果。     

福州市建筑工地登革热蚊媒孳生现状与药物控制方法研究

目的:研究福州市建筑工地登革热传播媒介白纹伊蚊的孳生现状与药物控制方法,为制订防制措施提供科学依据。方法:采用捞勺和人诱法进行现场测定伊蚊幼、成蚊的密度,用溴氰菊酯、三氯杀虫酯、倍硫磷等药物制成烟薰、喷杀、缓释剂等卫生杀虫剂,用对比法观察计算杀灭前后伊蚊的密度下降情况。结果:调查350家建筑工地的积水分布状况,长期积水为252个,占72％;积水数为3850处,其中有幼虫孳生为2402处,占62.38％。使用溴氰菊酯、三氯杀虫酯作为烟薰杀虫剂,2d内成蚊密度分别下降80％和60％;用溴氰菊酯、倍硫磷作为喷杀剂,1d内成蚊密度分别下降98％和100％,制成缓释剂,幼蚊密度1d内分别下降100％和98％。结论:福州市建筑工地普遍生白纹伊蚊,并多与致倦库蚊共生占87％,与三带喙库蚊或三蚊种共生占4％,伊纹在6～20m2积水里仍可以孳生。用三氯杀虫酯烟薰灭工地地下密闭部位的成蚊,倍硫磷喷杀剂灭成蚊,溴氰菊酯缓释剂杀灭较大积水中的幼、成蚊均具有较好效果,可将白纹伊蚊密度降至不足为害的水平。     

珍珠菜总黄酮苷诱导HL-60细胞凋亡作用的研究

目曲：对珍珠菜总黄酮苷㈣诱导人白血病HL-60细胞凋亡作用进行研究。方法：HL-60细胞经ZTF作用后，通过光镜和透射电镜观察细胞的形态学变化，采用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳观察ZTF对HL-60细胞周期的影响。结摹：HL-60细胞经ZTF作用后，形态学和琼脂糖凝胶电泳试验均可观察到明显的细胞凋亡形态；流式细胞仪测定结果表明作用24h，可使HL-60细胞凋亡，作用48h后，可使HL-60细胞阻滞于C2／M期。结论：ZTF可能直接损伤肿瘤细胞DNA及干扰细胞某些蛋白的合成。     

贵州自然界白纹伊蚊体内登革病毒带毒情况

目的：利用细胞、分子生物学技术对贵州省自然界白纹伊蚊体内登革病毒(DEN)带毒情况进行调查。方法：采集贵州省9个地(州)市共计18个县(区)白纹伊蚊幼虫标本，饲养成蚊；制备蚊悬液，碘化钠法提取RNA，用DENNSl基因区通用引物经逆转录-聚合酶链反应(TR-PCR)检测DEN核酸，限制性内切酶酶切鉴定阳性PCR产物并分型；蚊悬液接种C6／36细胞进行病毒分离，制作细胞片，间接免疫荧光法检测DEN抗原。结果：从独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到1株DEN-2型病毒，从凯里、黄果树和镇远3处地方株白纹伊蚊体内检测出DEN核酸，用抗DEN1～4型单克隆抗体经间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR产物酶切分型鉴定，分别为登革病毒2型、4型。结论：贵州省存在DEN感染的自然循环。     

人非抗凝血块中基因组DNA提取不同方法的比较

目的:比较三种不同方法提取人非抗凝血块基因组DNA的效果差异。方法:分别采用酚/氯仿法,天根试剂盒,Invitrigen purelinkTM试剂盒提取冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,测定浓度、OD260/280值,琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA浓度和纯度,测定PCR产物灰度值。结果:三种方法都可以提取出基因组DNA,测定DNA浓度分别为:(35.56±15.27)ng/μL,(45.13±16.54)ng/μL,(57.93±14.5)ng/μL,组间存在统计学差异(P<0.01),A260/A280值分别为:1.46±0.19,1.49±0.16,1.519±0.23,三组间比较差异无统计学意义(P>0.05);三种方法提取的基因组DNA都能通过PCR扩增出目的条带,PCR产物电泳灰度值结果分别为:75.421±3.435,149.32±6.875和229.52±19.55,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:三种不同方法都能提取出冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,但Invitrigen purelinkTM试剂盒法效果最好。     

Effective chemotherapy induce apoptosis in vivo in patients with leukemia

Ｓｏｍｅｓｔｕｄｉｅｓｉｎｖｉｔｒｏｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｓｔｈｅｍｏｄｅｏｆｃｅｌｌｄｅａｔｈｉｎｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｓ ,1 3 　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｄｒｕｇｓｋｉｌｌｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ 4 ,5　Ｂｌｏｃｋｉｎｇｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｓｉｇｎａｌｉｎｇｃｏｕｌｄｂｅａｎｏｔｈｅｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｍｕｌｔｉ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ 6　Ｈｏｗｅｖｅｒｌｉｔｔｌｅｉｓｋｎｏｗｎａｂｏｕｔａｐｏｐｔｏｓ…     

光气对小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用

OBJECTIVE: To study apoptosis of pulmonary epithelial cells and endothelial cells in mice with pulmonary edema induced by phosgene exposure. METHODS: Thirty-two mice were divided into normal group and phosgene group with 16 mice in each group. The mice in phosgene group were exposed to phosgene (11.9 mg/L) for 5 min and those in the control group to air. Four hours after exposure, alveolar type II cells were isolated and cultured to observe their apoptosis by electron microscope and flow cytometry. The lung tissues were also taken for DNA gel electrophoresis and TUNEL assay. RESULTS: Apoptotic bodies were observed in alveolar type II cells under electron microscope in phosgene group, which had higher cell apoptosis rate than the control group [(40.26+/-7.74)% vs (1.58+/-1.01)%, P<0.001] as determined by flow cytometry. Ladder-like DNA fragmentation pattern was observed in DNA gel electrophoresis in phosgene group with apoptosis of the pulmonary epithelial and endothelial cells observed by TUNEL. CONCLUSIONS: Phosgene can induce pulmonary epithelial and endothelial cell apoptosis in mice, suggesting that the mechanism of phosgene-induced pulmonary edema involves apoptosis of the lung cells.     

体外瞬时转染野生型PTEN过表达对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：研究野生型FTEN基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法：应用携带野生型FTEN的真核表达载体pEGFP-C1-FTEN，以脂质体介导的方法体外瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞，利用流式细胞术检测抗凋亡蛋白bcl-2的表达，通过相差显微镜、细胞生长曲线、MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法，观察FTEN基因过表达对MCF-7细胞生物学特性的影响。结果：荧光显微镜观察、免疫细胞化学和RT-PCR检测证实，转柒后MCF-7细胞中PTEN呈高水平表达；相差显微镜观察到MCF-7／FTEN细胞出现典型的凋亡形态学改变；细胞生长曲线低平；流式细胞检测显示，G-期细胞比例比空载体组增加14.79％，并出现凋亡峰；DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带；同时还检测到转染PTEN后细胞bcl-2表达下降。结论：外源性FTEN基因过表达可显著抑制MCF-7细胞的周期进程并诱导细胞凋亡。     

Study on Taxol in Inhibiting Human Leukemia Cell Proliferation andInducing Apoptosis

Objective: To explore the effects of Taxol in inhibiting human leukemia k562 cell proliferation and inducing apoptosis in vitro. Methods: Human leukemia K562 cells were treated with Taxol of different concentrations for 12-72 hrs. Cell proliferation was evaluated by MTT assay and morphological changes of apoptosis were examined by microscopy. Cell apoptosis was determined by flow cytometry (FCM) and DNA gel electrophoresis. Results: Growth of K562 cells was inhibited by Taxol with an IC50 value of 0. 84μg/ml. Typical nuclear condensation and apoptosis bodies were observed as early as 24 hrs after a 0.5μg/ml Taxol treatment; Apoptotic rate of the Taxol-treated K562 cells increased from 3.7% to 24.0% in 24 hrs. No DNA ladder was observed by DNA gel electrophoresis. Conclusion: Taxol could inhibit K562 cell growth and induce apoptosis in vitro.     

茶多酚诱导体外培养膀胱癌EJ细胞的凋亡

目的：研究茶多酚对体外培养的膀胱癌EJ细胞的抑制和诱导凋亡的作用。方法：用琼脂糖凝胶电泳,光学显微镜的方法,观察EJ细胞经过不同剂量茶多酚处理后在生理,生化和细胞 态学等指标的改变来检测细胞凋亡,结果：琼脂糖终胶电泳呈典型的“梯状电泳带”,光学显微镜镜观察见EJ细胞在形态学上凋亡细胞的形态学改变。结论：茶多酚对EJ细胞有明显的诱导细胞凋亡作用。     

缺氧的血清剥夺诱导的PC12细胞DNA损伤与修复

探讨PC12细胞在缺氧(37℃,5%O2,95%N2)、血清剥夺条件下DNA损伤与修复、凋亡、坏死或生存的变化规律.应用单细胞凝胶电泳技术、流式细胞学技术检测在不同时间点,缺氧、无血清培养等诱导下对PC12细胞单链DNA损伤与修复、凋亡的影响.结果发现在PC12细胞DNA损伤值均在0.5h时达第一个峰值,随后下降.3h后DNA损伤数值再次逐渐增加并达到最高值.细胞凋亡峰值略滞后于DNA损伤峰值,并于DNA损伤程度基本相平行.提示PC12细胞在缺氧和血清剥夺条件下存在DNA损伤与修复的动态变化过程,DNA损伤后可能直接诱导细胞凋亡,DNA损伤程度在早期与细胞凋亡程度相一致.     

Effect of tanshinone IIA on the growth behavior of human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro and its mechanism]

OBJECTIVE: To investigate the effect of tanshinone IIA on the growth behavior of human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro and explore the mechanism. METHODS: Human hepatoma cell line BEL-7402 was exposed to tanshinoneIIA at different concentrations for 72 h, and the suppression of the cell growth was observed under inverted-phase contrast microscope. Apoptosis-related alterations in the cell morphology and biochemistry were examined under fluorescence microscope and transmission electron microscope (TEM) and by DNA agarose gel electrophoresis, and the apoptotic rate was quantified by flow cytometry (FCM). RESULTS: After treatment with 0-10 microg/ml tanshinone IIA for 72 h, the proliferation of BEL-7402 cells was significantly suppressed, and cell apoptosis occurred characterized by cell shrinkage, nuclear chromatin condensation and fragmentation, formation of membrane blebs and apoptotic bodies as observed under fluorescence microscope and TEM. DNA ladder was presented in DNA electrophoresis. FCM analysis yielded the cell apoptotic rates of (20.78+/-2.17) %, (24.64+/-2.07) %, (31.47+/-3.86) %, (43.65+/-4.04) % and (52.36+/-3.75) % at tanshinone IIA concentrations of 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 and 10.0 microg/ml respectively, all significantly higher than those of the control group [(2.37+/-0.29)%]. CONCLUSION: Tanshinone IIA can inhibit the growth of human hepatoma BEL-7402 cells possibly through the mechanism of apoptosis induction.     

光气对小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用

目的 研究光气对肺水肿小鼠肺上皮细胞和内皮细胞凋亡的诱导作用。方法 将32只BALB/C小鼠随机分成正常对照组(16只)和染毒组(16只)2组。正常对照组小鼠以空气为对照,染毒组小鼠给予11.9mg/L剂量的光气,时间为5min。染毒后4h,取小鼠分离、培养肺Ⅱ型细胞用于电镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡,取小鼠肺脏进行DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL染色检测肺组织凋亡。结果 光气染毒肺水肿小鼠电镜下原代肺Ⅱ型细胞出现凋亡小体;流式细胞术显示肺Ⅱ型细胞凋亡率(40.26±7.74)显著高于正常对照组(1.58±1.01,P<0.001);DNA琼脂糖凝胶电泳出现"DNA梯状改变";TUNEL染色检测到肺上皮细胞和血管内皮细胞凋亡。结论 光气染毒可造成肺水肿小鼠肺脏细胞发生凋亡,提示光气造成小鼠肺水肿的发生机制存在细胞凋亡的诱导作用。     

缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响

目的研究缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响。方法体外培养人小细胞肺癌细胞H446,置于缺氧(3%O2)条件下培养,分别于0、12、24、48、72 h后提取细胞基因组DNA,用甲基化敏感性随机引物PCR(MS-AP-PCR)方法检测基因组DNA甲基化状态。结果在缺氧状态下,H446细胞经酶解后的扩增谱带明显增多,且荧光强度较强,以24 h后明显,表明H446细胞基因组DNA甲基化水平在缺氧24 h后即发生明显升高,主要表现为多位点的异常甲基化。结论缺氧可能是造成肿瘤细胞内甲基化失衡的重要原因之一。