平阳霉素对血管内皮细胞的生长抑制作用和细胞周期的影响

目的观察平阳霉素(PYM)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法检测不同浓度PYM(10-2~103 μg/ml)作用不同时间(24、48、72 h)后对ECV304细胞的生长抑制率。利用流式细胞仪检测一定浓度PYM刺激下细胞周期分布。结果10 μg/ml浓度PYM作用24、48、72 h后的细胞生长抑制率分别为44.7%、59.7%、74.4%,药物抑制效应表现为剂量依赖性和时间依赖性。药物作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为32.94、2.56、0.75 μg/ml。1 μg/ml浓度PYM作用ECV304细胞24 h,实验组S期细胞比例较对照组明显下降,G2-M期细胞比例明显增加(P<0.01),细胞被阻滞在G2-M期。结论PYM对ECV304细胞的增殖具有较强抑制作用,其机制与细胞周期阻滞作用有关。     

加味小陷胸汤对氧化低密度脂蛋白致血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨加味小陷胸汤拮抗氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)对血管内皮细胞(ECV304)增殖和凋亡的影响。方法：采用10μg／ml的OX-LDL刺激培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304，诱导细胞凋亡；观察不同浓度小陷胸汤对抗细胞凋亡的作用。结果：10μg／ml的OX-LDL在作用一定时间后可明显抑制内皮细胞增殖并诱导其凋亡，加味小陷胸汤含药血清对该细胞毒性有明显拮抗作用，并显示了效果与药物浓度有关。结论：加味小陷胸汤可通过提高内皮细胞生长活性并抑制其凋亡、保护血管内皮细胞。     

银杏黄酮苷元对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响

目的：体外观察银杏黄酮苷元（GA）对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖作用的影响,初步探讨其对内皮细胞的保护作用。方法：分别设对照组、空白组和实验组;实验组设GA6.25、12.5、25、50、100、500 mg/L共6个浓度孵育ECV304 48 h,25 mg/LGA与ECV304共同孵育6、12、24及48 h共4个时间点,采用MTT比色法观察GA对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响。结果：6.25～50 mg/L GA与ECV304共同培养48 h,细胞形态基本正常,细胞增殖率均大于100%,与对照组（未加药）比较差异显著（P〈0.05）,且各组细胞增殖率随药物浓度增加而增加,P〈0.05;GA25 mg/L和脐静脉内皮细胞ECV304共培养6～24 h,各组细胞增殖率随作用时间延长而增加,各组间比较差异显著（P〈0.05）。结论：银杏黄酮苷元促进人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的作用具有时间和浓度效应,提示GA具有保护血管内皮细胞的作用。     

地塞米松诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：观察地塞米松对人脐带静脉血管内皮细胞( ECV304)增殖的影响。方法：采用细胞凋亡的荧光检测法（Heochst 33342）检测地塞米松对脐静脉血管内皮细胞（ECV304）的形态学改变, MTT 法观察地塞米松对ECV304增殖的抑制作用,流式细胞仪术检测地塞米松引起的ECV304凋亡率改变。结果：较高剂量（100umol/L）地塞米松对脐静脉血管内皮细胞增殖起抑制作用,并诱导其凋亡。结论：地塞米松具有比较明显的抑制血管内皮细胞增殖的作用。地塞米松抗血管生成的机制可能与其抑制血管内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。     

姜黄素抑制ECV304细胞增殖及对基质金属蛋白酶2表达的影响

目的：探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞（ECV304）的作用以及对ECV304表达的基质金属蛋白酶2（MMP-2）的影响。方法：采用MTT法，台盼蓝染色法测定姜黄素对ECV304的量效关系和时效关系，Giemsa染色观察姜黄素对ECV304的抑制作用；通过RT-PCR检测姜黄素作用ECV304后MMP-2mRNA表达，明胶酶谱法检测MMP-2的活性，免疫组化检测细胞MMP-2表达。结果：姜黄素对ECV304的押制作用呈浓度依赖性和时间依赖性，Giemsa染色显示浓度为8μg/mL和10μg／mL的姜黄素可诱导ECV304凋亡，凋亡率分别是21．6％和34．7％；在10μg／mL姜黄素作用24h下，MMP-2的mRNA显著减少，其分解明胶的活性也显著降低，免疫组化显示与阴性对照组相比内皮细胞MMP-2表达减少。结论：姜黄素能够抑制血管内皮细胞的生长、降低血管内皮细胞MMP-2的表达。     

小檗碱衍生物B-119抑制肿瘤及血管内皮细胞增殖的作用

目的探讨小檗碱衍生物B-119对肿瘤细胞的增殖抑制作用及对血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成的影响。方法MTT法检测B-119对瘤细胞株MDA-MB-231、B16、K562、LLC、HT29、SMMC-7721、Colo205、HL60和血管内皮细胞ECV304的增殖抑制作用;划痕法测定B-119对血管内皮细胞ECV304迁移的影响;观察B-119对血管内皮细胞ECV304小管形成的影响。结果 B-119对8株肿瘤细胞具有不同程度的抑制作用,IC50值为0.76～26.83mg/L;B-119对ECV304的增殖抑制作用表现为时间、浓度依赖性,24,48,72h的IC50分别为59.22,12.08,3.31mg/L;药物干预组ECV304细胞迁移数减少,且随B-119浓度的增加,迁移抑制作用越强,B-119浓度为1.25,2.5,5mg/L干预24h后,细胞迁移数渐次减少,抑制率分别为49.29%,59.71%和71.94%(P<0.01);B-119对ECV304小管形成有明显的抑制作用,浓度为10,20,30mg/L时的小管形成抑制率分别为35.71%,57.14%和67.86%(P<0.01)。结论 B-119可抑制肿瘤细胞的增殖,并抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成。     

硫酸多糖916对细胞因子和H2O诱导ECV304细胞产生一氧化氮的影响

目的：研究硫酸多糖916（PS916）对TNFα、IL-1β和H2O2诱导ECV304细胞产生一氧化氮（NO）的影响。方法：用Griess试剂测定ECV304细胞产生的NO，用MTT法测定细胞的增殖，用荧光法测定NO合酶的活性。结果：40ng/mlTNFα和40ng/mlIL-1β使ECV304细胞NO产生下降，0.1mmol/L H2O2使NO的产生增加。PS916剂量依赖性增加TNFα、IL-β诱导的ECV304细胞NO的产生，降低H2O2诱导ECV304细胞产生的NO。TNFa和H2O2抑制ECV304细胞的增殖，而IL-1β对ECV304细胞的增殖没有明显影响。PS916剂量依赖性的抑制TNFα和H2O2的作用，增加存活细胞数。在体外，PS916对细胞的NO合酶无明显的影响。结论：PS916在体外实验中对细胞因子和H2O2引起的ECV304细胞损伤有拮抗作用，对细胞表现出明显的保护作用。     

内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304增殖和凋亡的影响

目的观察内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304的作用,为进一步探讨其抗肿瘤作用提供依据。方法磺酰罗丹明B(SRB)方法评估内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响。结果 C2010在204、0μg/mL给药48 h后对ECV304细胞增殖有剂量依赖的显著抑制作用,抑制率分别为12.67%、43.32%,并能使ECV304细胞凋亡数量增加。结论 C2010对内皮细胞ECV304有抑制增殖作用和诱导凋亡作用。     

重组人内皮抑素诱导人脐带静脉血管内皮细胞凋亡

目的观察人内皮抑素重组蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞增殖的影响。方法采用细胞凋亡的荧光检测法检测对内皮细胞凋亡的影响。MTT法观察不同浓度的重组人内皮抑素对人脐带静脉血管内皮细胞（ECV304）增殖的抑制作用。结果重组人内皮抑素具有明显的抑制内皮细胞增殖的作用，ED50=550ng／ml，随重组蛋白浓度的增加抑制作用更为明显。结论重组人内皮抑素对细胞增殖的抑制与其浓度呈正相关，存在剂量效应关系；内皮抑素抗血管生成的机制与其抑制内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。     

他克莫思对rhHGF刺激ECV304细胞株表达MMP-9的抑制作用

目的:探讨重组人类肝细胞增殖因子(rhHGF)刺激ECV304细胞株表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的作用及他克莫思(Tacrolimus,FK506)的抑制作用.方法:绘制正常ECV304细胞株生长曲线,明确最适生长浓度及对数生长期;明确rhHGF及FK506的作用浓度;流式细胞仪(FCM)检测ECV304细胞株的MMP-9水平.结果:①ECV304细胞的最适生长浓度为1.0E 4/ml,对数生长期为3～5 d;rhHGF的作用浓度为8 ng/ml,IC50为8.27 ng/ml;FK506的作用浓度为50 ng/ml,IC50为51.63 ng/ml.②对照组MMP-9的表达量为39.74%;培养基中加入rhHGF 8 ng/ml后,细胞存活率为1.388169±0.102033(P<0.01),MMP-9的表达量为40.32%;培养基中加入FK506 50 ng/ml后,细胞存活率为0.398764±0.092476(P<0.01),MMP-9的表达量为14.61%;培养基中加入FK506 50 ng/ml 15 min后加入rhHGF 8 ng/ml,细胞存活率为0.767203±0.02639(P<0.01),MMP-9的表达量为35.08%.结论:rhHGF可刺激ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量增加;FK506可抑制ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量降低;FK506可拮抗rhHGF所引起的ECV304细胞增殖,从而使MMP-9的表达量降低.     

他克莫思对rhHGF刺激ECV304细胞株表达MMP-的抑制作用

目的探讨重组人类肝细胞增殖因子(rhHGF)刺激ECV304细胞株表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的作用及他克莫思(Tacrolimus,FK506)的抑制作用.方法绘制正常ECV304细胞株生长曲线,明确最适生长浓度及对数生长期;明确rhHGF及FK506的作用浓度;流式细胞仪(FCM)检测ECV304细胞株的MMP-9水平.结果①ECV304细胞的最适生长浓度为1.0E+4/ml,对数生长期为3～5 d;rhHGF的作用浓度为8 ng/ml,IC50为8.27 ng/ml;FK506的作用浓度为50 ng/ml,IC50为51.63 ng/ml.②对照组MMP-9的表达量为39.74%;培养基中加入rhHGF 8 ng/ml后,细胞存活率为1.388169±0.102033(P<0.01),MMP-9的表达量为40.32%;培养基中加入FK506 50 ng/ml后,细胞存活率为0.398764±0.092476(P<0.01),MMP-9的表达量为14.61%;培养基中加入FK506 50 ng/ml 15 min后加入rhHGF 8 ng/ml,细胞存活率为0.767203±0.02639(P<0.01),MMP-9的表达量为35.08%.结论rhHGF可刺激ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量增加;FK506可抑制ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量降低;FK506可拮抗rhHGF所引起的ECV304细胞增殖,从而使MMP-9的表达量降低.     

Effect of polysaccharide sulfate 916 on the production of nitric oxide in ECV3 04 cells induced by cytokines and H2O2

Objective To investigate the effect of polysaccharide sulfate 916 (PS916) on the productio n of nitric oxide (NO) in ECV304 cells induced by tumor necrosis factor-α (TNF α), interleukin-1β (IL-1β) and H(2)O(2) in vitro. Methods Production of NO in ECV304 cells was measured by the Griess method and the proli feration of cells was tested by the MTT method. The activity of NO synthase was detected spectrophotometrically.Results Production of NO in ECV304 cells decreased after treatment with 40 ng/ml IL-1 β and 40 ng/ml TNFα, but increased in the presence of H(2)O(2) 0.1 mmol/L . PS916 significantly enhanced NO production in ECV304 cells in a dose-depende nt manner in the TNFα and IL-1β treated groups and decreased it in the H2O 2 treated group. Proliferation of ECV304 cells was inhibited by TNFα and H 2O2 and no effect was found in the IL-1β treated group. PS916 increased the proliferation of cells treated with TNFα and H(2)O(2) dose-dependently. In vitro, PS916 has no effect on the activity of NO synthase. Conclusion PS916 has a protective effect on ECV304 cells exposed to IL-1β, TNFα and H2 O2.     

Effect of pingyangmycin on the growth and cell cycle of human vascular endothelial cells]

OBJECTIVE: To study the effect of pingyangmycin (PYM, bleomycin A5) on the proliferation and cell cycle of the cultured ECV304 cells, a human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) line. METHODS: The growth inhibition of PYM on ECV304 cells was measured by MTT assay and the changes in the cell cycle by flow cytometry. RESULTS: After 10 microg/ml PYM treatment of the cells for 24, 48, and 72 h, the inhibition rates were 44.7%, 59.7%, and 74.4% respectively, showing a dose- and time-dependent inhibitory effect, with the 50% inhibitory concentration (IC50) of PYM corresponding to treatment durations of 24, 48 and 72 h being 32.94, 2.56 and 0.75 microg/ml respectively. Flow cytometry showed that ECV304 cell cycle was arrested at G2-M phase after 24-hour treatment with 1 microg/ml PYM, with significant reduction in the cell ratio of S phase and increase of G2-M phase (P<0.01) CONCLUSION: PYM can effectively inhibit the proliferation of ECV304 cells, the mechanism of which might involve the blocking of cell cycle.     

Effects of Taohong Siwu Decoction Ⅱ in the Chick Chorioallantoic Membrane （CAM） Assay and on B16 Melanoma in Mice and Endothelial Cells ECV304 Proliferation

To investigate the anti-angiogenesis action of Taohong Siwu Decoction Ⅱ （THSWD Ⅱ）. Methods： The chick chorioallantoic membrane （CAM） assay was adopted to study the anti-angiogenesis action of THSWD Ⅱ; the MTT test was used to investigate its effect on proliferation of the human umbilical vein endothelial cells ECV304; and the immunohistochemical method was used to observe the effect of THSWD Ⅱ on the expression of kinase insert domain containing receptor/fetal liver kinase 1 （KDR/Flk-1） and the microvessel density （MVD） of B 16 melanoma in mice. Results： After treatment with THSWD Ⅱ, the blood vessel index of CAM and the absorbency of ECV304 in the THSWD Ⅱ 1mg/ml group and the 2mg/ml group decreased significantly （P〈0.01）; the weight, the expression of KDR/Flk-1 and the MVD of B16 melanoma in mice reduced significantly in the THSWD Ⅱ 5g/kg group, the 10g/kg group and the TSHSWD10g/kg plus cyclophosphamide group （P〈0.01）. Conclusion： THSWD Ⅱ has the actions of anti-angiogenesis, and inhibiting the proliferation of ECV304 cells and the growth of B16 melanoma. The clinical anti-tumour mechanism is considered to be related possibly to its anti-angiogenesis action by inhibiting the expression of KDR/FIK- 1.     

血管内皮生长因子对血管内皮细胞增殖及DNA合成的影响

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)诱导血管增生性疾病中血管生成的作用机制。方法　取体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞 ,用MTT法和3H -TdR掺入法观察VEGF对ECV 30 4细胞增殖及DNA合成的影响。结果　VEGF对ECV 30 4细胞增殖及DNA合成均有明显刺激作用 ,且均呈剂量依赖性关系。结论　VEGF可能通过刺激血管内皮细胞增殖及DNA合成 ,促进血管生成。在血管增生性疾病中可能起重要促进作用。     

重组腺相关病毒介导内皮抑素的表达及体外活性研究

OBJECTIVE: To construct the recombinant adeno-associated viral vector containing human endostatin gene (rAAV-hEndo) and observe the biological activity of the expressed human endostatin in vitro. METHODS: rAAV-hEndo was prepared using a helper virus-free packaging system. The rAAV viral genome titer was quantified by Taqman real-time PCR, and the endostatin expressed in human umbilical vein endothelial cell line ECV304 was detected by immunofluorescence staining. The effects of endostatin on ECV340 cells were evaluated by MTT cell proliferation assay, cell cycle analysis and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling (TUNEL) technique. RESULTS: The viral titer of rAAV-hEndo prepared was 2 x 10(12) vg/ml and the vector had an infection efficiency of 98%. Immunofluorescence staining showed that the human endostatin protein was expressed mainly in the cytoplasm of ECV304 cells, and the proliferation of the cells was obviously inhibited by the supernatant of rAAV-hEndo, with a inhibition rate of 67.3% 72 h after the addition of the supernatant. ECV304 cells infected with rAAV-hEndo were obviously arrested in G(1) phase, and the G(1)-phase cell percentage of treatment group were significantly higher than that of control group [(72.5+/-4.0)% vs (52.1+/-2.1)%, P<0.01]. ECV304 cells infected with rAAV-hEndo demonstrated markedly enhanced apoptosis, with a significantly greater apoptotic index than that of the control cells [(32.6+/-3.2)% vs (4.2+/-1.9)%, P<0.01]. CONCLUSION: rAAV-hEndo can effectively mediate the expression of biologically active human endostatin, which may facilitate further study of antiangiogenic gene therapy with endostatin for cancers.     

3-脱氧葡萄糖醛酮诱导新血管生成的实验研究

目的观察3-脱氧葡萄糖醛酮（3-DG）对新血管生长的影响。方法应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）和内皮细胞体外培养的方法研究3-DG对新血管生长的影响。CAM血管生长采用单位面积血管百分比法评价;细胞增殖采用MTT法评价。结果0.1、1μg3-DG和0.1μgAGEs组均可促进CAM新生血管生成,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。与内皮细胞孵育24h后,3-DG50、100、150、200和250mg/L浓度组均明显促进内皮细胞生长（P〈0.05）,而300、400mg/L浓度组则无促进作用（P〉0.05）;与内皮细胞孵育48h后,50、100、150和200mg/L浓度组均有促进内皮细胞生长的趋势,但差异均无统计学意义（P〉0.05）,250mg/L无作用呈下降趋势,而300和400mg/L浓度组则明显抑制内皮细胞生长（P〈0.05）。形态学观察,3-DG300mg/L组与空白对照组比较,出现细胞核固缩。结论3-DG可以诱导新血管生长。     

ox-LDL对PLGF作用内皮细胞释放NO和内皮细胞黏附分子的影响

目的：探讨氧化型低密度脂蛋白对胎盘生长因子-1作用人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮和内皮细胞黏附分子的影响。方法：在ox-LDL（25μg／mL）条件下,应用不同浓度的PLGF-1（20、40、80ng／mL）孵育ECV-304,对照组为内皮细胞未受损时,相同浓度梯度的PLGF-1孵育ECV-304,3h、6h、12h、24h后应用ELISA法检测内皮细胞黏附分子-可溶性细胞间黏附因子-1、可溶性血管内皮细胞黏附因子-1的表达,硝酸盐还原酶法检测NO的表达。结果：正常生理条件下,PLGF诱导NO和内皮细胞黏附分子的表达,且呈时间（当t=6h达到最理想的分泌量）、浓度依赖关系。在氧化损伤条件下,PLGF诱导NO的表达下降,而内皮细胞黏附分子的表达则增高,以VCAM-1表达增多更为明显。结论：氧化损伤是动脉粥样硬化的独立危险因素,而PLGF诱导内皮的活化,上调内皮黏附分子的表达,可进一步促使疾病的恶化。故认为抑制PLGF的生物活性可达到控制炎症反应的作用。     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子体外抗血管内皮细胞增殖的活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法：MTT法检测重组人可溶性VEGI对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果：在体外,重组人可溶性BEGI可强烈抑制人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞（MPCEC）及新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）的增殖,不能报制黑色素瘤细胞B－16和小鼠成纤维细胞L－929的增殖。结论：重组人可溶性VEGI能作用于不同来源的血管内皮细胞,而对肿瘤细胞增殖无抑制作用,提示其可能通过抗肿瘤新生血管生成而发挥抗肿瘤作用。