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相似文献
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1.
目的 利用基因转染pcDNA3.1-DKK1阻断Wnt/β-catenin信号通路,观察对17β-雌二醇(17β-E 2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(ESCs)中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进异位内膜粘附、侵袭和转移中的作用.方法 体外分离培养内异症患者ESCs,利用Lipofectamine TM 2000,分别将pcDNA3.1-DKK1质粒,pcDNA3.1空载质粒转入ESCs.选用10 -10 mol/L 17β-E 2处理ESCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测转染DKK1前后ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达.结果 17β-E 2能明显促进内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白的表达,于10 -10 mol/L作用48 h最明显(P <0.05).转染pcDNA3.1-DKK1质粒组内异症患者ESCs VEGF和MMP-9 mRNA及蛋白表达较空白组和空载体组均显著下降(均 P <0.05).结论 阻断Wnt/β-catenin信号通路能明显抑制17β-E 2对内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达的促进作用.雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症患者在位子宫内膜的异位种植.  相似文献   

2.
目的:观察肺岩宁方及其拆方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其激酶功能区受体(kinase-domain insert containing receptor,KDR)mRNA与蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只。分别给予相应药物干预,均灌胃21 d,第22天处死。观察肺转移情况,取肿瘤组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中VEGF和KDR mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠的肺转移率明显低于模型组与益气组(P<0.05)。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达VEGF和KDR,但肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05),肺岩宁方组和抗癌组小鼠肿瘤组织中KDR mR-NA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调VEGF及其受体KDR mRNA和蛋白表达有关。  相似文献   

3.
目的:分离、鉴定肺癌干细胞,并探讨肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的干预作用。方法:分离、鉴定肺癌干细胞;将分离出的SP+肺癌干细胞分为对照组(空白血清+生理盐水)、单纯化疗(空白血清+DDP组)、肺岩宁方组(肺岩宁方含药血清+生理盐水)、综合治疗组(肺岩宁方含药血清+DDP),予体外药物干预后检测β-catenin蛋白表达及SP+肺癌干细胞凋亡情况。结果:分离的SP+、CD24+IGF-1R+、CD133+细胞具有肺癌干细胞特性,分离的β-catenin蛋白完整;综合治疗组诱导SP+干细胞凋亡优于其他组,各组凋亡率分别为综合治疗组79.2%、肺岩宁方组21.3%、DDP组33.7%、对照组0.3%。结论:本课题组已掌握分离、鉴定肺癌干细胞的技术,中药肺岩宁方联合化疗具有一定的诱导肺癌干细胞凋亡的作用。  相似文献   

4.
目的 研究消癥散结法对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶(ILK)的影响,探讨其在肾间质纤维化中的干预作用.方法 将消癥散结法复方总方拆为补方、散方,运用血清药理学方法分别制备总方、补方、散方、盐酸贝那普利含药血清.体外培养人肾小管上皮细胞,分为6组:空白组、TGF-β1组、贝纳普利组、总方组、补方组、散方组.将5%各含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,除空白组外均加入TGF-β1 10 μg/L,48 h后,提取细胞总蛋白及总RNA,分别采用免疫印迹法及逆转录-聚合酶链反应方法检测各组ILK蛋白及其mR-NA的表达.结果 空白组肾小管上皮细胞胞浆内ILK及其mRNA有少量表达,TGF-β1刺激后能够诱导肾小管上皮细胞ILK及其mRNA表达显著增加(与空白组相比P<0.01);与TGF-β1组相比,贝纳普利组和总方组、散方组肾小管上皮细胞ILK及其mRNA含量明显降低(P<0.01);补方组与TGF-β1组相比差异不明显(P>0.05).结论 消癥散结法复方总方含药血清能抑制细胞ILK及其mRNA的表达,干预TGF-β1/ILK信号通路可能是其防治肾间质纤维化的机制之一.  相似文献   

5.
吴校林  朱锐  李彬  刘文卫  周青  赵玉勤 《重庆医学》2017,(36):5049-5051
目的 探讨重组Wnt3a蛋白对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移和黏附的影响及相关机制.方法 原代培养大鼠VSMCs,实验分为Wnt3a组和对照组,通过Transwell实验检测VSMCs的迁移能力,细胞基质黏附实验检测VSMCs黏附细胞外基质的能力,Western blot检测VSMCs中β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸化β-catenin(Ser675)、糖原合成激酶3β(GSK-3β),磷酸化GSK-3β(Ser9)、整合素连接激酶(ILK)的蛋白表达水平.结果 Wnt3a组中VSMCs迁移的数量明显高于对照组(P<0.05).与对照组相比,Wnt3a组中VSMCs黏附于胶原Ⅰ的数量和光密度值均显著增加(P<0.05),且Wnt3a组中磷酸化β-cate-nin(Ser675)、磷酸化GSK-3β(Ser9)和ILK蛋白的表达水平均显著上调(P<0.05).结论 Wnt3a可以通过ILK调节VSMCs迁移和黏附.  相似文献   

6.
目的:探讨补肾健脾方对人肝癌细胞株SK-HEP-1裸鼠移植瘤上皮-间质转化的影响。方法:建立裸鼠肝癌移植瘤模型,并将45只裸鼠随机分为空白组、补肾健脾组、补肾组、健脾组、索拉非尼组。接种成功后除空白组外,其余各组分别予相应的药物灌胃干预,共4周。采用Western blot法检测钙黏蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9);实时荧光定量PCR法检测E-cadherin、β-连环素(β-catenin)mRNA。结果:与空白组相比,补肾健脾组E-cadherin蛋白和基因表达均明显增加(P0.01),索拉非尼组仅E-cadherin蛋白表达均明显增加(P0.01),补肾组、健脾组E-cadherin蛋白表达均明显增加(P0.05),补肾组E-cadherin mRNA基因表达明显增加(P0.05);各药物组MMP-9蛋白表达均明显减少(P0.01);补肾健脾组和索拉非尼组β-catenin mRNA表达明显增加(P0.05),而补肾组β-catenin mRNA表达增加更明显(P0.01)。结论:补肾健脾方可以调控E-cadherin、β-catenin和MMP-9的基因和蛋白的表达,从而抑制上皮-间质转化的发生,并阻止肝癌的复发和转移;补肾方与健脾方组合有协同增效作用。  相似文献   

7.
目的 探讨FoxM1对鼻咽癌细胞5-8F恶性生物学行为的影响及其可能机制.方法 将化学合成的靶向FoxM1的siRNA转染鼻咽癌细胞5-8F(FoxM1-siRNA组),并设立空白对照组、阴性对照组,采用RT-PCR及Western blot检测FoxM1表达变化.采用MTT法、FCM法、Transwell法分别检测下调FoxM1表达对细胞增殖、周期、凋亡、迁移的影响.Western blot检测下调FoxM1表达后β-catenin、C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化.结果 转染FoxM1-siRNA的5-8F细胞FoxM1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05).下调FoxM1表达可抑制5-8F细胞增殖(P<0.05),FoxM1-siRNA组的凋亡率为(22.68±0.67)%,较阴性对照组[(1 1.74±1.36)%]和空白对照组[(10.94±1.52)%]显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期.FoxM1-siRNA组细胞穿膜数(100.00±10.97)明显低于阴性对照组(246.00±6.66)和空白对照组(233.70±12.41),细胞迁移能力降低(P<0.05).下调FoxM1的表达可抑制β-catenin细胞核表达,抑制C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9总蛋白表达(P<0.001).结论 FoxM1表达下调抑制鼻咽癌细胞5-8F的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,使细胞周期阻滞于G0/G1期.其机制可能是通过抑制Wnt通路关键蛋白β-catenin细胞核表达从而抑制Wnt 通路活性实现的.  相似文献   

8.
摘要:目的 观察苗药验方对家兔骨关节炎模型软骨细胞的影响,并探讨其防治骨关节炎软骨退变的作用机制。方 法 36只家兔随机分为正常对照组、模型组、苗药熏蒸组、苗药离子导入组,每组9只。除正常对照组外,其余3组家兔 右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制造膝骨性关节炎模型。造模成功后,苗药熏蒸组与苗药离子导入组家兔分别经苗药验 方熏蒸治疗及苗药验方离子导入治疗20d,取各组家兔软骨组织行苏木精-伊红染色,并取各组家兔血清备用。取正常 家兔软骨组织培养软骨细胞,将软骨细胞也分为4组:正常对照组、模型组、苗药薰蒸组、苗药离子导入组。除正常对照 组外,其余3组软骨细胞用10μg/L白细胞介素-1β(IL-1β)处理24h制备骨关节炎软骨细胞模型,造模期间分别用相应 组家兔血清对软骨细胞进行体外干预,酶联免疫吸附法(ELISA)检测软骨细胞上清液中β-连环蛋白(β-catenin)、肿瘤坏 死因子-α(TNF-α)的含量,免疫印迹(Westernblot)法检测软骨细胞中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、细胞外因子-16(Wnt-16)、β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反 应(qPCR)检测软骨细胞中 BMP-2、MMP-3、MMP-13、Wnt-16、β-cateninmRNA 表达水平。结果 与模型组比较,苗药 熏蒸组、苗药离子导入组家兔关节软骨表面纤维化及其软骨细胞结构破坏均得到不同程度改善。与模型组比较,苗药薰 蒸组软骨细胞上清液 TNF-α、β-catenin的含量显著减少(均 P<0.05),软骨细胞 BMP-2、MMP-3、β-catenin蛋白表达以 及 BMP-2、Wnt-16mRNA 表达水平显著下调(均P<0.05);与模型组比较,苗药离子导入组软骨细胞上清液中 TNF-α、 β-catenin的含量显著 减 少 (均 P<0.05),软 骨 细 胞 BMP-2、MMP-3、MMP-13、β-catenin 蛋 白 表 达 水 平 以 及 BMP-2、 MMP-3、Wnt-16mRNA 表达水平显著下调(均 P<0.05)。结论 苗药验方薰蒸疗法及离子导入疗法,可能通过调节 Wnt/β-catenin信号通路减轻骨性关节炎软骨细胞的损伤。  相似文献   

9.
目的 探讨低氧应激对人肝癌细胞(HepG-2细胞)甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响.方法 低氧(5% O2、5% CO2、90% N2)和常氧培养HepG-2细胞.逆转录-多聚酶链式反应技术测定HepG-2细胞AFP、VEGF、TIMP-1、MMP-9 mRNA的表达.酶联免疫吸附法测定HepG-2细胞培养上清VEGF、TIMP-1、MMP-9蛋白含量,放射免疫测定法测定HepG-2细胞培养上清AFP蛋白含量.结果 低氧组AFP、VEGF、MMP-9mRNA和蛋白表达量显著高于常氧组;TIMP-1 mRNA和蛋白表达量显著低于常氧组(P<0.01).结论 低氧应激上调人HepG-2细胞AFP、VEGF、MMP-9基因表达,下调TIMP -1基因表达.  相似文献   

10.
目的 探究Wnt信号通路及整合素信号通路在大肠侧向发育型肿瘤(LST)中的表达及与其内镜形态学之间的关系,以期对LST特殊生长方式的发生机制有一定的认识.方法 随机选取中南大学湘雅二医院2010年1月1日~2015年6月10日期间确诊的LST 52例,按内镜形态学分,结节混合型37例,颗粒均一型6例,扁平隆起型5例,假凹陷型4例;应用免疫组织化学方法测定Wnt信号通路中的β-catenin、磷酸化GSK-3β,及整合素信号通路中的Paxillin、ILK在此52例LST及对照组15例突起性腺瘤(PA)中的表达;应用统计学方法分析β-catenin、磷酸化GSK-3β、Paxillin、ILK在LST中的表达与其内镜形态学之间的关系.结果 β-catenin在LST中的表达较PA中的表达升高(P<0.05);β-catenin、磷酸化GSK-3β、Paxillin、ILK在LST的假凹陷型中的表达较PA中的表达均升高(P<0.05);β-catenin、磷酸化GSK-3β、ILK,在LST中的表达存在一定的相关性(P<0.05),在PA中的表达不具有相关性(P>0.05).结论 LST的假凹陷型,可能具有不同于其他内镜分型的特殊发生机制;LST中,ILK对Wnt信号通路的表达上调可能发挥一定的作用.  相似文献   

11.
目的:探讨痔血宁合剂对湿热下注证痔病患者痔组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及其mRNA表达的影响。方法:60例湿热下注证痔病患者随机分为痔血宁组和对照组,每组30例。痔血宁组患者在门诊先服用痔血宁合剂,1周为1个疗程,1个疗程后予以手术治疗;对照组患者不服药直接予以手术治疗。分别采用免疫组化法和免疫荧光定量法检测两组患者的痔组织中MMP-9、VEGF蛋白及其mRNA的表达。结果:与对照组相比,痔血宁组患者痔组织中MMP-9、VEGF蛋白及mRNA的表达均明显降低(P〈0.01)。结论:痔血宁合剂改善痔病患者临床症状的机制可能与其降低痔组织中MMP-9、VEGF蛋白含量和表达有关。  相似文献   

12.
目的:观察肺岩宁(Feiyanning,FYN)方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中趋化因子CXCL12及其受体(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)mRNA及蛋白表达的影响。 方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、化疗组、肺岩宁组和综合组(肺岩宁加化疗组)。给予相应干预21d后观察肺转移情况,采用逆转录聚合酶链反应法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中CXCL12和CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。 结果:肺岩宁组与综合组小鼠的肺转移率低于模型组。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达CXCL12和CXCR4,肺岩宁组与综合组小鼠肺癌中CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组与化疗组(P〈0.05),而4组小鼠Lewis肺癌组织中CXCL12 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义(P〉0.05). 结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调趋化因子受体CXCR4的表达,影响CXCL12-CXCR4生物轴的作用有关。  相似文献   

13.
目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对白介素1β(IL-1β)诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法血管平滑肌细胞(VSMCs)培养及传代后,分为对照组、IL-1β组、DHA组、IL-1β和DHA处理组四组,其中对照组细胞加入50μL磷酸盐缓冲液(PBS);IL-1β组细胞加入10 ng/mL IL-1β;DHA组细胞加入80μmol/L DHA;IL-1β和DHA处理组加入10 ng/mL IL-1β和80μmol/L DHA,培养48 h后,噻唑蓝(MTT)法和Transwell法检测VSMCs的增殖和迁移情况;qRT-PCR和Western blotting技术检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1、TIMP-2和Notch3的表达情况。结果 VSMCs的增殖率和迁移能力经IL-1β处理后显著增高,而IL-1β和DHA处理组显著低于IL-1β处理组(F=25.537,P=0.003);MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达量经IL-1β处理后显著增高,而经IL-1β和DHA共处理后显著低于IL-1β组(MMP-2:F=34.286,P=0.000;TIMP-2:F=21.034,P=0.009;MMP-9:F=31.732,P=0.000;TIMP-1:F=18.213,P=0.021);IL-1β组细胞Notch3表达量显著降低,IL-1β和DHA处理组中Notch3的表达水平则显著高于IL-1β处理组(F=39.235,P=0.000)。结论 DHA可通过Notch信号通路抑制VSMCs的增殖和迁移。  相似文献   

14.
目的:探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的人肺癌细胞系A549诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2, COX-2)表达的影响。 方法:制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,实时聚合酶链反应法及蛋白质免疫印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的iNOS及COX-2表达的影响;二氨基乙酰乙酸荧光素检测NO产物;人iNOS重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24 h后,肺岩宁方含药血清治疗24 h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核iNOS转录活性的影响。 结果:与对照血清比较,TNF-α明显提高iNOS和COX-2的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,显著抑制二者的表达(P<0.01, P〈0.01);肺岩宁方含药血清显著降低了A549细胞经iNOS重组质粒转染后的转录活性(P<0.01, P〈0.01)及NO产物的产生。 结论:肺岩宁方含药血清抑制肺癌细胞的部分机制可能是抑制iNOS和COX-2基因的活性。  相似文献   

15.
目的:探讨缺氧诱导因子-1α( HIF-1α)、血管内皮生长因子( VEGF )及基质蛋白酶-9( MMP-9)在结肠癌患者的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测56例结肠癌组织及40例癌旁组织HIF-1α、VEGF和MMP-9,比较两组阳性率的差别及HIF-1α、VEGF和MMP-9与结肠癌临床病理特征之间有关系。结果:结肠癌组织HIF-1α、VEGF和MMP-9表达阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05);HIF-1α和MMP-9与淋巴转移、组织学分化及Duke分期显著相关(P<0.05);VEGF与淋巴转移、Duke分期相关(P<0.05);HIF-1α、VEGF和MMP-9与年龄、性别及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论:HIF-1α、VEGF和MMP-9与结肠癌的发生、发展关系密切,三者参与了结肠癌的淋巴道转移。  相似文献   

16.
目的:观察冠心舒通胶囊对慢性心力衰竭大鼠心肌组织基质金属蛋白酶(MMP-9)的影响。方法:采用冠状动脉结扎法结合力竭式游泳、减食等方法复制大鼠慢性心力衰竭模型。将大鼠分为模型组、假手术组、西药组、益气活血组、冠心舒通组;采用SABC免疫组化法检测各组大鼠心肌组织MMP-9的变化情况。结果:与模型组比较,假手术组、西药组、益气活血组、冠心舒通组大鼠心肌组织MMP-9 mRNA、蛋白表达均明显降低(P〈0.05);与假手术组比较,西药组、益气活血组、冠心舒通组大鼠心肌组织MMP-9mRNA、蛋白表达均明显升高(P〈0.05);且3个治疗组之间无显著差异(P〉0.05)。结论:冠心舒通胶囊可通过抑制心肌组织MMP-9表达以治疗慢性心力衰竭。  相似文献   

17.
目的:探讨类表皮生长因子域7(EGFL7)基因沉默对胃癌裸鼠模型瘤内血管生成的影响。方法:构建EGFL7短发夹状RNA表达质粒并转染SGC-7901细胞(pshEGFL7组),以空质粒转染为对照组,观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积;免疫组织化学法检测抗-CD34、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板反应蛋白(TSP1)表达,RT-PCR检测MMP-2和TIMP2表达。结果:pshEGFL7组种植瘤体积为(1.86±0.65)cm3,微血管密度(MVD)为20.84±6.38,分级为1~2级;对照组种植瘤体积为(4.86±1.15)cm3,MVD为39.48±9.01,分级为3~4级;两组种植瘤体积、MVD和分级的差异有统计学意义,P值均〈0.05;EGFL7组TSP1蛋白阳性表达,而VEGF蛋白为弱阳性或阴性表达,MMP-2mRNA表达下调,而TIMP2mRNA表达上调,与对照组比较差异有统计学意义,P值均〈0.01。结论:EGFL7基因沉默可降低胃癌种植瘤血管生成,与调节MMP-2/TIMP2表达,影响VEGF/TSP1平衡有关。  相似文献   

18.
目的:研究川崎病(KD)患儿血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及一氧化氮(NO)的表达水平,探讨其在KD冠脉损害中的作用。方法:用固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组患儿血清中MMP-3、TIMP-1的水平,用硝酸还原法检测各组患儿血清中NO的水平。结果:川崎病CAL组血清MMP-3、MMP-3/TIMP-1与NCAL组相比明显升高(P〈0.05);血清TIMP-1水平较NCAL组明显降低(P〈0.01);KD急性期和恢复期MMP-3、TIMP-1、MMP-3/TIMP-1水平与正常对照组相比较均明显升高(均P〈0.01)。川崎病CAL组NO水平明显高于NCAL组(P〈0.05);血清MMP-3与NO之间呈显著正相关(r=0.898,P〈0.01);血清中TIMP-1与NO之间呈显著负相关(r=-0.772,P〈0.01)。结论:川崎病CAL组血清MMP-3和NCAL组相比明显升高,提示MMP-3可以作为KD伴发冠脉损害的血生化指标之一。KD急性期MMP-3、TIMP-1、MMP-3/TIMP-1水平明显高于恢复期和对照组,提示MMP-3、TIMP-1、MMP-3/TIMP-1可作为早期诊断川崎病的一个客观生化指标。NO过度表达参与了KD急性期冠脉损害的发生发展,可以将循环中NO水平作为判断KD冠脉损害的一个有效指标。  相似文献   

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