芹菜素抑制IL-1和脂多糖诱导软骨细胞产生NO

目的：研究植物酮芹菜素对ＩＬ－１,脂多糖诱导软骨细胞产生一氧化氮的抑制作用。方法：ＩＬ－１,ＬＰＳ体外衣导兔软骨细胞产生ＮＯ。以一氧化氮合酶抑制剂,Ｎ－硝基－Ｌ－精氨酸做对照,研究芹菜素对产生ＮＯ的抑制作用。结果和结论;芹菜素剂量依赖性地抑制ＩＬ－１或ＬＰＳ诱导的ＮＯ产生,其抑制作用强于Ｎ－硝基－Ｌ－精氨酸。     

一氧化氮抑制单核—内皮细胞粘附的机制

目的：研究一氧化氮（ＮＯ）抑制单核－内皮细胞粘附的机制。方法：以普钠作为ＮＯ的供体，用细胞粘附实验，流式细胞仪荧光强度测定，细胞ＥＬＩＳＡ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等方法分别从细胞，蛋白表达，基因表达方面研究ＮＯ对内皮细胞粘附分子（ｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ，ＶＣＡＭ－１）表达的影响，结果：ＮＯ抑制ＩＬ－１α诱导的单核－内皮细胞粘附，抑制ＩＬ－１α诱发的ＶＣＡＭ－１的     

细胞因子和泌乳素对体外培养的人球后成纤维细胞表面ICAM-1表达的影响

目的：通过研究细胞因子和泌乳素（ＰＲＬ）对球后成纤维细胞（ＲＦｓ）表面细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响,进一步了解甲状腺相关眼病（ＴＡＯ）的发病机理,以探索新的防治途径。方法：将体外培养的正常人ＲＦｓ与ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α和ＰＲＬ孵育７２ｈ,利用直接免疫荧光技术和流式细胞仪检测其表面ＩＣＡＭ－１表达的情况。结果：正常人ＲＦｓ中只有极少数细胞自发并较弱地表达ＩＣＡＭ－１,基础状态下的阳性百分数为（３．４９±１．９９）,平均荧光强度为（４４．８４±２０．５９）;而ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α能以剂量依赖方式显著增强ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）。ＰＲＬ不仅可以直接刺激ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）,其剂量相关曲线呈双相型,还能拮抗或协同ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）、ＩＦＮ－α（１０００ｕ／ｍｌ）或ＩＬ－４（２．５ｎｇ／ｍｌ）的诱导作用。结论：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦ－α和ＰＲＬ对正常人ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达有明显的调节作用,它们可能是启动或加重ＴＡＯ自身免疫反应的重要因素。     

转化生长因子—β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用１４天鸡胚股骨无血清培养、５－溴尿嘧啶核苷（ＢｒｄＵ）掺入标记和细胞核增殖抗原（ＰＣＮＡ）免疫染色方法，研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对骺软骨细胞增殖的作用。结果显示：ＢｒｄＵ阳性软骨细胞数目与分布都位于ＴＧＦ－β作用剂量和时间密切相关，ＴＧＦ－β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖，与ＢｒｄＵ标记相比，ＰＣＮＡ阳性细胞分布区域和数目远多于前者，根据染色情况可以将ＰＣＮＡ阳性细胞分为Ｓ期和Ｓ期细胞两种。结论：ＴＧＦ－β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动，并能诱导非增殖软骨细胞表达ＰＣＮＡ，用ＰＣＮＡ作为细胞增殖的指标是不适宜的。     

反义C—myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC—7721的生长抑制

针对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始妈ＡＵＧ及下游４个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸（ＯＤＮｓ）、并对合成的ＯＤＮｓ进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１培养体系中，对反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现（１）与正义和错配ＯＤＮｓ相比较，反义Ｃ－ｍｙｃＯＤＮ有明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的作用；（２）该生长抑制作用随ＡＳＯＤＮ剂量增加而增     

一氧化氮抑制单核-内皮细胞粘附的机制

目的：研究一氧化氮（ＮＯ）抑制单核内皮细胞粘附的机制。方法：以硝普钠作为ＮＯ的供体，用细胞粘附实验、流式细胞仪荧光强度测定、细胞ＥＬＩＳＡ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等方法分别从细胞、蛋白表达、基因表达方面研究ＮＯ对内皮细胞粘附分子（ｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ，ＶＣＡＭ１）表达的影响。结果：ＮＯ抑制ＩＬ１α诱导的单核内皮细胞粘附，抑制ＩＬ１α诱发的ＶＣＡＭ１的表达并呈时间依赖性及浓度依赖性，ＮＯ在粘附分子ＶＣＡＭ１的基因表达水平上亦呈现抑制作用。结论：ＮＯ抑制ＶＣＡＭ１的表达是其抑制单核内皮细胞粘附及抗动脉粥样硬化的机制之一。     

人硫氧还蛋白及其变异体对TF—1和NFS60细胞的凋亡抑制和？…

目的：比较ｒｈＴＲＸ与ｒｈＴＲＸδ３对细胞因子依赖株ＴＦ－１细胞、ＮＦＳ６０细胞撤除细胞因子所诱导调亡的抑制及促细胞增殖作用。方法：在大肠杆菌中克隆并表达重组ｈＴＲＸ和ｈＴＲＸδ３，纯化ｒｈＴＲＸ和ｒｈＴＲＸδ３蛋白，ＦＡＣＳ检测凋亡细胞，ＭＴＴ法检测细胞增殖。结果：在依赖ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ生长的ＴＦ－１细胞（人红白血病细胞）和依赖Ｇ－ＣＳＦ生长的ＮＦＳ６０细胞（小鼠白血病细胞）撤除细胞因子后     

烟酰胺对白细胞介素1β所致胰岛损伤的防护作用及其机制

探讨烟酰胺对胰岛的防护作用。方法采用胶原酶（Ｖ型）消化法分离新生大鼠胰岛，测定白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）和（或）烟酰胺对胰岛素分泌、亚硝酸盐的含量和３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（ＴｄＲ）掺入量的影响。结果（１）１０～５０ｍｍｏｌ／Ｌ烟酰胺本身对２４小时累积胰岛素释放和急性高浓度葡萄糖刺激的胰岛素分泌无明显影响，但可使胰岛３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加。（２）２５ｍｍｏｌ／Ｌ烟酰胺可阻断ＩＬ－１β对累积胰岛素分泌和３Ｈ－ＴｄＲ掺入的抑制作用，但对ＩＬ－１β抑制急性高浓度葡萄糖刺激的胰岛素分泌无明显效应。（３）烟酰胺可抑制ＩＬ－１β诱导的一氧化氮（ＮＯ）的产生，具有剂量依赖性。结论烟酰胺对ＩＬ－１β所致的胰岛损伤具有一定的防护作用，其机制可能与烟酰胺促进胰岛细胞增殖和抑制ＩＬ－１β诱导的ＮＯ合成有关。     

3种干扰因子对人肺癌细胞株A549体外增殖、侵袭力及ICAM-1表达的调节作用

目的：研究全反维甲酸（ＡＴＲＡ）等干扰因子对肺癌细胞株Ａ５４９侵袭、增殖及ＩＣＡＭ－１分子表达的调节作用。方法：根据细胞穿过铺有Ｍａｔｒｉｇｅｌ胶多孔膜数量检测细胞侵袭力,用改良龙胆紫吸收比色计数法检测细胞增殖,以流式细胞分析和酶联免疫吸附试验检测ＩＣＡＭ－１、ｓＩＣＡＭ－１表达水平。结果：Ａ５４９ 经ＡＴＲＡ处理后,细胞表面ＩＣＡＭ－１表达降低,体外侵袭力明显降低,体外增殖明显抑制;ＩＦＮ α不增加细胞ＩＣＡＭ－１表达,但抑制体外增殖及体外侵袭力;ＩＬ－１ 明显增强细胞表面ＩＣＡＭ－１表达及培养上清ｓＩＣＡＭ－１含量,体外侵袭力有增高趋势。结论：ＡＴＲＡ、ＩＦＮ α、ＩＬ－１ 对Ａ５４９ 细胞体外增殖及ＩＣＡＭ－１、ｓＩＣＡＭ－１表达有不同的调节作用,而对其转移潜能具有不同调变作用。     

MK-801对大鼠感染性脑水肿的保护作用及机制探讨

目的：了解ＭＫ－８０１对大鼠感染性脑水肿是否具有保护作用及可能的作用机制。方法：ＥＬＩＳＡ法与Ｇｒｉｅｓｓ法分别测大鼠感染性脑水肿模型脑组织匀浆中ＩＬ－１β,ＴＮＦα和ＮＯ含量。结果：ＭＫ－８０１预处理后能显著降低ＰＢ组大鼠的脑含水量,钠离子含量,ＩＬ－１β,ＴＮＦα及ＮＯ含量,增加钾离子含量。     

T-2毒素对软骨细胞NO合成、iNOS表达的影响

目的:探讨T-2毒素对软骨细胞一氧化氮(NO)合成、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:取胎儿软骨细胞体外培养,培养过程于培养液中加入不同浓度的T-2毒素(1~20μg/L)连续培养5d,用Griess重氮化法测定软骨细胞培养上清液中NO含量;用Western-Blot检测软骨细胞iNOS蛋白的表达;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测软骨细胞iNOS mRNA表达。结果:T-2毒素在1~20μg/L浓度范围内,能明显增加培养上清液中NO的含量,并使iNOS蛋白表达水平明显升高(P<0.05);当T-2毒素浓度达10~20μg/L时能引起iNOS mRNA表达水平提高(P<0.05),浓度越高,刺激作用越强。结论:T-2毒素使软骨细胞iNOS表达增强并使NO合成增多;T-2毒素引起的软骨细胞损伤与合成NO增多有关。     

羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶-1,3的表达

目的:探讨羧甲基壳聚糖抑制重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)刺激下的兔软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1,3(MMP-1,3)的作用机制。方法:分离、培养兔软骨细胞,用rhIL-1β刺激,同时加入不同浓度的羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)或L-精氨酸甲酯(L-NAME),培养24h后,检测上清液中的一氧化氮含量和软骨细胞内的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活力。提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链方法(RT-PCR)检测iNOS,MMP-1,MMP-3的mRNA表达。通过ELISA方法检测上清液中MMP-1,MMP-3的含量。结果:IL-1β能够增加软骨细胞一氧化氮的释放及iNOS的酶活性,诱导细胞iNOS,MMP-1,3的mRNA表达,增加MMP-1,3的分泌。羧甲基壳聚糖对软骨细胞一氧化氮的释放,iNOS酶活力及iNOSmRNA表达均有抑制作用,不同浓度的抑制效果相近;它对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及MMP-1,3的分泌也有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。L-NAME对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及分泌也有抑制作用,但L-NAME与羧甲基壳聚糖对一氧化氮的影响相似时,羧甲基壳聚糖对MMP-1,3mRNA表达和分泌的抑制作用强于L-NAME。结论:羧甲基壳聚糖抑制软骨细胞合成MMP-1,MMP-3是部分通过降低iNOS表达,减少一氧化氮合成来实现的。     

一氧化氮和Fas在T-2毒素诱导的软骨细胞凋亡中的作用研究

目的探讨T-2毒素致软骨细胞凋亡与一氧化氮（NO）和Fas凋亡途径的关系。方法采用MTT法检测T-2毒素对软骨细胞存活率的影响；Annexin V／PI法和电镜观察研究T-2毒素致人软骨细胞凋亡的作用；用Griess重氮化法，测定T-2毒素作用于软骨细胞培养上清液中NO含量；Western Blotting检测T-2毒素对人软骨细胞表达一氧化氮合酶（iNOS）和Fas蛋白的影响。统计分析T-2毒素诱导人软骨细胞凋亡与其分泌NO、iNOS和Fas蛋白的相关性。结果T-2毒素在浓度为1～2000ng／mL的范围内，对软骨细胞存活率的作用呈较典型的浓度依赖关系和时间依赖关系，而且随着作用时间的延长，浓度依赖关系更为明显；T-2毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变，并使早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加，在一定范围内呈浓度依赖性；T-2毒素刺激软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白；T-2毒素使凋亡相关蛋白Fas表达增多；软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白和Fas蛋白量与T-2毒素诱导人软骨细胞凋亡率均有正相关性。结论T-2毒索引起的软骨细胞凋亡与T-2毒素刺激软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白增多有关，并与凋亡相关蛋白Fas表达增多有关。     

大黄对IL—1和IL—2产生的影响

目的；检测大黄水提取物对ＩＬ－１和ＩＬ－２产生的影响，以研究大黄的免疫抑制作用机理。方法：将小鼠分实验组与对照组，大黄水提取物灌胃后，用胸腺细胞增殖法和脾淋巴细胞增殖法检测ＩＬ－１和ＩＬ－２。结果：与对照组相比，实验组ＩＬ－１和ＩＬ－２产生能力明显下降。结论：大黄的免疫抑制作用与其抑制ＩＬ－１和ＩＬ－２的产生有关。     

脱氢表雄酮对白细胞介素-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响

目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)对白细胞介素(IL-1β)诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响。方法:分离人骨关节炎软骨细胞传代培养并加入IL-1β,分别将50,25和12.5μmol/L的DHEA作用于该软骨细胞。其后检测细胞增殖、上清液糖胺聚糖(GAG)和NO含量、细胞凋亡以及质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1(MMP-1和TIMP-1)含量。结果:50,25和12.5μmol/L的DHEA均能促进软骨细胞增殖和GAG合成(均P<0.01),抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡(均P<0.01)以及MMP-1合成(均P<0.01);50和25μmol/L的DHEA可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NO形成(均P<0.01),还可抑制软骨细胞自身的凋亡(均P<0.01)和MMP-1合成(均P<0.05),其效应呈浓度依赖性;50μmol/L的DHEA还可改善IL-1β对骨关节炎软骨细胞TIMP-1合成的抑制作用(P<0.05)。结论:脱氢表雄酮能在一定程度上对抗IL-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变。     

白介素-1β对大鼠肝切除后剩余肝细胞一氧化氮产生和ATP合成的影响

目的探讨大鼠肝部分切除后残存肝分离细胞在白介素-1β(IL-1β)作用下一氧化氮(NO)产生和肝细胞能量代谢的改变。方法将大鼠分为肝部分切除组(PH组)和假手术对照组(Sham组),采用胶原酶灌注法分离剩余肝细胞并进行培养;应用IL-1β等细胞因子处理培养肝细胞;应用Griess reagent法检测PH组和Sham组肝细胞NO的产生量;应用Western blot检测两组诱导型一氧化氮合酶蛋白的产生;应用高效液相色谱法测定两组肝细胞核苷酸含量;应用酶法检测两组肝细胞的酮体含量并计算酮体比率(乙酰乙酸盐/β-羟基丁酸盐,KBR)。结果PH组肝细胞NO产生量约是对照组的2倍。IL-1β能降低两组肝细胞的ATP含量和KBR,PH组降低程度大于对照组。加入L-精氨酸,PH组肝细胞NO的产生增加,ATP水平和KBR降低。一氧化氮合酶抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)可以抑制NO产生,并使降低的肝细胞ATP含量和KBR得以恢复。结论肝部分切除后,在IL-1β作用下的NO产生增加能够抑制ATP合成,促使肝细胞线粒体功能发生障碍。     

环巴胺对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂环巴胺对体外培养的佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法 SD大鼠足趾皮内注射弗氏完全佐剂制备AA模型(模型组),对照组足趾皮内注射等量生理盐水;观察继发侧足肿胀,28 d后,HE染色评价踝关节形态学变化;胰酶-胶原酶消化培养AA大鼠软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,CCK-8法检测环巴胺处理对AA大鼠软骨细胞增殖的影响,Hoechst 33258检测环巴胺对AA大鼠软骨细胞凋亡影响,Western blot法检测AA大鼠软骨细胞中Hh信号通路相关蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)的表达情况.结果 第12天,AA大鼠继发侧关节肿胀明显,HE染色表明AA大鼠踝关节破坏明显;Ⅱ型胶原和甲苯胺蓝染色证实成功培养AA大鼠软骨细胞;不同剂量的环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞增殖,抑制其凋亡,降低Shh、Ptch1、Gli1 蛋白表达.结论 环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞的增殖,抑制其凋亡,其机制与抑制AA大鼠软骨细胞Hh信号通路有关.     

Effect of polysaccharide sulfate 916 on the production of nitric oxide in ECV3 04 cells induced by cytokines and H2O2

Objective To investigate the effect of polysaccharide sulfate 916 (PS916) on the productio n of nitric oxide (NO) in ECV304 cells induced by tumor necrosis factor-α (TNF α), interleukin-1β (IL-1β) and H(2)O(2) in vitro. Methods Production of NO in ECV304 cells was measured by the Griess method and the proli feration of cells was tested by the MTT method. The activity of NO synthase was detected spectrophotometrically.Results Production of NO in ECV304 cells decreased after treatment with 40 ng/ml IL-1 β and 40 ng/ml TNFα, but increased in the presence of H(2)O(2) 0.1 mmol/L . PS916 significantly enhanced NO production in ECV304 cells in a dose-depende nt manner in the TNFα and IL-1β treated groups and decreased it in the H2O 2 treated group. Proliferation of ECV304 cells was inhibited by TNFα and H 2O2 and no effect was found in the IL-1β treated group. PS916 increased the proliferation of cells treated with TNFα and H(2)O(2) dose-dependently. In vitro, PS916 has no effect on the activity of NO synthase. Conclusion PS916 has a protective effect on ECV304 cells exposed to IL-1β, TNFα and H2 O2.     

严重烧伤大鼠血清总抗氧化能力与NO、IL-6水平相关性研究

目的 :观察烧伤休克大鼠血清总抗氧化能力水平 (TAC)、一氧化氮 (NO)和白介素 6 (IL 6 )的变化 ,探讨血清中NO、IL 6与TAC的相关性。　方法 :选用SD大鼠制成 30 %三度烫伤后 ,根据分组在各时相点取颈动脉血 5～ 8ml,分离血清 ,用生化方法测定TAC和NO代谢产物 ,用放免法测定IL 6水平。　结果 :TAC在烧伤后即有明显的下降 ,而NO和IL 6水平则相应增高 ,以烧伤后 6h为最显著。相关分析可见NO与IL 6均与TAC的下降有负相关性 (r=- 0 .839,r =- 0 .785 )。　结论 :严重烧伤可导致血清总抗氧化能力水平的降低 ,与随后的炎症介质NO和IL 6的大量释放有明显相关性。提示在临床上提高TAC水平 ,以及阻断或中和活性氧 (OFRs)的产生可能会降低烧伤后全身炎症反应水平。     

IGF-1对IL-1诱导的兔关节软骨细胞NO和PGE2的影响

目的:检测合成性细胞因子胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对损伤性细胞因子IL-1(interhukin-1)诱导的兔关节软骨细胞产生NO(nitric oxide)和前列腺素(prostaglandinE2,PGE2)的影响,探讨IGF-1在骨关节炎治疗中的作用机制.方法:实验分为IL-1β10μg/L组、IL-1β10 μg/L IGF-1 1μg/L组、IL-1β 10 μg/L IGF-1 10μg/L组、IL-1β 10 μg/L IGF-150 μg/L组、IL-1β 10 μg/L IGF-1 100 μg/L组、IGF-150 μg/L组和空白对照组.首先进行2月龄兔原代软骨细胞的培养并进行鉴定,然后将IL-1β 10 μg/L单独或与不同浓度的IGF-1共育于第2代兔关节软骨细胞,硝酸还原酶法测定实验组细胞上清液NO的含量,ELISA酶联免疫竞争法测定细胞上清液中PGE2含量,再对测定的NO和PGE＜2的浓度与IGF-1和IL-1的浓度进行有关的统计学分析.结果:IL-1β10μg/L组NO浓度为(89.971±10.224) μmol/L,PGE2浓度为(22.028±8.731)ng/L;空白组NO浓度为(12.404±8.809)μmol/L,PGE＜2浓度为(1.900±0.227)ng/L.IL-1β 10 μg/L组与空白组比较,NO和PGE＜2明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).在IL-1β均为10 μg/L时,IGF-1可以呈剂量依赖地降低IL-1诱导的兔关节软骨细胞NO和PGE2的升高,并且在50 μg/L时即可达到最佳浓度.结论:IL-1能增加软骨细胞培养中的NO和PGE2的产生.IGF-1在体外可以呈剂量依赖地降低IL-1诱导的兔关节软骨细胞NO和PGE2的升高,其最佳浓度为50 μg/L.