急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响

为探讨急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响，选择对于心肌有特异性损害作用的异丙基肾上腺素（ＩＳＰ），造成大鼠实验生心肌损害的动物模型，动态观察心肌损害时肌球蛋白磷酸化系统的变化规律。研究结果表明，低剂量ＩＳＰ导致心肌匀浆中肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性下降，但心肌组织病理切片基本正常；高剂量注射ＩＳＰ，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性显著下降，与正常对照组和低剂量组相比，差异十     

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯（ＣＨＰＯ）作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞遭受过氧化损伤，同时使用硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。结果表明，ＣＨＰＯ引发的自由基以及脂质过氧化反应，造成肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和ＡＴＰ酶活性显著下降，Ｓｅ、ＶＥ以及二者联合应用，可使心肌细胞抗自由基损伤的能力极大增强，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性都有不同程度的提高。提示：ＣＨＰＯ引发的自由基已造成了对心肌细胞肌球蛋白磷酸化系统的损害，Ｓｅ和ＶＥ的应用，对保护肌球蛋白分子的完整结构和其生化功能起着重要作用。     

脑中风病人血小板肌球蛋白轻链激酶和Ca~(2 ),Mg~(2 )-ATP酶活性变化的研究

目的探讨急性缺血性脑血管病血小板肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的变化及钙拮抗剂对Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的影响。方法用３２Ｐ同位素掺入法和比色法分别测定５８例脑中风病人，包括２２例短暂性脑缺血发作（ＴＩＡ）患者和３６例脑梗塞患者以及３５名健康对照者血小板ＭＬＣＫ和Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性。结果ＴＩＡ组和脑梗塞组ＭＬＣＫ活性与对照组相比均有明显增加（Ｐ＜０．０１），而Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性均低于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。在ＴＩＡ组和脑梗塞组之间，这两种酶活性无明显差异（Ｐ＞０．０５）。用钙拮抗剂ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ治疗后，ＴＩＡ组和脑梗塞组患者Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性均有部分恢复（Ｐ＜０．０５）。结论血小板ＭＬＣＫ和Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性与急性缺血性脑血管病的发生有密切关系，钙拮抗剂可部分改善血小板Ｃａ＋２，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性状态。     

大鼠严重烧伤早期心肌细胞组织化学研究

应用组织化学方法研究了大鼠严重烧伤早期心肌细胞内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及肌球蛋白，ＡＴＰ酶的变化，实验发现，大鼠烧伤后心肌细胞内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及肌球蛋白ＡＴＰ酶活性在烧伤后２４及４８ｈ明显降低，结果提示烧伤早期出现的心肌收缩功能的改变与心肌细胞内ＬＤＨ，ＳＤＨ及肌球蛋白ＡＴＰ酶活性的改变有重要关系。     

猪心肌球蛋白及其轻,重链亚基的纯化和鉴定

采用一种改进的方法，从１００ｇ猪心室肌中提取心肌肌球蛋白３７０ｍｇ，并进一步分离和纯化其亚基成分，分别得到肌球蛋白轻链２４ｍｇ和重链２１０ｍｇ，核酸含量＜１％，不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它杂蛋白；ＳＤＳＰＡＧＥ显示，猪心肌球蛋白重链为２００～２２０ＫＤ一条带，肌球蛋白轻链则为２７ｋｄ、２１．４ｋｄ、１９ｋｄ三条带；纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋激活ＡＴＰ酶活性为０．２４μｍｏｌＰｉ／（ｍｇ·ｍｉｎ），但其分离后的亚基则无此活性。     

大鼠严重烧伤早期心肌细胞组织化学研究

应用组织化学方法研究了大鼠严重烧伤早期心肌细胞内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及肌球蛋白，ＡＴＰ酶的变化。实验发现，大鼠烧伤后心肌细胞内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及肌球蛋白ＡＴＰ酶活性在烧伤后２４及４８ｈ明显降低，结果提示烧伤早期出现的心肌收缩功能的改变与心肌细胞内ＬＤＨ，ＳＤＨ及肌球蛋白ＡＴＰ酶活性的改变有重要关系。     

羟自由基对心肌肌球蛋白巯基和酶活性的影响

用大鼠心肌肌球蛋白与羟自由基（ＯＨ·）发生系统Ｈ２Ｏ２／ＦｅＳＯ４孵育，测定肌球蛋白巯基含量和Ｃａ２＋－激活的肌球蛋白ＡＴＰ酶活性，并观察组氨酸对这些指标变化的影响。结果发现：（１）ＯＨ·引起心肌肌球蛋白ＡＴＰ酶活性显著下降，同时酶蛋白巯基含量也相应减少，呈明显的剂量反应和时间依赖关系；酶活性与巯基含量之间呈密切正相关。（２）组氨酸能显著减轻ＯＨ·引起的肌球蛋白巯基含量减少，且对肌球蛋白ＡＴＰ酶的保护具有剂量依赖效应。研究表明：ＯＨ·可通过氧化酶蛋白巯基引起Ｃａ２＋－激活的肌球蛋白ＡＴＰ酶活性降低，这可能是缺血再灌注心肌收缩功能减弱的机理之一。组氨酸能阻断酶蛋白巯基被ＯＨ·氧化分解，有较强的抗自由基损伤作用。     

牛磺酸对缺血大鼠心肌细胞膜ATP酶活性的影响

研究缺血大鼠心肌细胞膜ＡＴＰ酶活性改变及牛磺酸的影响。给Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ５ｍｇ／ｋｇ）制造心肌缺血损伤模型，另一组在注射ＩＳＰ前３０ｍｉｎ腹腔注射牛黄酸２００ｍｇ／ｋｇ及对照组注射等量生理盐水。观测心肌细胞膜Ｋ＋·Ｎａ＋－ＡＴＰ酶，Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性，丙二醛（ＭＤＡ）含量及心肌钙含量。结果显示，缺血组Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｋ＋，Ｎａ＋－ＡＴＰ酶活性分别降低４８．２３％和４５．８５％（Ｐ＜０．０１），ＭＤＡ含量升高８０％（Ｐ＜０．０１），牛磺酸保护组未见显著性变化。并发现Ｋ＋、Ｎａ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量之间有显著负相关（Ｐ＜０．０５）。结果提示，牛磺酸可通过抑制心肌ＭＤＡ生成，实现它对心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｋ＋·Ｎａ＋－ＡＴＰ酶活性的保护作用。     

兔骨骼肌肌球蛋白轻链的分离纯化

目的 从兔骨骼肌中提取肌球蛋白轻链,为下一步研究肌肉收缩原理提供可磷酸化的底物。方法 用离心、透析、柱层析、ＳＤＳ聚丙烯配角安凝胶电流（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和电泳轩移等方法纯化兔骨骼肌肌球蛋白轻链。结果 提取纯化得到较纯的肌球蛋白,进一眇是到轻 混合液和各种轻链纯品,经紫外吸收检测及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实其分子量分别为２５０００（ＭＬＣ１）、１９０００（ＭＬＣ２）和１６５００（ＭＬＣ３）,均与文献报道     

槲皮素对实验性糖尿病大鼠心肌的保护作用

观察槲皮素对实验性糖尿病大鼠同损伤的保护作用,方法：用链脲佐菌素建造ＤＭ大鼠模型恩模后用Ｑｕ（５０ｍｇ．ｋｇ＾－１／ｄ）灌胃处理ＤＭ大鼠,６周后测定心肌组织ＡＴＰ酶不活性,总抗氧化能力,并进行超微结构观察。     

重组P_(53)基因表达及其与Fas关系初探

为观察重组ＰｘＴ１－Ｐ５３在真核细胞中的表达及其与Ｆａｓ表达的关系，笔者采用磷酸钙—ＤＮＡ共沉淀法，ＤＥＡＥ—莆聚糖介导的ＤＮＡ转染法将ＰｘＴ１－Ｐ５３转移至ＰＡ３１７细胞内，并用抗Ｐ５３和抗Ｆａｓ抗体，经间接免疫荧光法证实转染ＰｘＴ１－Ｐ５３的ＰＡ３１７细胞不仅能表达Ｐ５３蛋白，而且亦能表达Ｆａｓ抗原。本实验结果表明笔者构建的ＰｘＴ１－Ｐ５３确实能在真核细胞内表达，并提示Ｐ５３可能通过其转录因子活性，诱导Ｆａｓ等基因表达，以阻止不能修复的已损伤ＤＮＡ的细胞发生恶性转化     

肌球蛋白轻链激酶抑制剂的临床应用前景

目的：探索肌球蛋白轻链激酶（ ＭＬＣＫ） 抑制剂的作用机制及其与临床某些疾病的关系。方法：综述了国内外近年来对ＭＬＣＫ及其抑制剂的研究情况。结果：ＭＬＣＫ的活性与某些临床疾病的发生密切相关，而广泛存在多种植物中的ＭＬＣＫ抑制剂抑制ＭＬＣＫ的活性，具有抗癌，抗病等多种生理功能。结论：ＭＬＣＫ抑制剂的研究从一个方面揭示了某些药物的作用机理，将对体外筛选此类化合物提供一种有用的研究途径。     

低压低氧环境对大鼠心肌肌球蛋白重链表达的影响

【目的】 研究模拟高原低压低氧环境对小鼠心肌肌球蛋白重链α、β亚型表达的影响。【方法】取清洁级SD大鼠20只,随机分成2组：常氧组和模拟高原6000m低压低氧组。记录各组大鼠心脏指数。制作各组心肌组织切片,常规HE染色观察心肌细胞形态改变。免疫荧光法检测各组心肌肌球蛋白重链α-MHC和β-MHC两种亚型蛋白的表达变化。【结果】常氧组和低压低氧组大鼠心脏指数差异不具有统计学意义（P〉0．05）。HE染色可见低压低氧组大鼠心肌细胞水肿,心肌间质内小血管及毛细血管明显扩张充血。低压低氧组大鼠心肌中MHC蛋白质表达水平异常改变,即α-MHC蛋白表达量增高而α-MHC蛋白表达量下降。【结论】模拟高原6000m高原低压低氧可致大鼠心肌细胞形态异常改变同时可刺激心肌MMC亚型表达出现“由快到慢”的趋势,提示MHC表达异常参与了心脏重塑,可能是高原低压低氧致心力衰竭发生、发展的基础。     

光甘草定通过p38/MAPK通路调控动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK表达

目的 研究光甘草定能否通过p38/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路影响动脉粥样硬化(AS)兔模型主动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达.方法 建立AS兔模型,将新西兰大耳白兔随机分为3组:正常对照组、高脂模型组、光甘草定组.正常对照组用正常饲料喂养;高脂模型组、光甘草定组用高脂饲料喂养,12周后分析血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)成分的变化,通过苏木精-伊红(HE) 染色分析兔动脉壁形态结构变化;免疫组织化学方法观察兔模型主动脉内膜MLCK的分布和表达;Western blot 分析兔动脉内膜MLCK水平及p38蛋白磷酸化变化.结果 成功建立AS兔模型,在给予高脂饮食12周以后,与正常对照组相比,血清中TC增高(P<0.05),TG有所增加,但差异无统计学意义;大体标本观察到大量兔动脉粥样斑块形成,HE染色显示高脂模型组兔主动脉血管内皮细胞间隙明显增大并伴有大量泡沫细胞,内膜增厚明显;免疫组化显示主动脉内膜MLCK表达量增多;Western blot显示动脉p38磷酸化水平增强(P<0.05).而加喂光甘草定后,血管内膜病变程度有所下降,MLCK表达有所下降,动脉p38磷酸化水平有所下降(P<0.05). 结论 光甘草定可能通过p38/MAPK通路影响AS兔模型主动脉内皮细胞MLCK的表达.     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法：32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、NaHS治疗组(DM+NaHS组)和NaHS对照组(NaHS组),每组8只。采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型。造模成功后,DM+NaHS组和NaHS组大鼠腹腔注射NaHS溶液28 μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠左心室功能指标;计算心体比;测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isozyme,CK-MB)水平;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化; RT-PCR和Western印迹分别检测心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达。结果：与NC组比较,NaHS组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05),而DM组左心室收缩和舒张功能下降,心体比明显增大(均P<0.01),血清中LDH和CK-MB水平明显增高(均P<0.01),心肌超微结构损伤明显,心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,DM+NaHS组左心室功能和心肌超微结构损伤明显改善,心体比明显降低(均P<0.05),血清中LDH和CK-MB水平明显下降(均P<0.01),MLCK mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01)。结论：外源性H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,机制可能与增强心肌MLCK表达有关。     

复合膳食纤维对急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白和肌球蛋白轻链激酶的影响

目的探讨含复合膳食纤维（DFC）肠内营养（EN）对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肠黏膜屏障功能的影响。方法采用5%的牛黄胆酸钠（0.1 mL/100 mg）逆行注射入胰胆管法制备大鼠重症急性胰腺炎（SAP）模型。60只随机分为三组：SAP＋肠内营养乳剂（瑞素）组（A组）,SAP＋瑞素加复合膳食纤维（20 g/L）1组[可溶性膳食纤维（SDF）∶不可溶性膳食纤维（IDF）=2∶1,B组],SAP＋瑞素加膳食纤维（20 g/L）2组（SDF∶IDF=1∶2,C组）,于术后48 h处死动物,比较各组肠黏膜病理改变,紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的变化。结果 B组与C组大鼠肠黏膜损伤相对于A组较轻（P〈0.05）,C组大鼠肠黏膜损伤相对于B组较轻（P〈0.05）。B组与C组大鼠肠黏膜紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的分布表达相对于A组增高（P〈0.05）,且C组oc-cludin及ZO-1的分布和表达高于B组（P〈0.05）。而C组MLCK的分布和表达高于B组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论添加DFC的肠内营养在SAP大鼠肠黏膜屏障功能中起重要的保护作用,且适当加大不可溶性膳食纤维（IDF）的比例更有助于肠道黏膜屏障的保护,改善受损的肠屏障功能。这一作用可能是通过调控紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的分布和表达来实现的。     

喉癌和癌旁组织P_(53)蛋白的表达及临床意义

目的：探讨喉癌向周围组织浸润发展的方式。方法：应用抗癌基因Ｐ５３单克隆抗体（ＤＯ－１）对１９例喉癌、癌旁和相对正常组织进行免疫组织化学染色。结果：Ｐ５３蛋白阳性物质位于肿瘤细胞核和转化的细胞核内。喉癌的表达率为７３．６８％。癌旁的表达率为３６．８４％，且３～５个阳性细胞位于上皮基底部的细胞核内，呈局灶性、跳跃性表达。结论：喉癌细胞向周围组织浸润方式是跳跃性的，因此为了达到手术治愈目的，喉癌切除术的安全缘至少１ｃｍ。     

抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡。方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例。结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。