caspase-3在脑室内低温动物模型脑组织中的表达

目的:对家兔急性脑出血模型进行脑室内低温保护,通过对动物行为和对出血灶周围脑组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的观察,探讨脑室内低温对家兔急性脑出血模型细胞凋亡的影响。方法:4～6月龄雄性家兔12只,随机分为等温组、低温组各6只。于右侧内囊点注入耳中动脉血0.5ml制作脑出血模型。用双腔微导管穿刺左侧侧脑室,建立脑室内灌注装置,以等温/低温等渗盐水灌注2h。术后24h观察其肢体运动后取材、固定、染色,观察脑组织caspase-3表达情况。结果:经脑室内低温保护的动物肢体偏瘫程度轻,血肿周围脑组织内出现的caspase-3阳性细胞数量较少,与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:对家兔急性脑出血模型进行脑室内低温脑保护可以减少血肿周围脑组织的细胞凋亡,脑室内低温作为选择行脑部低温的一个新的思路值得关注。     

脑室内低温对脑局部缺血后神经元凋亡的影响

目的 :研究兔侧脑室低温液滴注对脑局部缺血 再灌注损伤区神经元凋亡的影响。　方法 :眶入路以显微动脉瘤夹暂时夹闭左侧大脑中动脉 (MCA) 2h ,再灌注 2 4h ,制作脑局部缺血 再灌注模型。缺血后即刻 2 2℃无菌等渗盐水持续侧脑室滴注并引流 ,降低脑温至亚低温 (32～ 35℃ )后维持 2h ,再灌注 2 4h ,采用DNA片段原位末段标记技术 (TUNEL法 )分别检测对照组、夹闭组、低温组MCA供血区皮质神经元凋亡水平。　结果 :低温组缺血区凋亡神经元数明显低于夹闭组 (P <0 .0 1) ,而与对照组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。　结论 :脑室内低温方法可抑制脑缺血 再灌注后神经元凋亡 ,减轻脑缺血 再灌注的损伤。     

亚低温对高血压脑出血细胞凋亡的影响

目的：观察高血压脑出血病人脑脊液中FasL的变化,研究亚低温对高血压脑出血病人神经细胞调亡的影响,探讨亚低温的脑保护机制。方法：根据入院时GCS评分选择重症高血压脑出血病人总共22例,被分随机为两组,亚低温治疗组,常规治疗组,采用酶联免疫吸附法1d、2d、3d、5d、7d,共5d测量脑出血病人脑脊液中可溶性FasL含量,用SPSS 13统计软件包分析比较两组结果。结果：在患者脑出血后1d内FasL含量开始升高,2～3d脑脊液中FasL含量达到高峰,并逐渐下降。亚低温治疗组患者脑脊液FasL含量明显低于常规治疗组（P〈0.05）。结论：亚低温能够减少高血压脑出血病人神经细胞调亡的发生,是其脑保护机制之一。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡的影响

目的　研究不同时程的亚低温治疗对大鼠大脑中动脉闭塞 -再灌注模型神经细胞凋亡的影响。方法　用Longa’s线栓法制作大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,缺血 3h后再灌注。缺血后即刻分别进行不同时程 (1/2h、1h、3h)的亚低温治疗 ,再灌注后 2 4h断头取脑 ,冠状切片作TUNEL染色。结果　①与假手术组的凋亡细胞阳性率相比 ,对照组增加 (P <0 .0 1) ;②与对照组的凋亡细胞阳性率相比 ,亚低温 1h、3h组降低 (分别为P <0 .0 5及P <0 .0 1)。结论　①细胞凋亡参与缺血性脑损伤的病理机制。②亚低温 1h以上有抑制细胞凋亡作用。     

亚低温对脑缺血后细胞凋亡及基因表达的影响

亚低温对缺血脑组织具有保护作用,其机制目前尚未阐明。脑缺血与细胞凋亡关系密切,可以引起神经元凋亡及其相关基因的表达。亚低温影响细胞凋亡过程,细胞凋亡过程受基因表达严格调控,目前已知凋亡相关基因多达数十种,其中对p53、Bcl-2、Bax以及caspase-3等研究较多。本文从亚低温对脑缺血后细胞凋亡及其相关基因表达的影响方面介绍了亚低温的研究进展。     

脑室内注射胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIE)神经细胞凋亡的影响。方法 建立新生大鼠HIE模型 ,缺氧缺血后2h治疗组侧脑室注入胰岛素1IU/kg,对照组注入磷酸盐缓冲液5μl。缺氧缺血后3.5h监测血糖。缺氧缺血后24h利用透射电镜及末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记法检测大脑皮层和海马两部位的神经细胞凋亡情况和采用免疫印迹法检测脑组织半胱天冬酶 -3(Caspase-3)P20亚单位表达。 结果 透射电镜下 ,对照组大脑皮层和海马部位易观察到凋亡神经细胞 ,治疗组则很少观察到凋亡神经细胞。治疗组皮层部位和海马部位的凋亡细胞明显低于对照组 (t=6.940和5.855,均P<0.01)。治疗组血糖水平与对照组差别无显著性意义(t=0.733,P>0.05)。治疗组Caspase -3P20亚单位ID值明显低于对照组 (w=24.00,P<0.05)。结论胰岛素具有减少HIE新生大鼠神经细胞凋亡的作用 ,其抗凋亡作用可能通过抑制Caspase-3的活化来实现。     

低温复合丙泊酚对大鼠海马神经元凋亡蛋白表达及超微结构变化的影响

目的 观察低温复合丙泊酚对大鼠海马神经元凋亡蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白Beclin 1和LC3-Ⅱ及其神经元超微结构变化的影响,探讨丙泊酚对低温所致大鼠海马神经元自噬与凋亡的干预作用.方法 将大鼠分为空白对照组(A组)、低温丙泊酚组(B组)和低温水合氯醛组(C组),B、C两组低温干预30 min,各组进行心脏灌注,断头取脑,制备大鼠海马神经元组织标本,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3的表达,用Western blot检测Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达,透射电镜观察神经元超微结构的变化.结果 3组Caspase-3、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的水平差异有统计学意义(P＜0.05);透射电镜结果显示B、C组大鼠海马区神经元均有不同程度的改变,尤其是C组神经细胞凋亡现象明显.结论 低温状态下海马神经元仍有一定的自噬与凋亡现象,而丙泊酚则可减少这种损害,具有较好的神经元保护作用.     

低温体外保存对血小板活化和凋亡的影响

目的 观察保存温度对血小板活化和凋亡的影响,评估低温体外保存血小板的效果.方法 取20份单采血小板,一分为三,一份于(22±2)℃振荡保存(对照组),另两份悬浮于血小板添加液(65％)与自体血浆(35％)的混合液中分别静置于10℃储血冰箱(实验Ⅰ组)和(22±2)℃振荡仪(实验Ⅱ组),于1、3、4、5、7d检测血小板计数(platelet count,PLT)、血小板P选择素(cluster of differentiation 62 platelet,CD62p)表达率、血小板线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentia,△Ψm).结果 随着时间延长,3组PLT比较平稳,在组间、时点间以及组间·时点间交互作用差异均无统计学意义(P＞0.05);随着时间延长CD62p逐渐升高,而△Ψm％逐渐下降,3组CD62p、△Ψm在组间、时点间以及组间·时点间交互作用差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 血小板添加液混合血浆10℃低温保存比(22±2)℃保存血小板的活化和凋亡程度均较低.     

脊髓损伤后神经元细胞凋亡的研究进展

神经元细胞凋亡是脊髓损伤后出现的一种复杂的病理生理性改变,大量神经元细胞凋亡会影响脊髓损伤的自我修复,因此可通过阻止神经元细胞凋亡来促进脊髓损伤后神经功能的恢复,目前有很多种抑制神经元细胞凋亡的方法,但其疗效不尽人意.本文将对神经元细胞凋亡的临床研究进展做一综述,为脊髓损伤后神经功能恢复的治疗提供参考.     

异丙酚复合浅低温对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡的影响

目的本实验通过观察异丙酚复合浅低温治疗后Bax蛋白表达的变化,探讨异丙酚复合浅低温对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡的影响.方法采用Feeney′s 脑创伤模型,健康雄性SD大鼠随机分为5组,每组8只:假手术组(S),只颅骨开窗不致伤;模型组(M),制作大鼠脑创伤模型;浅低温组(H),创伤15min后,采用物理降温法,大鼠体温控制在32～34℃(肛温),维持3h;异丙酚组(P),创伤后立即按50mg/kg腹腔注射异丙酚,1h时后追加全量.异丙酚复合浅低温组(PH),既控制性降温,又腹腔注射异丙酚.脑创伤1d后处死大鼠.采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测创伤皮层周围神经细胞凋亡情况,采用免疫组化技术来检测Bax蛋白表达的变化.结果 4组中,M组细胞凋亡数目最多,H组和P组次之,PH组最少.与M组比较,H组、P组Bax表达明显减少(P<0.05、P<0.01);与M组、H组和P组分别比较,PH组Bax表达明显减少(P<0.01、P<0.01、P<0.05).结论脑创伤后创伤灶周围凋亡神经细胞显著增加,异丙酚复合浅低温能显著减少脑创伤后神经细胞凋亡的数量,对脑创伤具有保护作用,这可能是通过调节Bax蛋白的表达来抑制细胞凋亡的.     

亚低温对大鼠脑挫伤后神经细胞凋亡的影响

①目的 探讨大鼠脑挫伤后亚低温干预对神经元凋亡的影响。②方法 采用自由落体法建立大鼠脑挫伤模型，应用原位末端标记技术观察神经元凋亡细胞数，图像分析技术观察免疫组织化学染色后Bcl-2基因表达，并进行统计分析。③结果 在大鼠脑挫伤后0．5、1、2小时，给予持续3小时的亚低温治疗，可以有效地减少神经细胞凋亡；免疫组化结果显示亚低温干预，可以促进抑凋亡基因Bcl-2的表达。④结论 脑挫伤后，早期亚低温干预可以促进Bcl-2的表达，减少神经细胞凋亡，进而保护受损脑组织。     

全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元凋亡的影响

目的：观察全身亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响,探讨亚低温的脑复苏机制和脑缺血后凋亡刺激因素．方法：采用改良的Ｐｕｌｓｉｎｅｌｉ－ＷＡ４ＶＯ法,制备大鼠全脑缺血再灌注模型,采用ＴＵＮＥＬ法,观察海马脑区细胞凋亡的特征变化．结果：发现脑缺血２０ｍｉｎ再灌注６ｈ,海马ＣＡ１区可见少量细胞核呈蓝染颗粒,于再灌注１２ｈ,２４ｈ,４８ｈ,３ｄ,５ｄ蓝染阳性细胞明显增多,５ｄ达高峰,７ｄ开始下降．给予亚低温治疗后上述变化明显减轻．结论：亚低温脑复苏作用可能是通过抑制或延迟脑缺血后细胞凋亡,而抑制或阻断凋亡发生的启动级联反应为其重要机制．     

延时低温对急性肺损伤早期炎症反应和肺水的影响

目的研究延迟开始的低温对肠缺血再灌注所致急性肺损伤早期炎症反应和肺水的影响。方法新西兰大白兔60只（10只/组）,随机分为空白对照组（肛温37～38℃,假手术组）、缺血对照组（肛温37～38℃）、浅低温组（肛温32～35℃）、中低温组（肛温28～31.9℃）、延迟浅低温组（直肠目标温度32～35℃）、延迟中低温组（直肠目标温度28～31.9℃）。实验组采用完全夹闭肠系膜上动脉（super mesenteric artery,SMA）1h,开放后再灌注的方法制备肠缺血再灌注（Intestine Ischemia Reperfusion,IIR）致急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型。采用体表降温的方法控制实验动物体温。再灌注6h后测定支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF）TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平;再灌注6h后处死动物取肺组织标本,测定肺组织湿/干比值。结果和空白对照组比较,实验组BALF中TNF、IL-1、IL-6、IL-10水平升高,肺组织肺水增加。在实施低温治疗后,同缺血对照组相比,上述肺损伤的表现得到了改善,延迟开始的低温治疗也有一定的效果。结论浅低温和中低温可以有效改善IIR导致ALI动物模型的早期炎症反应,减轻肺组织损伤的程度;延迟开始的低温也有一定的效果。     

爆炸致兔急性肺损伤时细胞凋亡作用机制的研究

目的:探讨细胞凋亡在爆炸致兔急性肺损伤(ALI)中的作用机制。方法:选取兔40只,随机分为空白对照组10只;实验组30只,空气爆炸损伤胸部,制作ALI模型,分别于爆炸损伤4、12、24 h后采样(每时间点各10只),测定肺干/湿重比、动脉血氧分压,原位末端标记检测肺组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2含量。选取肺组织,显微镜观察光镜下肺组织病理形态。结果:光镜下,实验组4 h起可见肺间质、肺泡明显水肿,肺泡腔大量红细胞、炎性细胞及浆液性渗出,肺间质增厚。与对照组比较,各实验组肺干/湿重比均明显升高(P<0.01),动脉血氧分压均明显降低(P<0.01)。凋亡指数均明显升高(P<0.01),Caspase-3与Bax/Bcl-2比值均较对照组升高(P<0.05~P<0.01)。结论:细胞凋亡在兔ALI的发生、发展过程中起重要作用,参与了肺组织损伤,促进ALI病情进展。     

急性重症颅脑损伤患者应用亚低温治疗的临床分析

目的分析研究亚低温治疗急性重症颅脑损伤的疗效及影响因素。方法前瞻性分析1996年1月～2011年6月期间我院急性重症颅脑损伤患者178例,在SPSS 17.0统计软件包中行检验比较两组疗效差异,并将年龄、就诊时间、亚低温治疗、初诊GCS评分(Glasgow coma scale,GCS)纳入logistic回归模型进行非条件多因素分析影响亚低温疗效的因素。结果检验比较亚低温组和常规治疗对照组的预后结果显示差异有统计学意义,P<0.05。logistic回归分析显示患者年龄增大、就诊时间长、初诊GCS评分低为影响急性重症颅脑损伤预后的危险因素,P<0.05,而亚低温治疗[β=-0.753,P=0.012,OR值=0.523,95%CI=(0.356,0.866)]则为保护性因素,P<0.05。结论亚低温治疗能够改善急性重症颅脑损伤患者预后,值得进一步推广应用。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血的抗细胞凋亡作用

目的:观察亚低温对局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达影响,探讨亚低温的脑保护作用。方法:选择健康雄性大鼠,随即分为假手术组、脑缺血组和脑缺血—亚低温组,利用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血模型,利用免疫组化及TUNEL法观察Bcl-2蛋白及神经细胞凋亡情况。结果:假手术组Bcl-2蛋白阴性表达,亦未见凋亡细胞;与脑缺血组比较,亚低温组Bcl-2蛋白表达显著增加,两组相比差异有显著性(P<0.05),神经细胞的凋亡数目明显减少,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:亚低温可以减轻脑缺血损伤,可能与通过促进Bcl-2蛋白的表达,减少神经细胞的凋亡有关。