黄芩苷对巨噬细胞产生抵抗素和白细胞介素-1β的影响

【目的】观察黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞产生抵抗素和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。【方法】体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,取生长良好的细胞进行接种。模型组加入LPS(终浓度为0.1μg/mL或5μg/mL)或重组抵抗素(终浓度为100 ng/mL);中药组加入不同浓度黄芩苷(终浓度为50、100μmol/L),预处理1 h,后加入LPS或抵抗素。24 h后吸取上清,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组IL-1β和抵抗素浓度,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测抵抗素mRNA表达。【结果】与正常组比较,LPS组促进了巨噬细胞分泌抵抗素,抵抗素mRNA表达上调,LPS和重组抵抗素均促进了巨噬细胞产生IL-1β(P<0.05或P<0.01)。黄芩苷高、低剂量组均可显著抑制IL-1β和抵抗素的浓度,且抑制抵抗素mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芩苷可明显降低促炎因子产生的炎症反应,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

黄芩苷对溃疡性结肠炎患者细胞因子表达的影响

目的探讨活动期溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）患者外周血中多种细胞因子的变化以及不同浓度的黄芩苷的干预作用。方法应用实时定量PCR法（Q－PCR）检测UC患者外周血单个核细胞IL4R、 IL6R、 IL23R、 RORC的表达,采用酶联免疫吸附法（ELISA ）检测血清干扰素－γ（IFN－γ）、白细胞介素－4（IL－4）、白细胞介素－5（IL－5）、白细胞介素－6（IL－6）、白细胞介素－10（IL－10）、转化生长因子－β1（TGF－β1）水平及体外黄芩苷干预下上述指标的变化情况。结果通过Q－PCR检测发现UC患者外周血IL4R、 IL6R、 IL23R、 RORC基因表达较肠易激综合征（IBS－D）组和健康对照组均有不同程度的增高,在体外不同浓度的黄芩苷的干预下,均有不同程度的降低,以20μmol／L和40μmol／L对上述指标的降低作用更明显。 ELISA检测血清中细胞因子, UC组IFN－γ、 IL－5、 IL－6与IBS－D组和健康对照组比较均有不同程度的升高,而IL－4、 IL－10及TGF－β较IBS－D组和健康对照组稍降低;20μmol／L和40μmol／L的黄芩苷可引起IFN－γ、IL－5、 IL－6明显降低, IL－4、 IL－10明显升高。结论较高浓度的黄芩苷能够明显抑制RORC、 IL23R的表达,使IFN－γ、IL－5、 IL－6等细胞因子的水平降低和IL－4、 IL－10及TGF－β1水平升高,说明黄芩苷可以调节免疫平衡而缓解溃疡性结肠的炎症反应。     

黄芩苷对小鼠巨噬细胞CD36表达及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

[目的]观察黄芩苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞CD36表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响.[方法]分别用LPS(终浓度0.1μg/mL)或LPS加黄芩苷(终浓度分别为50、100 μmol/L)处理生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用实时荧光定量PCR法和流式细胞术检测黄芩苷对巨噬细胞CD36分子表达的影响,然后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α含量变化.[结果]LPS刺激可以诱导巨噬细胞CD36表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);不同浓度黄芩苷预处理组可显著抑制LPS诱导的CD36基因转录和蛋白表达,与LPS组比较差异有统计学意义(P＜0.01);黄芩苷还可显著减少巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌(P＜0.05).[结论]黄芩苷可通过抑制CD36表达,下调LPS诱导的巨噬细胞炎症因子TNF-α的生成从而发挥抗炎作用.     

IL-5上调体外培养的人嗜酸性粒细胞TGF-β1的表达

目的研究白细胞介素-5（IL-5）对人嗜酸性粒细胞（Eos）中转化生长因子-β1（TGF—β1）表达的调控作用。方法采用改良的密度梯度离心法分离并体外培养人外周血Eos，实验组加入相同浓度的白细胞介素-4（IL-4）、IL-5和干扰素γ（IFNγ）以及不同浓度的IL-5共同培养，ELISA和RT—PCR法检测细胞培养上清液TGF—β1蛋白和mRNA的表达。结果与对照组相比，浓度均为10^-9mol／L的IL-4、IL-5在蛋白水平和转录水平对TGF-β1的表达均有上调作用，而IFNγ则表现为抑制；10^-11，10^-9、10^-7mol／L IL-5均能显著增强体外培养的Eos中TGF—β1蛋白的表达。结论Th2型细胞因子IL-5可以上调人嗜酸性粒细胞中TGF—β1的表达。     

黄芩苷对脂多糖诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用。 方法 利用LPS建立人单核细胞THP-1的炎症模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitatFive polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相对表达,确定最优的LPS刺激浓度。乳酸脱氢酶检测试剂盒检测黄芩苷的细胞毒性,优选其最佳使用浓度范围。对LPS诱导的人单核细胞THP-1炎症模型予以不同浓度的黄芩苷预处理,利用RT-qPCR法检测黄芩苷对LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高的影响。 结果 与对照组相比,1 μg/mL的LPS处理人单核细胞THP-1 24 h后均可显著引起IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高(P<0.05),黄芩苷在浓度为10、30、100 μmol/L时处理人单核细胞THP-1 24 h和48 h,无明显细胞毒性。30 μmol/L和100 μmol/L的黄芩苷可降低LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高。 结论 黄芩苷可显著抑制LPS诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应。     

黄芩苷对大鼠结肠成纤维细胞增殖及TGF-β1、CTGF表达的影响

目的探究黄芩苷对大鼠结肠成纤维细胞增殖及对转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的影响。方法将大鼠结肠成纤维细胞分为不同浓度(25、50、100、200、400、800μmol/L)黄芩苷组,分别于培养24、48、72 h取样本。MTT法检测各组大鼠结肠成纤维细胞增值抑制率;大鼠结肠成纤维细胞分为空白组、阳性对照组和黄芩苷高、中、低浓度组,加药培养48 h取样。ELISA检测各组细胞上清液中TGF-β1含量,Western blotting检测各组细胞中TGF-β1和CTGF的表达水平。结果 MTT检测结果显示,与25μmol/L黄芩苷组比较,其他5组大鼠结肠成纤维细胞增殖抑制率显著升高(P 0.01),并呈浓度和时间依赖性;ELISA检测结果显示,与空白组比较,黄芩苷各组细胞上清液中TGF-β1含量显著降低(P 0.01);Western blotting检测结果显示,与空白组比较,黄芩苷各浓度组细胞中TGF-β1和CTGF的表达水平明显降低(P 0.01)。结论黄芩苷能抑制大鼠结肠成纤维细胞增殖,并显著降低细胞中TGF-β1和CTGF的表达,其作用机制可能与转化生长因子β信号通路有关。     

hEGF、TGFβ_2对兔角膜内皮细胞损伤的作用及相关蛋白p27~(Kip1)和Cdk4的表达

目的:观察人表皮生长因子(hEGF)、转化生长因子2β(TGFβ2)对家兔角膜内皮细胞损伤的作用及相关蛋白p27Kip1和Cdk4的表达。方法:体外培养家兔角膜内皮细胞传一代融合后,定量损伤直径3.5 mm范围内的细胞,培养液中分别加入不同浓度的hEGF和(或)浓度为10 ng/ml的TGF2β,对照组不加任何药物。损伤后第1、3、5,7天倒置显微镜下照相并用计算机测量未愈合面积。应用免疫荧光染色法,检测损伤修复不同阶段p27Kip1和Cdk4的含量。结果:一定质量浓度的hEGF可加快体外培养的家兔角膜内皮细胞的损伤愈合并上调Cdk4的表达,且具有剂量依存性,以10~40 ng/ml为最适宜。外源性TGF2β抑制角膜内皮细胞损伤修复。hEGF孵育损伤模型24 h后,TGF2β对此无抑制作用。TGFβ2作用损伤模型24 h后,可抑制hEGF的促修复作用。结论:一定质量浓度的hEGF能促进体外培养的家兔角膜内皮细胞的损伤修复并上调Cdk4的表达。外源性TGFβ2可抑制家兔角膜内皮细胞的损伤修复并上调p27Kip1的表达。     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

黄芩苷在原代心肌细胞氧化损伤中的保护作用及机制研究

目的通过体外实验研究黄芩苷在心肌细胞氧化损伤中的保护作用及其机制。方法取SD乳鼠心肌细胞进行原代培养,按各实验需要分组并干预。采用MTT法检测不同剂量黄芩苷对心肌氧化损伤细胞模型中细胞活力的影响,采用Western Blot法检测不同剂量黄芩苷对心肌氧化损伤细胞模型DNA双链断裂损伤指标γ-H2AX和核内β-catenin表达的影响,并用Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl干预,进一步探讨黄芩苷在对心肌氧化损伤细胞模型的保护机制。结果心肌氧化损伤细胞模型的细胞活力显著下降,γ-H2AX和核内β-catenin的蛋白表达明显上调;低剂量黄芩苷对心肌氧化损伤细胞模型的细胞活力和γ-H2AX、核内β-catenin的表达无明显影响;而中、高剂量黄芩苷能够明显阻止受损心肌细胞活力下降,并下调心肌氧化损伤细胞模型的γ-H2AX和核内β-catenin的表达;且高剂量黄芩苷能够下调Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl干预下的原代心肌细胞γ-H2AX和核内β-catenin的表达水平。结论黄芩苷能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,阻止心肌细胞氧化损伤。     

黄芩苷体外抑制氟尿嘧啶耐药肝癌细胞的生长及作用机制

目的:观察黄芩苷体外对氟尿嘧啶(Fu)耐药肝癌细胞株生长的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养人肝癌细胞BEL-7402及其耐药细胞BEL-7402/5-Fu,MTT法观察黄芩苷作用后细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞内罗丹明123荧光强度;RT-PCR检测细胞多重耐药MDR1基因表达;Western印迹法检测细胞P-gP蛋白表达;应用Matrigel模型测定细胞黏附率;荧光免疫技术测定细胞β1-整合素(β1-integrin)和上皮钙黏附素(E-CD)蛋白表达.结果:黄芩苷明显抑制肝癌细胞BEL-7402及其耐药细胞BEL-7402/5-Fu的增殖,IC50分别为34.2、36.6 mg/L.5、10 mg/L黄芩苷能部分逆转耐药细胞对Fu的耐药,逆转倍数分别为28.6、46.7;5、10 mg/L黄芩苷增强BEL-7402对Fu敏感性,增敏倍数分别为1.4、2.1.5、10 mg/L黄芩苷增加耐药细胞内药物积聚,降低MDR1基因及P-gP蛋白表达,抑制耐药细胞黏附率,降低耐药细胞β1-整合素表达,促进E-CD蛋白表达;且10 mg/L黄芩苷效果优于5 mg/L(P均＜0.05).结论:黄芩苷体外能抑制肝癌细胞生长及降低细胞黏附性,并能部分恢复肝癌耐药细胞对Fu的敏感性,这可能与其增加细胞内药物浓度、抑制MDR1基因表达有关.