H5N1型高致病性禽流感研究进展及其对人类的威胁

H5N1高致病性禽流感是人、禽和其它哺乳动物共患的一种新发传染病,近年禽间疫情波及范围越来越大,人间疫情呈地方性流行趋势.发病人群年龄偏低、病死率高.禽流感病毒有可能变异成一种即有高致病性又有人流感病毒高传播性特点的新型流感病毒,构成越来越严峻的大流行威胁.本文着重就流行病学、病原学及防制对策方面的相关进展进行综述.     

雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型的建立

目的建立雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型。方法A／Anhui／1／2013（H7N9）禽流感病毒经鼻吸入感染雪貂,观察动物临床症状和体征,上呼吸道排毒情况及组织病理学变化。结果雪貂感染后出现体重下降、活动减少以及打喷嚏的临床表现,上呼吸道、心脏、肝脏及嗅球可检测到活病毒,上呼吸道排毒的峰值出现在感染后的第3—5天。血清抗体滴度最高达到1280,外周血淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加。组织病理学显示动物肺脏呈局灶性间质性肺炎及肺泡炎改变,CT显示肺内片状阴影。结论成功建立雪貂感染H7N9禽流感病毒的动物模型,模型的建立为H7N9禽流感发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础。     

一例疑似禽流感死亡的流行病学调查报告

<正>2003年1月25日,港藉8岁小女孩高美灵,随其母姐兄一家4人回福州市平潭县老家过春节。1月27日下午6点许,出现发热(39℃)、畏寒、头痛等症状,2月4日上午11点5分死亡。其父高仁杰,36岁,于2月6日发病,7日回香港,9日住院,17日死亡。平潭县医院对高美灵死亡诊断为疑似禽流感。香港卫生检测机构从高仁杰和儿子高志强两份     

H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究

目的用一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠,观察其对小鼠的致病性及在小鼠间的传染性。方法将小鼠分为正常组、攻毒组、同居组,攻毒组乙醚麻醉后滴鼻感染AIV,观察各组食欲、反应、呼吸及有无皱毛、弓背、死亡等,测量体温及体重;检测相应抗体水平、小鼠排毒情况及小鼠各器官带毒情况,并观察病理组织学变化。结果攻毒组出现食欲反应下降,呼吸急促,皱毛,死亡;体重、体温下降。同居组未出现感染。攻毒组攻毒后12 h至第9天可从肺组织分离出病毒,第10天始出现相应抗体;感染小鼠的肺、心肌、肝、脾、肾和脑组织都有不同程度的病理改变。结论 AIV对小鼠具有致病性,AIV能跨越种系障碍直接感染哺乳动物, 但在小鼠间无传染性。     

人群感染禽流感病毒(H5N1)研究进展

禽流感病毒一直以来认为只在禽类中发病和流行，由于存在种属屏障和受体特异性，其感染人类并导致发病、死亡少见报道。近年来，全球报道了多起禽流感病毒H5N1、H7N7、H7N3和H9N2亚型感染人并导致发病、死亡。2003年起，禽间（包括家禽、野禽和迁徙的候鸟）的高致病性禽流感H5N1疫情从亚洲。“逐渐向欧洲和非洲大陆扩散”。     

禽流感H5N1型病毒对沙鼠致病性的初步研究

目的 观察禽流感H5N1型病毒对沙鼠的致病性。方法 在生物安全三级实验室，将禽流感H5N1型病毒通过滴鼻接种乙醚麻醉后沙鼠，观察14d，记录沙鼠的体温、体重、临床体征、病理学变化、病毒分离情况及抗体变化。结果 沙鼠感染后发病主要表现在第2～6天，攻毒组沙鼠出现反应迟钝、皱毛、弓背、食欲下降、呼吸急促、打堆等体征，攻毒组沙鼠的体温降低和体重减轻，死亡率为44％，在攻毒后8d检出抗体，主要病理学变化表现为肺出现严重淤血、水肿、出血，镜下可见肺间质充血，血管周围炎性细胞浸润，肝和胸腺淤血，肾出血，肾小管变形。结论 禽流感H5N1型病毒对沙鼠有较强致病性。     

H5N1型禽流感病毒感染非人灵长类动物的观察

目的观察H5N1型禽流感病毒对中国非人灵长类动物的易感性并建立动物模型。方法将病毒通过滴鼻接种实验猴,观察感染后动物的临床症状,采血、咽拭子及各器官组织进行血清学、病原学及病理学检查,记录抗体变化、病毒分离情况及病理学改变。结果感染后动物表现轻度食欲下降、一过性体温升高及外周血白细胞减少,肺组织病毒分离及RT-PCR阳性,病理检查感染急性期动物肺组织表现为间质性肺炎,肺泡间隔增宽,充血出血明显,肺泡受压变形,间质及肺泡内有大量炎细胞浸润,符合病毒性肺炎的改变,感染后14 d动物血清IgG抗体水平较感染前升高4倍。结论H5N1病毒可感染非人灵长类动物,可以作为感染模型进行H5N1病毒的发病机制、疫苗评价、药物筛选等研究。     

禽流感病毒研究进展：2007年与2005年病毒基因相同

美国疫病预防控制中心（CDC）主任Nguyen Tran Hien博士在一次禽流感预防控制会议上公布，经过对禽流感病毒基因（标本均来自越南）的研究发现，今年流行的H5N1型病毒基因组与2004年的病毒不同，而与2005年的相同：并且本研究结果与越南进行的研究结果相同；     

日又发现高致病性禽流感病毒

据日本媒体23日报道，在过去1个月里，日本青森县十和田湖附近发现2只天鹅死亡，检测表明它们均感染了H5N1型高致病性禽流感病毒。     

禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的病理变化

【目的】通过鼻腔将H5N1禽流感病毒接种ICR小鼠，观察其主要器官组织的病理变化。【方法】麻醉ICR小鼠后将100恤LH5N1禽流感病毒原液用移液枪滴入接毒组小鼠鼻腔，接毒后14d内每隔24h取材一次．采用福尔马林固定，石蜡包埋、切片，HE染色。【结果】禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠后表现出明显的病理改变。ICR小鼠的肺部病变最严重，表现为间质性肺炎，肺间质充血、水肿和淋巴细胞浸润，血管周围淋巴细胞浸润，毛细血管扩张，上皮细胞变性、坏死、脱落，并有充血和单核细胞浸润，肺泡壁明显增宽，血管充血，有的肺泡溶合，呈气肿状。肝、肾、脑等其它脏器也出现病变。【结论】禽流感ICR小鼠模型能复制出人类禽流感疾病的许多病理特征，禽流感H5NI病毒感染ICR小鼠的肺病理类似于人禽流感严重病例的肺病理。     

国内H5N1禽流感文献计量分析

以中国学术期刊网络出版总库和万方医学网为统计源,对国内H5N1禽流感期刊文献从年度发文量、期刊分布、核心作者、单位分布、地区分布几方面进行统计分析,以了解我国H5N1禽流感文献分布特点和研究现状,为相关学者进行研究提供参考信息。     

H5N1 Avian Influenza Pre-pandemic Vaccine Strains in China

Objective To prepare the 4 candidate vaccine strains of H5N1 avian influenza virus isolated in China Methods Recombinant viruses were rescued using reverse genetics. Neuraminidase （NA） and hemagglutinin （HA） segments of the A/Xinjiang/1/2006, A/Guangxi/1/2009, A/Hubei/1/2010, and A/Guangdong/1/2011 viruses were amplified by RT-PCR. Multibasic amino acid cleavage site of HA was removed and ligated into the pCIpoll vector for virus rescue. The recombinant viruses were evaluated by trypsin dependent assays. Their embnjonate survival and antigenicity were compared with those of the respective wild-type viruses. Results The 4 recombinant viruses showed similar antigenicity compared with wild-type viruses, chicken embryo survival and trypsin-dependent characteristics. Conclusion The 4 recombinant viruses rescued using reverse genetics meet the criteria for classification of low pathogenic avian influenza strains, thus supporting the use of them for the development of seeds and production of pre-pandemic vaccines.     

手足口病临床表现及防治

手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是肠道病毒引起的常见传染病之一.可引发手足121病的肠道病毒有20多种,柯萨奇病毒(coxasckie virus)A16型(CoxA16)是最常见的一种.临床表现以痛性口腔溃疡和手、足无痛性皮疹为特征.虽然手足口病早在50年前就已被发现,但在临床治疗上,目前使用的抗生素效果并不理想,而且没有疫苗可以帮助控制疫情和预防感染.本文对手足口病的起源,传播,预防及治疗.以及流行情况进行了综述.     

H5N1亚型禽流感病毒ns1基因修饰

目的：对HSN1亚型禽流感病毒株(A/Qa／ST/852/01)的ns1基因进行修饰并构建ns1基因的真核表达载体。方法：用RT-PCR方法扩增A/Qa／ST／852／01的ns1基因。之后以扩增产物为模板，采用多重PCR技术对ns1基因进行修饰，将缺失的15个核苷酸片段插入ns1基因中，并将其克隆到真核表达载体，构建pcDNA3．1/ns1重组质粒。结果：RT-PCR产物测序显示，A/Qa／ST／852／01 ns1基因开放阅读框全长678bp，编码225个氨基酸。构建的重组质粒经酶切鉴定和序列测定与预期相一致。结论：成功将缺失的15个核苷酸片段引入A/Qa／ST／852／01的ns1基因中，重组质粒的构建为NS1蛋白功能研究奠定了基础。     

禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的病理变化

 【目的】 通过鼻腔将H5N1禽流感病毒接种ICR小鼠,观察其主要器官组织的病理变化?【方法】 麻醉ICR小鼠后将100 μL H5N1禽流感病毒原液用移液枪滴入接毒组小鼠鼻腔,接毒后14 d内每隔24 h取材一次,采用福尔马林固定,石蜡包埋?切片,HE染色?【结果】 禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠后表现出明显的病理改变?ICR小鼠的肺部病变最严重,表现为间质性肺炎,肺间质充血?水肿和淋巴细胞浸润,血管周围淋巴细胞浸润,毛细血管扩张,上皮细胞变性?坏死?脱落,并有充血和单核细胞浸润,肺泡壁明显增宽,血管充血,有的肺泡溶合,呈气肿状?肝?肾?脑等其它脏器也出现病变?【结论】 禽流感ICR小鼠模型能复制出人类禽流感疾病的许多病理特征,禽流感H5N1病毒感染ICR小鼠的肺病理类似于人禽流感严重病例的肺病理?     

抗禽流感病毒H5N1亚型单克隆抗体制备初报

为建立诱发动脉粥样硬化斑块破裂的动物模型，选用雄性新西兰兔，给予高脂饮食2周，利用球囊导管去除家兔腹主动脉内皮，继以高脂饮食至8周，正常饮食至16周即实验末，腹腔内注射鲁塞尔氏蝰蛇毒和静脉注射组胺诱发斑块破裂和血栓形成，利用图像分析法计算血栓形成面积，光镜和电镜观察腹主动脉或斑块的形态学表现，酶法测定兔血脂和血浆脂蛋白水平以及腹主动脉壁中胆固醇含量。结果表明，模型组家兔腹主动脉有大量血栓形成，显微镜下可见斑块肩部区有明显破溃和炎性细胞浸润，斑块内富含巨噬细胞和脂滴，在实验2、8和16周时的血清TC、LDL-C水平均显著升高，腹主动脉壁中胆固醇含量也远高于正常组。结果显示，这些改变符合不稳定斑块的特征，提示该模型可用于斑块破裂发生机制和筛选稳定斑块药物的研究。     

H5N1人禽流感病毒HA基因的克隆和表达

目的对人禽流感病毒A/China/GD01/06（H5N1）HA基因进行克隆和表达,为进一步研究GD01/06HA的致病与免疫机制提供有效制剂。方法将H5N1全长HA基因克隆入原核表达载体pET-32a（＋）,采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,并对表达的重组蛋白进行鉴定。结果经检验重组质粒p32-HA构建成功,表达蛋白分子量介于66.2~94.0kd。经鉴定所表达的特异性条带为HA蛋白片段。结论HA基因在大肠杆菌中表达并获得特异性重组蛋白,为其生物学、免疫学功能的研究提供了基础。