蛤蚧与常见伪品的鉴别

蛤蚧始载于唐《海药本草》,以其雄性鸣声“蛤—蚧”而得名。蛤蚧是补肺益肾、定喘助阳的良药,用于虚喘气促、劳嗽咳血、阳痿遗精。由于其疗效甚佳,故在临床应用较多,但由于药价比较昂贵,一些药贩常以假充真,在我们临床工作中发现的主要伪品为小壁虎、山溪鲵等。为便于鉴别,现将蛤蚧及其主要伪品特征概述如下。　　正品蛤蚧为爬行纲有鳞目壁虎科动物蛤蚧Ｇｅｋｋｏｇ’ｅｃｋｏＬｉｎｎａｅｕｓ除去内脏的干燥全体。蛤蚧呈扁平状,全长可达34ｃｍ,头颈约占1/3,腹背部宽6ｃｍ～11ｃｍ,尾长6ｃｍ～12ｃｍ。头稍扁,略呈三角形,口内有细齿。背部呈…     

线粒体基因组的五个新的多态性

目的：通过分析线粒体基因组序列,进一步了解中国人线粒体基因多态性特点。方法：在4个中国汉族个体的线粒体基因组全长16569bp进行分段PCR和荧光测序的基础上,针对发现的7个未报道的新单碱基变异,以识别变异的限制性内切酶和通过引物变动人工增;加识别位点的方法,对这些变异进行100个正常人对照绵PCR－限制酶切分析。结果：发现5个未经MITOMAP收录或发表的线粒体基因序列变化C298T,C638G,C3206T,A5323T,均属多态性位点,基因频率分别为：17．65％,32．04％,62．77％,33．33％和32．26％。结论：5个新发现的多态性位点,1个位于线粒体基因组调控区（C298T）,2个位于编码蛋白MTCO1区（A6323G,C6326T）,另外两个分别位于编码12S和16S的rRNA区（C638G和C3206T）,为在中国人中首先报道的多态性。     

重症肌无力患者胸腺Fas基因突变及氨基酸变异分析

目的：分析重症肌无力(MG)患者胸腺Fas基因突变及其编码蛋白质的氨基酸变异，探讨Fas分子在重症肌无力发生中的作用。方法：提取8例MG患者胸腺总RNA，经RT-PCR法扩增mFas基因全长，克隆后用荧光标记法进行基因测序，用DNASIS、OMIGA软件与Genbank中Fas序列进行同源性比较和分析。结果：8例患者胸腺组织6例出现Fas基因突变，突变率为75％(6／8)，其中5例发生2个以上位点突变，只有1个位点突变的1例(12．5％，1／8)；突变类型为164位A→G，相应的氨基酸变异为55位Asp→Gly，96位His-Arg，192位Arg→Lys和251位Lys→Arg。Fas基因高度保守，患者之间同源性为99．6％～100％，Fas分子同源性为98．7％～99．7％。结论：重症肌无力患者胸腺组织中存在Fas基因突变和Fas分子结构变异，可能与患者胸腺异常有关。     

瓣膜疾病患者和先心病患者心肌线粒体DNA缺失的初步观察

目的 初步观察心脏瓣膜疾病与先心病患者心肌线粒体DNA缺失及其意义。方法 随机选择心脏瓣膜病患者17例和14例先心病患者术中取心肌，提取线粒体DNA，应用PCR测序技术检测心肌线粒体DNA序列并分析其突变情况。结果 17例心肌瓣膜置换术患者中，总核苷酸碱基变异或丢失为70个，人均变异率为4．1176个，碱基平均变异率为1．1372％；14例先心病患者中，核苷酸碱基总变异为63个，人均变异率为4．5个，碱基平均变异率为1．3118％；瓣膜置换术组C-T变异率为51．39％，T-C变异率为33．33％，先心病组C-T变异率为46．03％，T-C变异率为34．92％。结论 心脏瓣膜病与先心病患者的心肌线粒体DNA均存在不同程度的碱基突变与丢失。     

布依族XRCC1基因单核苷酸多态性及其组合型分析

目的 分析布依族人群DNA修复基因XRCC1 C26304T、G27466A与G28152A单核苷酸多态性及其等位基因频率与组合分布特征。方法 获取自然人群个体布依族192例血白细胞基因组DNA，利用PCR扩增限制性酶切法（PCR—RFLP）检测XRCC1 C26304T、G27466A与G28152ASNPs。结果 XRCC1 C26304TSNPs基因型分布CC、CT、TT分别为64．6％、28．6％、6．8％，C、T等位基因频率分别为78．7％、21．3％。XRCC1G27466ASNPs基因型分布GG、GA、从分别为85．9％、12．5％、1．6％，G、A等位基因频率分别为91．7％、8．3％。XRCC1G28152ASNPs基因型分布GG、GA、从分别为55．2％、37．0％、7．8％，G、A等位基因频率分别为73．7％、26．3％。本研究发现XRCC1基因C26304T和G28152A两位点的SNPs组合基因型频率较高的为CC＋GG60例（31．2％）；C26304T和G27466A两位点的SNPs组合基因型频率较高的为CC＋GG98例（51．0％）；G28152A和G27466A两位点的SNPs组合基因型频率较高的为GG＋GG88例（45．8％）。结论 本研究揭示了布依族人群XRCC1基因3位点的单核苷酸多态性、基因型及其组合分布特征，为进一步研究该基因SNPs与其生理功能和疾病的关系提供基础资料。     

人骨肉瘤中5个新基因片段在不同骨肿瘤中的差异表达

目的 筛选数个在人骨肉瘤中检出率高的差异表达基因片段并探讨其临床意义。方法 以筛选出5个新基因片段作为研究对象，采用RT－PCR技术检测37例骨肉瘤，68例其他骨肿瘤及19例截除肢体上的正常骨组织标本。结果 在37例骨肉瘤中，表达检出率高的5个片段依次为：ZOL03为92．6％，1C82为89．4％，1C74为73．9％，2G12为66．5％，2A21为53．7％；在23例骨软骨瘤中表达率依次为：ZOL03为6．5％，1C82为14．7％，1C74为8．3％，2G12为11．9％，2A21为12．2％；在29例骨巨细胞瘤中表达率依次为：ZOL为8．3％，1C82为15．6％，1C74为12．5％，2G12为13．8％，2A21为5．4％；在16例软骨肉瘤中表达率依次为：ZOL03为9．4％，1C82为14．3％，1C74为7．5％，2G12为6．8％，2A21为6．2％；在19例正常骨组织标本中表达率依次为：ZOL03为0，1C82为6．4％，1C74为0，2G12为4．8％，2A21为3．9％，这5个基因片段检出率在骨肉瘤与其他骨肿瘤中存在显著差异（P＜0．01）；其检出率与骨肉瘤与正常骨组织中存在显著差异（P＜0．01）。结论 ZOL03，1C82，1C74，2G12及2A21这5个基因片段可能与骨肉瘤的发生，发展有关，监测骨组织中此5个基因片段的表达水平的变化可能对骨肉瘤的早期发现更有意义。     

治疗蛤蚧脚趾脓肿方法的研究

目的 探讨蛤蚧常发性疾病——脚趾脓肿的治疗方法。方法 试验1组首先用0．1％高锰酸钾消毒液给蛤蚧进行体表消毒，然后在脓肿处用酒精棉球消毒后，用手术刀切一个小口，将脓汁（或脓块）清除干净，用双氧水对创口进行防腐消毒处理，撒上磺胺结晶，口服复方新诺明，最后注射抗生素。按以上方法连续使用7d后，停药5d（只外用），继续用药处理5d，再外用3d。试验2组试验方法和过程同试验1组，但不注射抗生素；对照组对患脚趾脓肿的蛤蚧只作体表消毒，不进行任何其他的药物处理。结果 经20d治疗，蛤蚧总治愈率为94％；试验2组的总治愈率为78％，明显低于试验1组（P〈0．05）；对照组患病蛤蚧5d后全部死亡，其治愈率明显低于试验组（P〈0．05）。结论 试验1组的处理是治疗蛤蚧脚趾脓肿痛的好方法。     

两个线粒体12S rRNA C1494T突变及药物性耳聋家系的分子遗传学研究

目的:探讨2个氨基糖甙类药物性耳聋及非综合征型耳聋家系的分子遗传学特征?方法:收集家系成员外周血样,常规方法提取基因组DNA?首先,利用基因芯片对中国人4个常见耳聋基因的9个突变热点进行分子筛查,9个位点分别为:GJB2基因的35 delG?176 del16?235 delC和299 delAT;GJB3基因的538 C>T;PDS基因的IVS7-2 A>G和2168 A>G以及mtDNA 12S rRNA基因的1494 C>T和1555 A>G?然后,对两家系的先证者分别进行线粒体DNA全序列及核基因TRMU和MTO1编码区的PCR扩增和测序分析?结果:芯片检测发现两家系的7名母系成员均存在同质性mtDNA 12S rRNA C1494T突变?与修正的剑桥参考序列相比,2名先证者的mtDNA全序列分析共检测到53个碱基变异,但除已知的12S rRNA C1494T突变外,其余52个碱基变异均为已报道的多态性位点;两家系先证者线粒体单体型分别是D4和D5a;TRMU和MTO1基因序列分析无异常发现?结论:线粒体DNA 12S rRNA C1494T突变是两个家系耳聋发生的主要分子基础,而氨基糖甙类抗生素的应用增强了该突变的表型表达;未能证实线粒体单体型以及核基因TRMU和MTO1对家系成员C1494T突变的表型具有修饰作用?     

线粒体DNA序列分析封闭群小鼠遗传稳定性

目的分析ICR小鼠线粒体ATPase6和D—Loop基因多态性及封闭群ICR小鼠遗传稳定性。方法在一个亲本雌鼠100只繁殖产生的共1000只后代群体中随机取12周龄雄鼠20只,提取小鼠睾丸生殖细胞DNA,PCR扩增小鼠线粒体ATPase6和D-Loop基因,产物纯化后测序,测序结果与小鼠线粒体标准序列比对,比较20只小鼠的序列差异。结果检测的20只小鼠ATPase6和D—Loop基因序列完全一致,且与小鼠线粒体标准序列完全一致。结论ICR小鼠群体内未检测到ATPase6和D—Loop基因的多态性变异,该群体具有较好的线粒体遗传稳定性。     

线粒体基因D-loop区在胃癌中的突变及多态性研究

目的线粒体基因（mitochondfial DNA，mtDNA）的突变通常被认为与肿瘤的形成有关，本研究检测胃癌组织mtDNA D-loop区的突变及多态性，以探讨两者的相关性．方法PCR扩增和测序检查胃癌组织和相应正常组织的线粒体基因D—loop区全序列，并与线粒体文库记录的Revised Cambridge Reference Sequence（rCRS）进行比对分析．结果15例胃肿瘤中检测出mtDNAD—loop区的162个多态性变异，其中6个（3．7％）为新发现的变异．7例（46．7％）胃癌组织发现体细胞性突变共11次．突变热点集中在HVⅠ区（27．3％）和HVII区（54．5％），并且HVⅡ区较HVⅠ区更易突变．结论D—loop区的高度多态性和突变与胃癌的发生具有相关性．     

蛤蚧乙醇提取液影响去势大鼠胫骨TGF-β1表达的研究

目的：研究在灌服蛤蚧乙醇提取液去势大鼠胫骨中TGF-β1的表达,探讨蛤蚧乙醇提取液防治绝经后骨质疏松症的机理。方法：采用12月龄SD雌性大鼠60只,随机分为对照组、去势组和实验组。去势组和实验组均切除双侧卵巢,实验组给予蛤蚧乙醇提取液灌胃处理;对照组给予假手术处理。3组大鼠分别于术后4、12周,随机各取10只,测定骨密度（BMD）后处死,取右侧胫骨,脱钙后包埋切片,HE染色,计数破骨样细胞;常规SABC法进行免疫组化染色,图像分析灰度值。结果：实验组的全身BMD明显高于去势组,但仍然低于对照组;实验组的破骨样细胞计数与对照组相似,与去势组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。TGF-β1在实验组及对照组的成骨细胞中呈阳性染色,部分骨基质中也有阳性表达,去势组呈阴性表达。结论：蛤蚧乙醇提取液可能诱导骨微环境中TGF-β1表达增加,进而抑制破骨样细胞的生成,有效地预防绝经后骨质疏松的发生。     

蛤蚧肽对小鼠免疫功能的调节作用

目的:观察蛤蚧肽对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响.方法:动物分组设正常对照组、模型阴性对照组、左旋咪唑(25mg/kg)阳性对照组、蛤蚧肽三剂量(400,200,100 mg/kg)组,腹腔注射环磷酰胺(CTX)造成小鼠免疫功能低下模型,给药7d后,应用MTS法测定小鼠脾淋巴细胞增殖反应、自然杀伤细胞(NK)活性、腹腔...     

蛤蚧的辨析

蛤蚧是传统名贵药材,可助阳益血,由于其进补疗效好且药源较少,市场上出现大量混淆品及伪品。为给蛤蚧正品溯源,将其特征鉴别、显微、理化鉴别等加以总结,并列举了与其混淆的多种伪品,并对其毒性、药理进行了研究概述,在蛤蚧的真伪辨识和使用方面加以探讨,为临床进一步研究和应用打下良好的基础。     

浙江省余姚地区22个非综合征型耳聋家系遗传分析

目的：对宁波市余姚地区22个非综合征型耳聋（NSHI）家系GJB2、GJB3、GJB6编码区以及线粒体基因突变分析,进行临床、遗传和分子特征分析评估。方法：调查对象来自于余姚市人民医院22个NSHI家系22名先证者及患病家属33名,听力正常者254例,且均未携带GJB2、GJB3、GJB6编码区以及线粒体基因致病突变。所有受检者均采集外周血并提取DNA,并对受检者GJB2、GJB3、GJB6基因编码区以及线粒体基因进行测序,结合患者听力学检查、耳聋相关突变热点基因检测以及患者家系资料进行综合遗传分析。结果：在来源于宁波市余姚地区的22个NSHI家系的33名患者中,发现携带有GJB2基因235delC单突变家系4例,GJB2双杂合突变家系2例,线粒体基因1555位点突变3例。在GJB3、GJB6编码区并未发现有致病突变。在这22个NSHI患者家系中,有27.3%的家系检测出携带有GJB2基因病理性突变;有13.6%的家系携带有线粒体12S rRNA基因1555A＞G突变。据临床资料显示,6个携带GJB2基因病理性突变家系以及3个携带1555A＞G 突变家系的听力损失程度、发病年龄、耳聋外显率等都有差异。结论：GJB2基因以及线粒体12S rRNA基因1555A＞G突变是浙江省余姚地区NSHI患者的主要相关基因,可能也存在其他未知基因与这2个基因相互协同作用,对患者表型产生影响。     

中药材蛤蚧的X衍射Fourier谱分析

目的 旨在建立中药材鉴定新方法。方法 采用粉末X衍射Fourier谱分析方法,通过对2个蛤蚧与1个西藏蛤蚧样品进行了分析计算。结果 获得了蛤蚧的标准X衍射Fourier谱及特征标记峰值。结论 表明X衍射Fourier图谱分析方法在中药材鉴定中具有广阔的应用前景。     

蛤蚧不同部位化学成分及药理作用的比较

目的比较蛤蚧不同部位化学成分及药理作用的差异,确定蛤蚧最佳药用部位。方法用日立835-50型氨基酸自动分析仪和原子吸收分光光度计分别测定蛤蚧头体尾三部分化学成分和微量元素;通过大鼠肾虚模型观察其药理作用;通过小鼠毒性试验观察其毒副反应。结果蛤蚧各部位所含化学成分类似,含量上存在一定的差异;毒性试验证明蛤蚧无毒,包括头部在内的各部分均未见明显毒副反应;蛤蚧尾在助阳功效上强于其他部位。结论应该将蛤蚧整体作为药用部位用于临床。     

Frequency of mitochondrial 12S rRNA gene A1555G and 961 insC mutations among children with sensorineural deafness in China

Objective： To investigate the frequency of mitochondrial 12S rRNA gene A1555G and 961 insC mutations among Chinese with sensorineural deafness. Methods： Blood samples from 78 sporadic cases with sensorineural deafness were obtained and DNA was extracted from the leukocytes, then the mitochondrial DNA target fragments were amplified by polymerase chain reaction（PCR）. The 1555G mutations were detected by BsmA 1 restriction endonuclease digestion, every fragment was analyzed by sequencing; All the 961 insC mutation were detected by direct sequencing. Results： The percent age of A1555G mutation and mt961C insertion were 6.4% and 2.6% in the hearing-impaired Chinese subjects respectively. Conclusion： A1555G and 961insC mutations in mitochondrial DNA 12S rRNA gene regions may play a role in the pathogenesis of hearing loss in the sporadic cases.     

温度对蛤蚧孵化期影响的研究

目的 观察温度对蛤蚧孵化期的影响。方法 以蛤蚧养殖基地和研究基地作为试验点，在蛤蚧产卵期分别选择18个有明确产卵日期的蛤蚧卵，每天作好室内温度记录，在孵化期，作好蚧卵孵化出小蛤蚧的时间记录。结果 研究基地平均孵化期为105天，养殖基地孵化期为92天，养殖基地孵化期比研究基地孵化短。结论 养殖基地更利于蛤蚧卵的孵化。