大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因消减cDNA文库的构建

目的克隆和鉴定大剂量辐射前后大鼠空肠上皮细胞IEC-6差异表达基因,为探索肠上皮细胞辐射损伤修复的分子机制提供线索.方法IEC-6细胞经35Gyγ射线照射后由抑制性消减杂交(SSH)方法和T/A克隆技术进行差异表达基因消减cDNA文库的构建,用反向Northerm杂交法对库中的EST序列进行筛选,挑取阳性克隆测序,和GenBank比对后挑选有限克隆进行正向Northerm杂交进行验证.结果扩增消减杂交cDNA文库得到约2 000个克隆,随机选取96个白色克隆进行PCR扩增,用反向Northern杂交法对库中的EST片段进行筛选得到15个阳性克隆,代表12个基因的转录产物,部分基因功能已经明确,涉及细胞骨架、细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面,另外还获得一新的cDNA序列.结论SSH法建立了IEC-6细胞差异表达基因消减cDNA文库,一次获得多条差异显示EsT片段,基因种类涉及细胞骨架,细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面,这些基因可能在肠上皮细胞的辐射损伤反应中起重要作用.     

小鼠轻型肠型放射病肠上皮细胞差异表达基因的筛选研究

目的 筛选经辐射诱导后小鼠肠上皮细胞的差异或特异表达基因。方法 通过基因库检索和计算机分析，设计出较通用的5’端武断引物在基因库中其呈现几率要高出数倍到数十倍的4条5′端高同源mRNA差示引物，应用DDRT-PCR，测序凝胶电泳，放射自显影，分子杂交等方法，分析并筛选小鼠受12Gyγ射线全身照射后3h(R1组）和96h(R2组）肠上皮细胞差异或特异表达基因。结果 5′端高同源性引物mRNA差异结果显示，与正常比较，小鼠全身12Gy照射后不同时相的肠上皮细胞基因表达存在差异，从近8000条PCR扩增产物中，比较筛选出12个差异表达基因片段，RNA-blot杂交对11个辐射损伤情况下差异表达基因片段进行了鉴定，R1S1和R1S2差异基因片段在辐射损伤后3h的肠上皮细胞中呈特异性表达；R2S2和R2S5基因片段在辐射损伤后96h的肠上皮细胞中呈特异性表达，R2S1，R2S6和R2S8基因片段是假阳性差异表达基因片段；而R2S1，R2S4及R2S8用RNA-blot法检测不到表达，序列分析结果显示R1S1和R2S2在基因库中未见高同源的基因序列，与R1S1同源性最高（60.00%)的是一个源于大鼠输卵管特异性糖蛋白基因，R2S5与一种小鼠肌细胞钙离子信号传导分子有67.21%的同源性；R2S2高度同源于鼠源性肿瘤诱导蛋白p32(91.52%)；R1S2在基因库中未检测到同源基因，结论 证实高同源引物具有良好的代表性和呈现几率，并筛选和鉴定出与辐射诱导的肠上皮损伤和修复相关的一组差异或特异表达基因。     

新基因RS1在辐射损伤小鼠的组织表达谱研究

目的 探讨新基因RS1在辐射损伤小鼠的组织表达谱情况，为RS1的克隆和功能研究提供更多的线索。方法 利用半定量RT—PCR的方法研究RS1在辐射损伤小鼠肠上皮、肝、肾、脾脏的表达情况，利用原位杂交的方法观察RS1在辐射损伤小鼠肝、肾、脾脏和心肌的表达情况。结果 RS1在辐射损伤小鼠除在肠上皮表达以外，在。肾、肝、脾等多处表达，其中脾脏和。肾脏的表达较高。结论 RS1具有广泛的组织表达谱。可以利用肾脏和肝脏来源的，RS1表达丰度高的总RNA为模板进行全长cDNA克隆。     

乳腺癌相关差异表达基因的筛选及分析

目的构建乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织差异表达的cDNA消减文库,筛选乳腺癌相关基因并进行分析。方法应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术对15对乳腺癌组织及正常癌旁乳腺组织进行差异基因的消减,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,采用数字表法随机挑选克隆经PCR鉴定后,对200个阳性克隆插入片段的序列进行测定及同源性分析。结果建立了乳腺癌差异表达片段cDNA消减文库;通过测序和同源性分析,得到173个差异表达基因,其中26个与肿瘤发生发展相关;26个基因中有15个已被文献明确报道在乳腺癌组织或细胞中有差异表达。结论应用SSH技术成功建立了乳腺癌差异表达基因cDNA消减文库,为乳腺癌的发病机制研究及寻找潜在的治疗靶点提供了有力的支持。     

抑制性消减杂交法构建甲状腺癌差异表达基因文库

目的：筛选并克隆在甲状腺癌组织与正常甲状腺组织之间差异表达的基因。方法：(1)应用抑制性消减杂交(SSH)进行基因差示表达分析,构建人甲状腺癌组织与正常甲状腺组织之间差异表达的cDNA消减文库;(2)克隆、鉴定甲状腺癌组织特异性高／低表达的基因;(3)登录Genbank,运用Blastn程序进行同源性分析。结果：成功构建了高消减效率的人甲状腺癌cDNA消减文库,对其中数个克隆的插入cDNA片段进行测序,经检索Genbank表明,正向SSH产物中有3个片段与来源于结肠上皮腺癌和Lung Epidermoid carcinoma的EST有100％同源性,提示它们来自恶性肿瘤相关基因。反向SSH产物中有5个片段为未知新序列,提示它们可能来自于在甲状腺癌中特异性低表达的新基因。结论：通过抑制性消减杂交技术,构建了人甲状腺癌cDNA消减文库,为下一步筛选鉴定甲状腺癌特异性基因及其全长克隆、功能研究等工作打下了基础。     

人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

目的 筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法 以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料，采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段，构建cDNA文库；挑取克隆进行筛选，获得差异表达片段，测序并与Genbank比对，Northernblotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达。结果 建立了两个消减文库，分别含有168和206个白色克隆，白色克隆含有约200～700bp的插入片段，对这些克隆进行筛选，获得35个差异表达基因片段，其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因，另外19个为未知功能基因，1个为新EST片段，注册Genbank（注册号为DR008207）。结论 抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段；keratin7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达，与细胞形态的表型差异有关；DDH等代谢基因的不同。与细胞的药物敏感性差异相关；筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。     

应用抑制性差减杂交技术克隆小鼠胸腺细胞发育相关新基因

目的:克隆胸腺细胞发育相关新基因.方法:应用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH),构建了胸腺基质细胞系cDNA差减杂交文库,结合RACE及RT-PCR进一步克隆并验证新基因的cDNA全长序列.结果:筛选两个不同胸腺基质细胞系的差异表达基因,获得了差异表达的cDNA片段,克隆后挑选阳性克隆进行测序,成功克隆8个新基因片段.对其中两个新基因克隆C55和C91进行Northern杂交分析,mRNA转录体长度分别为1.4 kb及1.5 kb,C55的表达在两种胸腺基质细胞系中存在显著差异.进一步克隆了C55和C91两个新基因的cDNA全长序列,已被GenBank所接受.结论:抑制性差减杂交技术是克隆新基因片段的有效方法;成功克隆8个新基因片段及两个新基因的cDNA全长序列.     

应用抑制性消减杂交技术从斑秃脱发区毛乳头中克隆出一条自身抗原基因

目的　寻找斑秃脱发区毛乳头中特异表达的基因片段 ,探讨斑秃发病机制。方法　应用抑制性消减杂交构建斑秃脱发区毛乳头差异表达基因的cDNA文库 ,并通过PCR筛选、杂交验证和同源性检索对差异表达基因进行分析。结果　成功建立了高消减效率的斑秃脱发区毛乳头cDNA消减文库 ,并克隆到一条斑秃毛乳头特异表达的基因片段DP3( 3 0 7bp) ,应用cDNA斑点杂交及Northern杂交证实它仅在脱发区毛乳头特异表达 ,同源性检索其为一条甲状腺相关的自身抗原基因。结论　DP3在斑秃脱发区毛乳头的特异表达提示其可能参与斑秃的发病过程 ,它的克隆为斑秃发病机制的自身免疫学说进一步提供了实验依据     

含hTERT基因片段重组逆转录病毒的构建

目的构建含hTERT基因片段的重组逆转录病毒。方法采用RT-PCR法从人白血病细胞株K-562中扩增hTERT基因片段(1590~2540bp),亚克隆至逆转录病毒表达载体pLXSN,构建重组质粒pLXSN-hTERT;用脂质体转染的方法将从重组质粒转入PT67细胞,G-418压力筛选获得含hTERT基因片段的重组逆转录病毒细胞克隆;0.22μm微孔过滤抗性克隆上清获得含表达hTERT基因的重组逆转录病毒;WesternBlot检测G-418抗性克隆的hTERT产物的表达。结果PCR扩增的hTERT基因片段与GenBank公布的序列相比仅有2个核苷酸差异,氨基酸序列完全一致;重组病毒的滴度为2.85×105PFU/ml;WesternBlot检测到含hTERT基因片段的重组病毒能够表达出一分子量为37kD的多肽。结论成功构建了表达hTERT基因片段的重组逆转录病毒,为进一步探讨内源性表达hTERT基因产物的树突状细胞能否激发特异性CTL的产生奠定了坚实的基础。     

人成骨肉瘤MG-63细胞雌激素相关基因的分离

目的 :筛查 17β雌二醇 (17β estradiol,E2 )诱导人成骨肉瘤MG 6 3细胞株差异表达cDNA片段 ,寻找雌激素相关基因。方法 :改良的cDNA代表性差异分析法 (cDNArepresentationaldifferenceanalysis,cDNARDA)分离E2 干预MG 6 3细胞株表达上调cDNA片段 ,经Southern和快速Northern杂交证实表达上调的cDNA片段来源后 ,将其克隆到 pGEM Teasy载体 ,蓝白筛选后挑取阳性克隆进行测序和同源比较分析 ,最后选取其中部分克隆行Northern印迹杂交。结果 :第 4轮消减杂交得到 5个E2 诱导人成骨肉瘤MG 6 3细胞表达上调的差异cDNA条带 ,Southern和快速Northern杂交证明表达上调的cDNA片段来自E2 干预的MG 6 3细胞 ;随机选 2 5个克隆测序得到13个序列 ,7个与已知基因高度同源 ;其中 2个克隆经Northern杂交证实E2 干预后表达上调。结论 :cDNARDA能有效筛查差异表达基因 ,人成骨肉瘤MG 6 3细胞中某些基因受雌激素诱导表达上调 ,可能与绝经后骨质疏松的发病相关。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2