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相似文献
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1.
目的建立肺腺癌氯氨顺铂诱导耐药细胞株,分析耐药细胞株生物学特性及染色体核型,为肺腺癌的治疗提供实验依据.方法采用氯氨顺铂(cis-diaminodichloroplatin, CDDP)大剂量冲击 逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP,MTT法检测细胞耐药指数,生物发光法测定细胞能量代谢,流式细胞仪测试细胞周期,染色体G显带技术和光谱核型分析(spectral karyotyping, SKY)技术分析染色体变化. 结果 MTT检测结果显示,A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP耐药指数为 14.0 和 12.0,其ATP、ADP、AMP含量较A549和SPC-A-1显著降低,细胞周期无明显变化.G显带结果表明A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP染色体均为亚三倍体,SKY分析见两株耐药细胞均出现数条衍生染色体.结论 CDDP可以成功诱导肺腺癌耐药细胞株,衍生染色体,包括der(21)t(21;22)等可能与肺腺癌耐药有关.  相似文献   

2.
人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学性状的测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系。方法:以阿霉素(adriamycin,ADM)为诱导药。人肺腺癌细胞系(SPC-A-1)为诱导对象。逐步增加ADM药物浓度进行诱导,以一定浓度ADM培养46周后.光镜观察细胞形态,采用MTT法检测细胞耐药指数(RF),并同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇、ADM6种药物进行交叉耐药检测。结果:SPC-A-1/ADM形态不规则。SPC-A-1/ADM对ADM的RF为11.3.同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇5种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论:建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC-A-1/ADM,可用于多药耐药性机制及逆转的研究。  相似文献   

3.
熊玮  钱桂生  黄桂君 《重庆医学》2006,35(17):1577-1579
目的 建立氯氨顺铂诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP。分析A549/CDDP生物学特性及染色体核型,为肺腺癌的治疗提供实验依据。方法 采用氯氨顺铂(Cis—diaminodichloroplatin,CDDP)大剂量冲击加逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP,MTT法检测细胞耐药指数.生物发光法测定细胞能量代谢,流式细胞仪测试细胞周期,染色体G显带技术和光谱核型分析(spectral karyotyping,SKY)技术分析染色体变化。结果 MTT检测结果表明。A549/CDDP对7种不同的化疗药物表现了不同的耐药性,其ATP、ADP、AMP含量显著降低,细胞周期无明显变化。G显带结果表明A549/CDDP染色体为亚三倍体,SKY分析出现数条衍生染色体。结论 CDDP可以成功诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP,A549/CDDP衍生染色体可能与肺腺癌耐药有关。  相似文献   

4.
目的观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798基因mRNA表达的影响。方法以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR检测CA916798基因mRNA表达水平。结果以雷帕霉素和LY294002分别阻断A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降(P<0.05),CA916798基因的表达均显著下调(P<0.05)。结论 CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一。  相似文献   

5.
人前列腺癌多药耐药细胞系的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立人前列腺癌多药耐药细胞系。方法:以顺铂为诱导药物,人前列腺癌细胞PC3M为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人前列腺癌多药耐药细胞系PC3M/CDDP;MTT法检测药物敏感性,免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P-gP)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:经顺铂诱导建立的人前列腺癌细胞系PC3M/CDDP对顺铂、丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱等药物的50%抑制浓度(IC50)分别为(0.603±0.102)、(0.201±0.056)、(0.267±0.067)、(1.676±0.321)和(0.657±0.227)mg•L-1,与PC3M细胞系比较差异有显著性(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示,PC3M/CDDP细胞系MRP、P-gP表达强度明显大于PC3M细胞系(P<0.05);PC3M/CDDP细胞系的细胞倍增时间为40.5 h,与PC3M细胞系(48.6 h)比较差异无显著性(P>0.05)。结论:成功建立稳定的人前列腺癌 PC3M/CDDP细胞系,该细胞系具有对多种抗癌药耐药及细胞增殖未受影响的特点,可应用于下游实验。  相似文献   

6.
人肺腺癌多药耐药细胞系的建立   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的:体外建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法:以泰素为诱导药,人肺腺癌细胞系SPC—Al为诱导对象,逐步增加泰素浓度冲击,以一定浓度的泰素维持培养共计24周后,光镜观察细胞形态,用MTS方法进行细胞耐药检测。结果:SPC—Al/TAX形态不规则,对阿霉素、长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5—氟脲嘧啶、泰素(紫杉酵)六种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论:建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC—Al/TAX,用于研究其多药耐药性的机制及逆转等下游实验。  相似文献   

7.
目的:采用细胞毒性化疗药物顺铂(Cisplatin,CDDP)诱导口腔腺样囊性癌Acc-3细胞系,得到耐药表型的细胞亚系Ace-3/CDDP,检测其多药耐药性、探讨与其亲代Ace-3细胞系的耐药相关基冈变化.方法:用浓度递增法建立Ace-3/CDDP耐药细胞系;用MTT法检测Ace-3/CDDP细胞的耐药指数,RT-PCR检测多药耐药基因MDR-1、MRP-1、GST-π和Bcl-2基因的mRNA表达水平.结果:Acc-3/cDDP对CDDP、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、氨甲喋呤(MTX)和平阳霉素(PYM)的耐药指数(Resistance factor,RF)分别为8.9、1.97、2.83、2.42、1.1;RT-PCR显示:Aec-3/CDDP中MRP-1、GST-π、Bcl-2较Acc-3升高,Acc-3/CDDP中有MDR-1基因表达,而Acc-3中无MDR-l基因表达.结论:MRP-1、GST-π、Bcl-2基因的表达水平在多药耐药口腔腺样囊性癌Aee-3/CDDP细胞中显著升高,这为进一步探讨肿瘤多药耐药的形成机制提供了科学基础.  相似文献   

8.
宋宗昌  胡义德  黄虎 《四川医学》2008,29(4):382-384
目的 探讨多药耐药性与肿瘤侧群细胞之间的关系.方法 以小剂量阿霉素(ADM)浓度梯度递增的方法诱导人肺腺癌A549细胞系,12周后观察细胞形态变化,用MTT法进行细胞药物敏感性检测,Hoechst33342/PI染色测定侧群细胞(SP细胞)比例.结果 A549/ADM细胞以长梭形为主,胞体增大,伪足增多,对阿霉素、顺铂、长春新碱、足叶乙甙、紫杉醇5种药物的耐药指数分别为9.588、6.348、1.736、11.213、4.333,SP细胞比例增加10倍.结论 肺腺癌A549细胞多药耐药性与侧群细胞比例增加有关.  相似文献   

9.
目的 建立人结肠癌多药耐药细胞系,并研究其生物学特性.方法 以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为诱导药物,LS174T细胞株为研究对象,利用浓度递增诱导法,建立LS174T/5-Fu多药耐药细胞系.MTT法测定药物敏感性,光镜、细胞计数法、流式细胞仪及RT-PCR等方法观察其生物学特征及多药耐药相关基因(MRP)mRNA表达.结果 历时6个月成功建立人结肠癌多药耐药细胞系LS174T/5-Fu,对5-Fu耐药指数为40.24,且与羟基喜树碱、顺铂、依托泊苷和脱氧氟尿苷等多种化疗药物有不同程度的交叉耐药性;细胞形态发生改变;倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期发现其G1和S期细胞增加,G2期细胞减少;MRP mRNA表达增高.结论 LS174T/5-Fu细胞是一种可靠的人结肠癌多药耐药细胞系,该细胞系的建立为深入研究5-Fu诱导人结肠癌多药耐药的发生机制奠定了基础.  相似文献   

10.
目的建立人结肠癌多药耐药细胞系,并研究其生物学特性。方法以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为诱导药物,LS174T细胞株为研究对象,利用浓度递增诱导法,建立LS174T/5-Fu多药耐药细胞系。MTT法测定药物敏感性,光镜、细胞计数法、流式细胞仪及RT-PCR等方法观察其生物学特征及多药耐药相关基因(MRP)mRNA表达。结果历时6个月成功建立人结肠癌多药耐药细胞系LS174T/5-Fu,对5-Fu耐药指数为40.24,且与羟基喜树碱、顺铂、依托泊苷和脱氧氟尿苷等多种化疗药物有不同程度的交叉耐药性;细胞形态发生改变;倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期发现其G1和S期细胞增加,G2期细胞减少;MRP mRNA表达增高。结论LS174T/5-Fu细胞是一种可靠的人结肠癌多药耐药细胞系,该细胞系的建立为深入研究5-Fu诱导人结肠癌多药耐药的发生机制奠定了基础。  相似文献   

11.
目的 克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异性表达基因。方法 将肺腺癌多药耐药细胞(SPC-A-1/CDDP)作为实验组。肺腺癌细胞(SPC-A-1)作为对照组,应用抑制消减杂交技术,构建实验组特异表达cDNA消减文件;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后,将获得的阳性克隆进行测序序和同源性分析(Genebank)。结果 建立了一个肺腺癌多药耐药细胞(SPC-A-1/CDPP)特异表达cDNA消减文库,斑点杂交初步筛选显示23个克隆中有SPC-A-1/CDPP特异表达cDNA片断,测序和同源性分析表明2个cDNA片断为新序列,其余cDNA片断与已知基因有96%~100%的同源性。结论 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列;抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。  相似文献   

12.
目的 建立人小细胞肺癌SH77/CDDPMDR细胞株并检测其生物学特性。方法 应用肺癌化疗的一线药物顺铂采用逐步增加剂量的方法诱导人SCLC细胞系SH77,建立MDR细胞系SH77/CDDP ;检测耐药细胞及其亲代细胞对 7种化疗药物的敏感性 ;观察细胞形态和超微结构 ;测定细胞生长曲线和细胞周期。结果 在国内首次成功建立了SCLCMDR细胞系SH77/CDDP ,药敏结果显示该细胞对 7种化疗药物有不同程度的抗药性 ;耐药细胞较其亲代略增大 ,核浆比例减小 ,线粒体、高尔基体、粗面内质网和游离核糖体增多 ,细胞表面指状突起明显 ;耐药细胞与其亲代细胞增殖速度接近 ;其S期细胞增多 (P <0 .0 5 ) ,提示耐药细胞DNA合成增加。结论 SH77/CDDP是可靠的人SCLCMDR细胞模型 ,SH77/CD DP的建立为进一步探讨顺铂致人SCLCMDR的发生机制奠定了基础  相似文献   

13.
人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的建立顺铂诱导的人成骨肉瘤多药耐药细胞系(MG63/R)并观察其生物学特性。方法以顺铂为诱导剂,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法诱导人成骨肉瘤MG63细胞,建立多药耐药系MG63/R。MTT法检测药物敏感性;光镜、透射电镜观察MG63、MG63/R细胞形态及超微结构变化;生长曲线、克隆形成试验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数、P-pg、bcl-2、P53蛋白表达。结果经顺铂186d的诱导,建立了MG63/R,其对顺铂的耐药指数为83.557±4.841,对阿霉素、长春新碱、氨甲基蝶呤、环磷酰氨亦产生不同程度的交叉耐药;光镜观察可见MG63/R细胞排列不规则,形态呈三角形、多角形及多核现象;透射电镜显示MG63/R细胞表面突起增加,粗面内质网丰富;细胞周期分析显示细胞增殖能力明显增加而细胞凋亡明显降低;MG63/R细胞P-pg、bcl-2阳性表达较MG63细胞明显增加,P53表达则明显降低。结论本研究建立了稳定的人成骨肉瘤多药耐药细胞系MG63/R,为进一步研究顺铂的多药耐药机制和耐药治疗提供了一种新的实验模型。  相似文献   

14.
目的观察表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体是否可诱导人肺癌SPCA1细胞凋亡,以进一步说明EGFR单抗所具有的抗肿瘤作用。方法以不同浓度的EGFR单克隆抗体干预培养人肺腺癌SPCA1细胞株72h,收集癌细胞并提取DNA,采用凝胶电泳法和流式细胞仪分析细胞凋亡现象。结果凝胶电泳显示,单抗浓度为1.0μmol/L时,可见明显的凋亡梯状条带出现。流式细胞仪分析发现,在EGFR单抗干预培养的各SPCA1细胞样本存在低荧光的亚G1细胞群,而在空白对照和正常非相关IgG对照样本均未见低荧光细胞群存在。结论表皮生长因子受体单克隆抗体可诱导人肺癌SPCA1细胞出现凋亡。  相似文献   

15.
Xia S  Yu SY  Yuan XL  Xu SP 《中华医学杂志》2004,84(8):663-666
目的 通过研究乏氧对人肺腺癌细胞株A549的P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响,探讨乏氧在引起肿瘤细胞多药耐药中的作用。方法 乏氧条件下(2%O2)人肺腺癌细胞株A549体外培养24h,丙酮固定后运用免疫组织化学的方法对乏氧诱导因子-1α(HIE-1α)、P-gp和MRP的表达进行检测,并用MTT法检测乏氧条件下A549细胞在阿霉素和顺铂作用下的存活率。结果 乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549中乏氧诱导因子-1α、P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白的表达明显较正常氧浓度下增高,HIF-1α与P-gp、MRP的表达增高存在明显的相关性。乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549对阿霉素的耐药性明显增强。结论 在人肺腺癌A549细胞中HIF-1α蛋白表达与P-gp和MRP表达存在明显的相关性。  相似文献   

16.
目的 获得人小细胞肺癌(SCLC)SH77/CDDP 多药耐药(MDR)相关基因表达谱,为进一步阐明顺铂(CDDP)所致SCLC MDR的机制奠定基础.方法 在成功建立CDDP诱导的人SCLC MDR细胞系SH77/CDDP的基础上,分别提取SH77/CDDP 和其亲代SH77细胞的总RNA,反转录合成双链cDNA,通过反转录合成生物素标记的cRNA探针,片段化处理后分别与Affymetrix GeneChip人类U133系列芯片(U133A、U133B,共包含3.9万个转录本,其中有3.3万个已知基因,0.6万个未知的cDNA序列表达标签) 杂交,杂交信号经扫描等处理并用生物信息学对检测结果进行分析.结果 与SH77亲代细胞相比,在SH77/CDDP细胞中有2 389个(6.13%)基因表达增高,其中增高1倍以上的有464个(1.19%),增高2倍以上的有89个(0.23%),增高3倍以上的有26个(0.07%),增高4倍以上的有7个(0.02%).其中差异最显著的36个基因包括 ABCC3、HSP70、CYP26B1、CYP4A11、IGF1R、LOX2、CAP2、LRP2BP、AKNA、ELTD1等,上调幅度2.5~5.1倍,根据Gene Ontology分类和Tree View分析,这36个基因的功能主要为运输、细胞黏附、信号转导、转录和离子结合等.结论 高通量的基因芯片技术筛选出大量CDDP所致SCLC MDR相关基因,对这些耐药相关基因功能的验证有助于揭示CDDP所致人SCLC MDR的发生机制.  相似文献   

17.
目的:从逆转多药耐药的角度,研究金复康口服液对耐药人肺腺癌细胞A549/DDP的化疗增效的作用和分子机制。方法:应用血清药理学方法,选择A549、A549/DDP细胞,实验分为实验组和空白对照组,从细胞水平、分子水平进行研究。结果:金复康口服液低剂量能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,逆转耐药倍数为3.45倍,与DDP(320μmol/L)合用,使DDP(320μmol/L)对A549/DDP细胞的抑制率由47.55%升高为73.32%,且q>1.15,表明金复康口服液与DDP合用有明显的协同增效作用,增加了DDP对A549/DDP细胞的敏感度;金复康口服液低剂量能够降低A549/DDP膜转运蛋白LRP、MRP的mRNA表达。结论:(1)低剂量金复康口服液与DDP合用能够增加DDP对A549/DDP的增殖抑制作用,二者具有显著的协同增效作用。(2)金复康口服液能够降低A549/DDP膜转运蛋白LRP、MRP的mRNA表达。金复康口服液可能通过降低耐药肿瘤细胞膜转运蛋白的表达而逆转肿瘤多药耐药,为扶正方药对化疗增效机理提供了新的实验依据。  相似文献   

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