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1.
目的研究miR.152分子对JEG-3细胞中HIA—G表达水平的调控。方法在滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染pre-miR-152(实验组),Cy3标记的pre—miRNA—control(阴性对照),空白对照(NC)为未转染的JEG-3细胞。转染48h、72h分别进行RT.PCR与Westernblot实验检测细胞中miR-152、HLA—GmRNA与蛋白的表达水平。结果RT-PCR结果显示在细胞中转染pre—miR-152分子后miR-152的表达显著增高(P〈0.05);转染后HLA—GmRNA的表达水平在各组之间差异无统计学意义(P〉0.05)。Westernblot结果显示与对照组相比,实验组的HLA—G蛋白表达水平显著降低(P〈0.05)。结论miR-152可能在翻译水平抑制HLA-G的表达。  相似文献   

2.
目的 探讨在低氧条件下,沉默绒毛膜滋养细胞系JEG-3细胞的人类白细胞相关抗原-G(HLA-G)表达对JEG-3细胞生物学功能的影响和通过内皮PAS1区域蛋白1(EPAS1)低氧反应通路参与高原低氧条件下子痫前期发病的分子机制。方法 通过转染小干扰RNA(siRNA)抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达,将转染后的JEG-3细胞分为4组:常氧对照组、低氧对照组、常氧抑制组、低氧抑制组。采用CCK-8实验及体外侵袭实验法检测4组细胞的增殖及侵袭能力;用流式细胞术检测4组细胞凋亡和细胞周期的影响;通过qPCR技术及Western blot法检测4组细胞中HLA-G和EPAS1 mRNA及蛋白的表达水平。结果 (1)与常氧对照组相比,低氧对照组及常氧、低氧抑制组均可使JEG-3细胞的增殖活性、侵袭能力降低,使得细胞凋亡率显著升高,低氧对照组与低氧抑制组产生了明显的坏死细胞群。低氧条件下,降低HLA-G的表达会提高细胞坏死率。无论在常氧还是低氧下,抑制HLA-G表达均使细胞被阻滞在G1期。(2)与常氧对照组相比,低氧对照组及常氧、低氧抑制组均降低HLA-G蛋白表达,且低氧和抑制HLA-G蛋白表...  相似文献   

3.
目的:探讨miRNA-376c-3p(miR-376c-3p)对人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞迁移、增殖和凋亡的影响及其可能的调控机制。方法:qRT-PCR法检测13例胃间质瘤患者肿瘤和癌旁对照组织中miR-376c-3p表达;将miR-376c-3p类似物(mimic)、抑制物(inhibitor)和各自阴性对照分别转染GIST-T1细胞,另设空白对照组;qRT-PCR检测转染细胞miR-376c-3p表达;然后用CCK8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力;通过Western Blot及qRT-PCR法检测miR-376c-3p对CASP-7(Caspase-7)表达量的影响。结果:在胃间质瘤患者癌组织中,miR-376c-3p表达水平显著降低,为癌旁对照组织的58.7%(P<0.01);qRT-PCR显示:转染miR-376c-3p mimic后,GIST-T1细胞miR-376c-3p表达明显上调(P<0.01),而转染miR-376c-3p inhibitor后表达受抑制(P<0.01);miR-376c-3p mimic转染组细胞增殖活性、迁移能力明显抑制(P<0.01),凋亡率增强(P<0.05);另外miR-376c-3p过表达后CASP-7mRNA和蛋白水平出现上调,相反地,miR-376c-3p抑制却导致CASP-7mRNA和蛋白水平下调(P<0.05)。结论:在人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞中miR-376c-3p可以间接调控CASP-7的表达,抑制细胞增殖、迁移能力,促进细胞凋亡。  相似文献   

4.
目的 食管鳞癌中miR-133b通过调控EGFR/ITGB4/FAK信号通路,发挥抑制肿瘤增殖、侵袭、转移的作用。但目前对于miR-133b的上游调控机制尚不完全清楚,故展开探索。 方法 采用生信分析预测参与调控miR-133b表达的上游转录因子;采用qRT-PCR、Western blotting验证转染IRF4过表达质粒对IRF4和miR-133b在转录和蛋白水平表达的影响;采用染色质免疫共沉淀技术确认IRF4与miR-133b的相互作用;双荧光素酶报告基因实验验证IRF4对miR-133b表达的调控作用机制。 结果 使用ConTra V3预测发现转录因子IRF4能够与miR-133b结合;qRT-PCR、Western blotting实验证实转染IRF4过表达质粒可显著上调IRF4在mRNA(t=-18.950,P=0.010)和蛋白水平的表达(t=-4.061,P=0.042),并促进miR-133b的表达(t=-8.681,P=0.005);染色质免疫共沉淀实验(引物1:t=-17.391,P=0.003;引物2:t=-14.421,P=0.004)和双荧光素酶报告基因实验(t=-22.112,P=0.010)证实转录因子IRF4可直接靶向作用于miR-133b。 结论 验证IRF4对miR-133b的直接靶向调控作用,有助于构建miR-133b的信号调控网络,为食管鳞癌的诊疗提供新靶点。   相似文献   

5.
目的分析miR-128在结肠癌细胞中的表达情况,研究其对结肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法对转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞进行培养,采用MTT法行细胞增殖实验检测细胞增殖能力,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;并采用RT-RCR检测miR-128mRNA的表达,Westernblot法检测miR-128蛋白的表达。结果转染miR-128模拟物后的结肠癌SW48细胞较转染空白对照模拟物后的,细胞增殖、侵袭及迁移能力均下降(均P<0.05),且转录因子Sp1基因在mRNA及蛋白水平均下降(均P<0.05)。结论miR-128可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移,可能通过调控Sp1基因发挥上述作用。  相似文献   

6.
目的:研究胃癌中miR-148a与E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的相关性,并进一步探索miR-148a对E-cadherin的内在调控机制?方法:通过qRT-PCR或Western blot检测胃癌组织中E-cadherin及miR-148a的表达,使用Pearson相关分析检测E-cadherin与miR-148a表达的相关性;通过去甲基化药物处理,研究启动子异常甲基化与E-cadherin表达的关系;通过转染miR-148a mimics 提高miR-148a的表达水平,转染DNA化转移酶1(DNMT1)siRNA干扰DNMT1的表达水平,进一步研究miR-148a对E-cadherin的调控机制?结果:与正常胃黏膜相比,E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平在胃癌组织中显著下调,并与miR-148a的表达呈正相关?去甲基化药物5-aza-dC处理后,胃癌细胞MGC-803及SGC-7901中E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著上升?胃癌细胞转染miR-148a mimics后,E-cadherin的蛋白表达水平明显提高,并且干扰DNMT1的表达后,E-cadherin的蛋白表达水平也显著上调?结论:miR-148a能通过DNMT1进一步调控E-cadherin的表达?  相似文献   

7.
目的观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)和miR-133a在HEI-OC1耳蜗毛细胞氧化凋亡过程中的表达,探讨miR-133a对FGF-1的调控机制及其在毛细胞氧化损伤过程中的作用。方法应用叔丁基过氧化氢(t-BHP)致耳蜗毛细胞氧化损伤细胞模型模拟毛细胞受到噪声刺激后的氧化损伤过程,设50、100、200μmol/L三个染毒组和未染毒对照组。提取细胞总RNA和总蛋白,采用qRT-PCR以及Western blot检测miR-133a和FGF-1表达水平,检索生物信息学网站,对FGF-1 3’-UTR区上miR-133a可能作用的靶序列进行预测分析;脂质体转染miR-133amimics入耳蜗毛细胞内,采用q RT-PCR和Western blot分别检测转染后FGF-1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 qRT-PCR结果显示,t-BHP处理组FGF-1 mRNA的表达为对照组1.32倍(P0.05)、1.67倍(P0.05)和2.64倍(P0.001),且随着染毒浓度的升高呈增加的趋势(F=9.231,P0.05);同时miR-133a表达均有所降低,分别为对照组的0.81倍(P0.05)、0.68倍(P0.05)和0.37倍(P0.05),且随着染毒浓度的升高呈降低的趋势(F=17.63,P0.05)。脂质体转染miR-133a mimics,50、100、200μmol/L的转染组miR-133a表达分别为对照组的767、1 499和1 607倍,差异有统计学意义(P0.05)。miR-133a mimics转染组FGF-1的mRNA和蛋白表达水平均低于对照组,同时miR-133a inhibitors转染组FGF-1的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组。软件预测结果显示,在多个物种中靶序列(FGF1-3′UTR上第356-363位核苷酸)在物种之间十分保守,其种子区域完全互补。结论 FGF-1的表达受miR-133a的调控,FGF-1基因的356-363碱基区域可能为miR-133a的识别元件。  相似文献   

8.
目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)调节miR-199a的表达在HBV相关性肝癌发生中的分子机制.方法 重组HBX腺病毒(Ad-HBX)感染人肝癌HepG2细胞,HBX的siRNA转染稳定表达HBV基因的人肝癌HepG2.2.15细胞,荧光定量PCR方法检测HBV相关性肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、miR-199a、AKT的mRNA表达水平及运用Western blot检测肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、AKT的蛋白表达水平;分别用miR-199a mimics和miR-199a inhibitor的转染肝癌细胞后,荧光定量PCR方法检测肝癌细胞中AKT的mRNA表达水平及运用Westem blot检测肝癌细胞中AKT的蛋白表达水平.结果 miR-199a在HepG2.2.15细胞中表达水平显著低于HepG2细胞,并且证实其表达下调受到了HBX的调控(P<0.05),HepG2.2.15细胞中AKT表达水平显著高于HepG2细胞(P<0.05),在HepG2.2.15细胞中过表达miR-199a能明显下调AKT表达水平以及在HepG2细胞中抑制miR-199a能明显上调的AKT表达水平(P<0.05),此外,miR-199a的表达量在HBV相关性肝癌组织比相应的癌旁组织表达降低.结论 HBX可以通过miR-199a调节AKT导致HBV相关性肝癌发生.  相似文献   

9.
目的 探讨微小RNA-21 ( miR-21 )对肺癌A549细胞中Smad7表达的调控和对肺癌A549 细胞增殖的影响. 方法 常规培养肺癌细胞系A549,经脂质体转染miR-21模拟物和抑制物及阴性对照片段48 h后,采用Western blot、qRT-PCR法检测 Smad7 基因及蛋白的表达水平, MTT 法检测A549细胞增殖情况. 结果 转染miR-21 模拟物后Smad7的mRNA和蛋白表达量降低( P<0. 05 ) ,而转染miR-21 抑制物后Smad7的mRNA和蛋白表达量升高( P<0. 05 );MTT结果显示转染 miR-21 模拟物后细胞的增殖能力明显增强(P<0. 05),而转染miR-21 抑制物后细胞增殖能力明显减弱( P<0. 05 ). 结论 通过下调 miR-21 可提高 Smad7 的mRNA和蛋白表达,进而抑制A549细胞的增殖.  相似文献   

10.
目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞(低侵袭性乳腺癌细胞)和MDA-MB-231细胞(高侵袭性乳腺癌细胞)为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics(miR-4443模拟物)、mimics-NC(miR-4443模拟物的对照物)或miR-4443inhibitors(miR-4443抑制物)、inhibitors-NC(miR-4443 抑制物的对照物)转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1(重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1)在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织(P<0.01)。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高(P<0.01)。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高(P<0.01)。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调(P<0.01);而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调(P<0.01)。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义(P>0.05),并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义(P>0.05)。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱(P<0.01)。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强(P<0.01)。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因(P<0.01)。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞(P<0.01)。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照(P<0.01);转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照(P<0.01)。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。  相似文献   

11.
目的 研究特异性微小RNA(miR)-590对舌鳞癌细胞SCC-3 Fas配体(FasL)的表达的影响.方法 将合成的miR-590 mimics或miR-590抑制剂转染至SCC-3细胞.通过RT-PCR和Western blot法检测SCC-3中FasL信使RNA(mRNA)和蛋白的表达;将转染后的SCC-3细胞在顺铂(DDP)5 mg/L处理下,在不同时间段通过MTT法绘制细胞生长曲线,并通过针对FasL的miR-590的抑制剂从反面验证miR-590的作用.结果 miR-590可以在mRNA和蛋白水平上降低SCC-3细胞FasL的表达;转染miR-590后SCC-3细胞对于DDP的耐药性降低.结论 miR-590可以有效抑制SCC-3细胞FasL的表达,降低SCC-3的DDP的耐药性,从而可能降低和减少其对免疫活性细胞的凋亡诱导和杀伤作用,从而阻断肿瘤细胞的免疫逃逸,为舌鳞癌的生物治疗提供了新的靶点.  相似文献   

12.
目的:探讨微小RNA-338.3p(miR-338-3p)对人结直肠癌细胞侵袭迁移能力及Smoothened(SMO)蛋白表达的影响。方法:应用实时荧光定量PCR(Real—timePCR)检测四种人结肠癌细胞系Lovo、HT-29、HCT116、SW620中miR-338—3p表达状况,并以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为对照。采取脂质体转染miR-338-3p前体(pre—miR-338.3p)至人结直肠癌细胞系SW620,观察细胞转染前后miR-338—3p的表达变化.Transwell侵袭实验及划痕实验检测转染前后细胞侵袭及迁移能力的改变;以Western—blotting和RT-PCR分析sMO蛋白及mRNA表达状况。结果:检测四种结直肠癌细胞系中miR-338—3p表达水平均较正常对照细胞显著降低,差异具有统计学意义(P〈0.01);SW620细胞转染pre—miR-338—3p后,miR-338—3p表达水平升高,sMO蛋白表达下降,同时肿瘤细胞侵袭、迁移能力明显增强,与对照组相比差异具有统计学意义(P〈0.01);但SMOmRNA表达水平在转染前后差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:MiR-338—3p可通过抑制结直肠癌细胞系中SMO蛋白表达从而抑制肿瘤细胞侵袭转移。  相似文献   

13.
目的 探讨miR-26a对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖能力的影响及其与EZH2的靶向关系. 方法 构建pcD-NATM6.2-pre-miR-26a、pmirGLO-EZH2野生型(pmirGLO-EZH2-WT)和突变型(pmirGLO-EZH2-MT)重组质粒,并采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-26a在ACC-M细胞中的转染效率,并与未处理组(control组)进行比较.同时采用MTT法分析miR-26a过表达对ACC-M细胞增殖活性的影响,并采用双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot检测miR-26a与EZH2的靶向关系. 结果 将测序结果采用NCBI BLAST进行序列比对,结果显示pre-miR-26a、EZH2-WT和EZH2-MT重组质粒均构建成功,无碱基缺失或突变.qRT-PCR显示转染pre-miR-26a的ACC-M细胞其miR-26a的表达显著高于未处理组(P<0.001).MTT分析显示miR-26过表达可以明显抑制ACC-M细胞的增殖活性(P<0.05).此外,双荧光素酶报告基因系统(P=0.001)、qRT-PCR和Western blot均证实miR-26a能够显著下调EZH2的mRNA(P=0.001)和蛋白的表达(P=0.006). 结论 miR-26a能够显著抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系.  相似文献   

14.
目的 探讨miR-133a在不同复发时间间隔复发性肝癌中的表达差异,并研究其对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖等生物学功能的影响。方法 通过miRNA芯片筛选复发性肝细胞癌病例差异表达的miRNA;将miR-133a mimic及inhibitor转染入人肝癌细胞株SMMC-7721,通过CCK8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;利用生物信息学方法预测miR-133a的可能靶基因。结果 芯片结果发现miR-133a在早期复发肝癌样本中表达明显升高;转染miR-133a的mimic或inhibitor入肝癌细胞SMMC-7721后,细胞增殖能力无显著差异(P>0.05);转染mimic后,细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.05),而转染inhibitor后,细胞的侵袭及迁移能力明显减弱(P<0.05)。结论 miR-133a的表达在不同复发间隔的肝细胞癌组间有显著差异,在短期复发肿瘤组织内明显升高;miR-133a可以促进肿瘤细胞的侵袭和迁移,而对增殖无明显作用,提示miR-133a水平升高可能通过促进肿瘤细胞侵袭从而增加肝细胞癌肝内转移复发风险。  相似文献   

15.
目的:探讨微小RNA-21(miR-21)对宫颈癌HeLa细胞中程序性细胞死亡4(programmed cell death,PDCD4)基因表达及细胞增殖的影响,为应用miR-21对宫颈癌进行基因治疗提供一定的依据。方法:用脂质体转染的方法,将pre-miR-21、pre-miR-21阴性对照、anti-miR-21、anti-miR-21阴性对照瞬时转染HeLa细胞。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-21相对表达量;MTT法检测宫颈癌HeLa细胞增殖的变化;蛋白质印迹法检测PDCD4蛋白表达情况;荧光素酶报告基因法验证miR-21的靶位点。结果:pre-miR-21上调miR-21的表达,抑制PDCD4蛋白表达,促进HeLa细胞增殖;而anti-miR-21下调miR-21的表达,增加PDCD4蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖。pMIR-Luc-PDCD4-3'UTR与pre-miR-21共转染后,荧光素酶活性下降,而与anti-miR-21共转染后,荧光素酶活性升高。结论:PDCD4基因是miR-21的靶基因;miR-21通过调节PDCD4基因的表达调控细胞增殖。  相似文献   

16.
目的 探讨微RNA-484 (miR-484)对肝纤维化发生和发展过程中关键细胞肝星状细胞(HSC)的作用和影响.方法 以前期芯片筛选结果为基础,通过细胞转染人为干预miR-484在HSC-T6细胞株中的表达.利用qPCR、蛋白质印迹法检测肝纤维化及凋亡相关指标的表达变化;以Annexin V-FITC/PI双染细胞后,用流式细胞仪检测miR-484对细胞凋亡的影响.结果 与对照组相比,人为下调miR-484在HSC-T6细胞株中的表达后,其靶基因Fis1及促凋亡因子caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达均升高(P<0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达下降(P<0.05);流式细胞仪检测到HSC-T6细胞凋亡率升高[(32.81±3.21)% vs (57.54±6.76)%,P<0.05];同时肝纤维化相关指标α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05).结论 miR-484通过靶向Fis1抑制HSC凋亡、促进其活化,从而促进肝纤维化的发生和发展.  相似文献   

17.
目的 探讨 miR-125b-5p 调控 RAB3D 在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过 qRT-PCR 检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达明显下调(P<0.05)。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p 表达量升高,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中 RAB3D 的蛋白表达量下降(P<0.05);miR-125b-5p 表达量降低,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P<0.05),而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断(P<0.05)。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。  相似文献   

18.
目的 研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法 选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。 结果 qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133b mimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133b inhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs 21、45、69、93和117 h后,与阴性对照组相比,miR-133b mimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133b inhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagen Ⅲ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagen Ⅲ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133b mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133b mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论 miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。  相似文献   

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