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1.
作者报道反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),双单克隆抗体(McAb)夹心法酶联免疫吸附试验(SandwichELISA)和间接免疫荧光技术(IFA)三种方法对汉坦病毒76~118株细胞培养物中病毒RNA及抗原的检测情况,并比较了三种方法的敏感性.结果表明:RT-PCR敏感性最高,种毒后24h内即可检出病毒RNA;其次为夹心法ELISA,种毒后48h可检出冻融细胞上清内的病毒抗原;IFA检出感染细胞内病毒抗原的最短时间为72h.作者对设计引物与提高RT-PCR的敏感性进行了讨论。 相似文献
2.
将PCR扩增的HTV76-118RNA小片段的cDNA克隆插入到载体pDS56/RBSⅡ-(O)-6His中,通过IPTG诱导表达以及镍螯合层析纯化重组NP,经过SDS-PAGE、免疫转印和ELISA方法分析其蛋白特性,证实该重组NP与毒粒NP相同,均为49.6ku,能与肾综合征出血热(HFRS)患者血清产生特异性反应。以此重组NP作为抗原制备抗NP单克隆抗体,获得两株持续稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用抗NPMcAb建立检测IgM抗体的ELISA捕获法。证实纯化重组NP作为抗原,避免了组织培养病毒的感染性和非特异性以及难以标准化的缺点。所建立的ELISA捕获法检测HFRS患者血清中IgM抗体的方法特异性强、敏感性高,可作为HFRS的早期诊断试剂 相似文献
3.
黄春 《福建医科大学学报》1999,(4)
目的 拟建立逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量法,探讨纤维蛋白原(Fg)、极低密度脂蛋白(VLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、I型纤溶酶原灭活剂(PAI-l)m RNA 表达的影响。 方法 (l)用异硫氰酸胍一步法(TRIzol试剂)提取细胞总RNA,用单管RT-PCR 法、三对引物分别逆转录、扩增t-PA,PAI-1 及内参照三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的特异性片段,扩增产物经2.0% 琼脂糖凝胶电泳分离后,用凝胶图像分析仪照相、计算各条带分子量并扫描其光密度值(integrated density value,IDV),t-PA、PAI-1 m RNA的IDV 用GAPDH m RNA 的IDV 进行校正,其相对表达量用各实验组与对照组比较的倍数表示。(2)以ELISA 法测定内皮细胞(EC)培养上清液(CM)中t-PA,PAI-1总抗原的含量。(3)EC与不同浓度Fg(2,20,200,2000 μg/m l)或VLDL(5,10,20,30,40 μg/m l)共同孵育12 h 或24 h 后,观察ECt-PA 和PAI-1 m RNA 水平及CM 中抗原含量的变化。(4 相似文献
4.
目的:探讨RT-PCR在病毒性心肌炎中的诊断价值。方法:选用柯萨奇B组病毒(CVB)保守区5′-非编码区的组特异性引物,对42例临床拟诊为病毒性心肌炎的患者血清行RT-PCR,以检测CVB-RNA,同时采用间接ELISA检测血清中CVB-IgM。结果:心肌炎患者血清中CVB-RNA的检出率为667%(28/42),而IgM的检出率为524%(22/42)。结论:RT-PCR和ELISA都是特异、敏感的诊断方法,并且RT-PCR比ELISA敏感(P<005) 相似文献
5.
抗中性粒细胞胞浆抗体3种检测方法的比较 总被引:11,自引:0,他引:11
寻找敏感性、特异性较高又适宜我国目前推广、普及的抗性粒细胞浆抗体(antineutrophilcytoplasmicantibodies,ANCA)的检测方法。方法对598份血清应用间接免疫荧光(indirectimmunofluorescence,IIF)、总抗原ELISA、抗原特异性ELISA(MPO-和和PR3-ELISA)等3种方法进行了ANCA检测。结果:IIF法最为敏感,但IIFIF 相似文献
6.
从感染猴免疫缺陷病毒(SIV)的恒河猴血浆和培养细胞株中分别纯化病毒RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增SIVgag基因特异的DNA片段。将RT-PCR产物用地高辛标记,检测灵敏度比凝胶电泳和斑点杂交提高100倍。用已知拷贝数的RNA作为定量标准,可估计待测样本中SIVRNA的拷贝数。 相似文献
7.
轮状病毒RT—PCR快速诊断方法研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用自制逆转录套式-聚合酶链反应(RT-PCR)检测婴幼儿病毒性肠炎粪便中的轮状病毒,结果阳性率为56.5%(61/108),显著高于采用PAGE,ELISA,LA检测的阳性率(P〈0.01),而检测时间短,敏感性高,采用磷灰石抽提病毒RNA的方法也优于其它三法试验盒的效果,国内尚未报道。 相似文献
8.
本文探讨新生和脐血单个核细胞(CBMC)白细胞介素12(IL-12)和γ-干扰素(IFN-γ)基因表达水平;观察重组IL-12地CBMCIFNγ基因表达的影响。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT_PCR)测定8例新生儿CBMCIL-12p49RNA和IFN-γmRNA表达,用ELISA法测新一儿CBMC细胞培养上清液中IFN-γ浓度。结果显示:新生儿CBMC一外受刺激后表达的I国2p40mRNA、I 相似文献
9.
目的:探讨灵芝浸膏(Ganoderma lucidum Extract,GLE)的抗作用及其机制。方法;采用血清药理学与体内外抑癌实验相结合方法。MT衍测肿瘤细胞增殖程度,流式细胞仪测细胞凋亡。同时采用生物法测TNF-α,ELISA测定IFN-γ,并用RT-PCR方法检测mRNA表达。结果:(1)GLE(5、10、20g.kg^-1)灌胃显抑制小鼠移植发现从瘤S180的生长;(2)GLE直接加入 相似文献
10.
应用早孕因子单克隆抗体(EDF-McAb),建立早孕因子新的免疫学检测方法,酶联免疫吸附试验(ELISA)。本文初步确立了用ELISA检测EPF抗原的实验条件,并与Ea一活性玫瑰花结抑制试验(Ea-RIT)进行了比较。结果表明,因ELISA检测EPF抗原具有特异性好、敏感性高,判断结果客观的特点。 相似文献