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相似文献
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1.
余晓玲  米力  陈志南 《医学争鸣》2000,21(1):S001-S003
制备符合人用标准的肝癌单抗HAb18F(ab’)2片段,方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体,胃蛋白酶与抗体在PH3.50.1mol.L^-1柠檬酸条件下,经不同反应时间,收集样品,上FPLC(快速蛋白液相色谱)Phenyl-SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果按上述条件消化2h,95%c h r IgG裂解为F(ab’)2片段,经Phenyl-SepharoseHP疏水柱纯化后F  相似文献   

2.
单克隆抗体F(ab‘)2片段2种纯化方法的建立及比较   总被引:2,自引:1,他引:1  
刘成刚  陈志南 《医学争鸣》1998,19(4):388-390
目的:建立纯化(mAb)F(ab‘)2片段的有效方法。方法:在pH5.5环境下,用DTT激活木瓜酶,在没有DTT存在下消化抗人肝癌mAb HAb18 IgG1,37℃,反应8h,然后分别用Sephacryl S-200(1cm×65cm)凝胶过滤柱和DEAE-Sepharose-FF(2cm×18cm)阴离子交换柱纯化。结果:经SDS-PAGE(100g/L)电泳测定,2种方法纯化的F(ab’)2  相似文献   

3.
余晓玲  米力 《医学争鸣》2000,21(12):1533-1536
目的 制备府合临床应用质量标准的鼠源性mAbF(ab’)2片段。方法 采用胃蛋白酶消化小鼠腹水抗体,疏水作用钯谱法纯化F(ab’)2片段的新工艺,替代原有的木瓜蛋白酶消化IgG,阴离子交换色谱法纯化的旧工艺。结果 新工艺所制备的F(ab’)2片段经SDS-PAGE检测纯度达98%以上,ABC免疫组化法测定免疫法性为1:8000,回收率大于50%,核酸含量及热原均合格,整个工艺流程可在48h内完成,  相似文献   

4.
目的研究双特异性单克隆抗体介导的单核-巨噬细胞抗肝癌作用。方法采用化学交联法,用异型化学交联剂N-琥珀酰亚氨基-3-(2-二硫吡啶)丙酸酯(SPDP),将具有高亲和性的抗肝癌单抗HAb18F(ab′)2与抗单核-巨噬细胞的单抗MAb7F(ab′)2联结成双特性单抗HAb18F(ab′)2-MAb7F(ab′)2,经FPLCSephacry1S-200纯化。用间接免疫荧光法鉴定其特性。结果HAb18F(ab′)2及HAb18F(ab′)2-MAb7F(ab′)2对肝癌细胞间接免疫荧光染色阳性,MAb7F(ab′)2及HAb18F(ab′)2-MAb7F(ab′)2对单个核细胞染色为阳性。而这些抗体对肺腺癌细胞均呈阴性;单纯HAb18F(ab′)2无导向单核-巨噬细胞杀伤肝癌细胞作用,HAb18F(ab′)2-MAb7F(ab′)2及MAb7F(ab′)2均可介导单核-巨噬细胞对肝癌细胞起杀伤作用,并且前者强于后者。结论HAb18F(ab′)2-MAb7F(ab′)是一种具有双特异性的单克隆抗体,可以提高人单核-巨噬细胞杀伤肝癌细胞的作用。  相似文献   

5.
杨连君  王文学 《医学争鸣》1998,19(6):618-620
制备眼抗原葡萄球菌肠毒素与抗人肝细胞癌单克隆抗体(McAb)HAb18F(ab’)2段的结合物,并对其活行鉴定。方法:提取McAbHAb18并用木反蛋白酶切取其(ab’)-SEA结合物,  相似文献   

6.
目的:制备抗甲状腺素抗体Fab’片段,并达到符合酶标记的要求,以期可用于夹心酶联免疫方法(ELISA)测定血清中游离甲状腺素的浓度。方法:用硫酸钠DEAE纤维素层析法从兔抗T4的抗血清中提纯相应的IgG,用胃蛋白酶将IgG消化为F(ab’)2片段,后者再用巯基乙醇还原为Fab’。结果:用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定纯化的IgG、F(ab’)2、Fab’均为单一条带,分子量分别为15KD、97KD、49KD;纯化后得到的IgG、F(ab’)2、Fab’的回收率分别为62.2%、67.0%、71.2%;用放免法检测均具有免疫活性;Fab’每分子中的巯基数为1.06。结论:用本文方法制备的Fab’片段经鉴定,合乎酶标记和酶免工作的要求。  相似文献   

7.
王茜  王文亮 《医学争鸣》1996,17(2):94-96
观察双特异性单克隆抗体介导的人单核-巨噬细胞在裸鼠体内对肝癌生长的抑制作用。用化学交联法制备双特异性单克隆抗体HAb18-MAb7及HAb18F(ab)2-MAb7F(ab'_2,并将其与单核-巨噬细胞-同注入荷人肝癌裸鼠体内,观察肿瘤体积的变化。  相似文献   

8.
大鼠抗人肝癌单克隆抗体(McAb)3A5(IgG1)腹水经亲和层析柱纯化后,用木瓜蛋白酶消化得到Fab片段,经ELISA检测均具有良好的免疫活性。将^125I-Fab和^125I-3A5注入移植人肝癌裸鼠体内Fab片段分布在主要脏器的每克组织注射剂量百分比(ID%/g)的持续时间和数值均低于完整McAb,但肿瘤与非肿瘤组织(T/NT)的比值则高于完整McAb,说明Fab片段的分布对肿瘤组织具有较高  相似文献   

9.
^99mTc标记抗癌胚抗原单抗C50片段Fab‘及其生物分布研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:研究克服^99mTc示记抗癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)单抗体内生物半衰期长、血液廓清速度慢、晚时相放射性信号弱等缺点的方法,用直接标记法进行了^99mTc标记抗CEA抗体C50片断Fab’的研究。方法:经胃蛋白酶切得的C50片段F(ab’)2用适量的2-巯基乙醇还原,Sephadex G50柱分离获得纯度大于90%的Fab’片断。取0.6~1.0mg纯化的片段Fab’(体积〈1.0ml),加入0.4~0.8mg葡庚糖酸钠及新鲜配制的SnCl2溶液5~10μg,然后加入新鲜淋洗的Na^99mTcO4淋洗液,反应10~15min。用高压液相色谱监测放化纯度和抗体纯度。荷CL-187(结肠癌)裸鼠静脉注射^99mTc-Fab’,观察标记抗体片段在不同时相的体内分布。结果:  相似文献   

10.
抗哇巴因多克隆抗体F(ab)2片段的研制及鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体,制备了出F(ab)2片段,为改型抗体的研究提供依据。方法 免疫家兔制备出抗哇巴因多克隆抗体,并用胃蛋白酶分别在不同的酶解条件下消化抗体,继之用高效液相排阻色谱法(HPSEC)对其进行分析、纯化、采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测、鉴定其活性。结果 用胃蛋白酶2mg/100mg抗哇巴因多克隆抗体,消化18h,反应体系的pH3.0时,可获得F(ab)2片段。结论 用胃蛋白酶解抗哇巴因多克隆抗体是研制出有活性的F(ab)2片段的有效方法。  相似文献   

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