蕨麻小型猪与巴马小型猪高原多脏器功能障碍综合征模型的比较研究

目的比较不同海拔地区两种小型猪高原多脏器功能障碍综合征(H-MODS)模型存在的差异,探讨建立H-MODS模型的理想动物。方法利用高原土生蕨麻小型猪与平原巴马小型猪,以内毒素(LPS)建立HMODS模型。检测不同时点血液生理生化指标的变化,并观察肺脏组织病理学变化。结果巴马小型猪模型的死亡率明显高于蕨麻小型猪;生理生化各指标的变化基本相同,但蕨麻小型猪的变化较平缓。在24 h与48 h肺脏均出现严重病理改变,但巴马小型猪较蕨麻小型猪更严重。结论不同海拔地区的两种小型猪均可成功建立HMODS模型,同时蕨麻小型猪由于自身高原生物特性对H-MODS模型的复制更加准确安全,避免高原环境的外在因素的影响。     

蕨麻小型猪与巴马小香猪高原多脏器功能障碍综合征 模型的比较研究

【摘要】　目的　比较不同海拔地区两种小型猪高原多脏器功能障碍综合征（H-MODS）模型存在的差异,探讨建立H-MODS模型的理想动物。方法　利用高原土生蕨麻小型猪与平原巴马小香猪,以内毒素(LPS)建立H-MODS模型。检测不同时点血液生理生化指标的变化,并观察肺脏组织病理学变化。 结果 巴马小香猪模型的死亡率明显高于蕨麻小型猪;生理生化各指标的变化趋势基本相同,但蕨麻小型猪的变化较平缓。在24h与48h肺脏均出现严重病理改变,但巴马小香猪较蕨麻小型猪更严重。结论 不同海拔地区的两种小型猪均可成功建立H-MODS模型,同时蕨麻小型猪由于自身高原生物特性对H-MODS模型的复制更加准确安全,避免高原环境的外在打击因素的影响。?     

生长激素基因在西藏小型猪不同生长阶段和不同组织器官中的表达

目的对西藏小型猪生长激素基因在不同脏器和不同年龄阶段的表达水平进行测定。方法采用Real-time PCR的方法,以GAPDH为内参,定量分析0岁(1日龄)、0.1岁(36日龄)、0.25岁(90日龄)、0.5岁(180日龄)、1岁(360日龄)、2岁(720日龄)、3岁(1080日龄)的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤组织中生长激素基因mRNA表达水平,并且进行比较分析。结果生长激素基因在各个年龄阶段的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤中均有表达。在不同脏器的表达中,生长激素基因在0岁、0.5岁时皮肤中的表达量最高,肌肉组织中的表达量最低。在0.25岁、1岁时肺组织中表达量最高,在0.1岁、3岁时肝脏表达量最高;在不同年龄阶段的表达中,生长激素基因在0.1岁时表达达到峰值。结论西藏小型猪的生长激素基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪对外源性脂肪的敏感性观察

目的观察五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪对外源性脂肪的敏感性。方法取雄性五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪各5只,分别采用静脉注射脂肪乳和饲喂高脂饲料,分别检测静脉注射脂肪乳后0.5、1、1.5、2、2.5、3 h和饲喂高脂饲料后12、24、36、48、60、72、84、120 h的血清胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平,并计算曲线下面积变化ΔAUC值。结果注射脂肪乳后3种小型猪甘油三酯(TG)均明显升高(P0.01),在注射后0.5 h达到峰值,其升高程度和ΔAUC值高低依次为西藏小型猪五指山小型猪巴马小型猪,而TC、LDL-C和HDL-C则无明显变化(P0.05);高脂饲料饲喂饮食诱导后3种小型猪TC、LDL-C、HDL-C和TG均明显升高(P0.05,P0.01),其中,五指山小型猪TC、LDL-C在饲喂后36 h、HDL-C在饲喂后48 h、TG在饲喂后24 h达到峰值,巴马小型猪和西藏小型猪TC、LDL-C、HDL-C在饲喂后48-60 h、TG在饲喂后36 h达到峰值,TC、LDL-C、HDL-C的ΔAUC值高低依次为五指山小型猪巴马小型猪西藏小型猪。结论静脉注射脂肪乳3种小型猪对TG敏感,脂耐量值高低依次为西藏小型猪五指山小型猪巴马小型猪;高脂饲料饲喂对3种小型猪TC、LDL-C、HDL-C敏感,脂耐量值高低依次为五指山小型猪巴马小型猪西藏小型猪。     

广西巴马小型猪PGC-1α基因克隆与组织表达分析

目的 克隆广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区（CDS）序列，利用RT-PCR和QRT-PCR方法分析PGC-1α mRNA组织表达情况。方法 本实验以广西巴马小型猪背最长肌cDNA为模版，PCR扩增PGC-1α基因CDS序列，将其连接至pEASY-T5载体，转染细菌、验证和序列测定；通过RT-PCR半定量和QRT-PCR实时荧光定量检测PGC-1α基因在小型猪多个组织中的表达情况。 结果 克隆获得广西巴马小型猪PGC-1α基因CDS序列，全长2391bp，编码796个氨基酸，与参考序列的同源性为99.9%，两处碱基发生同义突变，分别C-A1105和G-A1524；PGC-1α基因在广西巴马小型猪心脏和肾脏中的表达丰度最高，其次是肝脏、皮下脂肪和背最长肌，而在胰腺中未检测到其表达。 结论 成功克隆了广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区序列并进行了多种组织表达分析，为后续研究PGC-1α在小型猪2型糖尿病发生过程中作用途径打下基础。     

蕨麻小型猪主要脏器重量与体重的相关性分析

目的测定蕨麻小型猪体重和主要脏器重量,计算脏器系数,并对脏器重量与体重进行相关分析和回归分析。方法选取7~15月龄普通级蕨麻小型猪21头(其中雌性12头,雄性9头),分别测定体重和心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、膀胱和胃等8个主要脏器重量,计算脏器系数,再用Student's t test分析性别间差异,用SAS软件进行各脏器重和体重间的相关、线性回归、多元线性回归和多重回归分析。结果性别间比较,蕨麻小型猪体重、脏器重量和脏器系数差异无显著性。相关分析显示主要脏器的重量与体重相关性显示出了一致的变化规律,均与体重呈正相关,其中心脏、肝脏、脾脏、肾脏的重量与体重显著正相关(P0.05),线性回归分析表明线性方程具有实际意义。多元线性回归分析显示心脏和胃重量与体重有显著直接相关性,其中心脏重与体重相关性最强。进一步多重回归分析说明,肝脏、肺脏、肾脏、膀胱分别与心脏和胃表现显著回归,而脾脏与肝脏表现显著回归。结论蕨麻小型猪的主要脏器系数性别间差异无显著性,主要脏器与体重存在一定的线性关系。     

广西巴马小型猪PERV-env基因克隆及其组织表达谱分析

目的克隆广西巴马小型猪PERV-env部分基因,并研究其在不同组织中的表达差异。方法利用RT-PCR方法从巴马小型猪外周血白细胞中扩增PERV-env基因,并与部分国内外已发表的PERV-env基因序列进行同源性及遗传进化分析。以扩增获得的广西巴马小型猪PERV-env基因为模板设计引物,利用半定量RT-PCR的方法对广西巴马小型猪不同组织中PERV mRNA表达情况进行分析。结果在所检测的9个组织样品中PERV mRNA相对表达水平存在差异,肾及外周血淋巴细胞中PERV mRNA丰度最高,肺、心、肝、脾、胸腺、卵巢次之,且表达丰度差异不显著(P0.05),胰腺PERV mRNA表达丰度最低。结论以巴马小型猪胰岛细胞进行异种移植发生PERV感染的潜在危险性可能要低于其它器官,但仍需进一步研究证实。     

不同品系小型猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的敏感性筛选

目的 筛选对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)敏感的小型猪品系, 以用于HP-PRRS活疫苗的评价。方法 本研究选择蓝塘猪、蕨麻小型猪、巴马小型猪、五指山小型猪(白系)接种PRRSV NVDC-JXA1株强毒, 并以本地二元杂猪作为对照。攻毒后每天观察动物精神、食欲、死亡等情况, 死亡动物进行剖检, 并采取肺组织做RT-PCR检测病毒, 连续观察5周, 试验结束时采取存活动物血清分别检测PRRSV抗体。结果 攻毒后各组都有动物出现精神沉郁、食欲下降、死亡等现象, 死亡动物RT-PCR检测都显示为阳性, 存活动物PRRSV抗体检测阳性。从死亡率看, 巴马小型猪和五指山小型猪白系对PRRSV NVDC-JXA1株强毒的敏感性最高, 并且敏感性超过了对照组二元杂猪。结论 巴马小型猪和五指山小型猪白系对HP-PRRSV敏感, 可用于HP-PRRS活疫苗的检验。     

西藏小型猪MSTN基因5''调控区的酶切多态性分析

目的对西藏小型猪MSTN基因进行PCR—RFLP基因多态性分析，并对五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪进行MSTN基因多态性的比较研究。方法以42头西藏小型猪、17头五指山小型猪、7头巴马小型猪和22头贵州香猪作为研究对象，对猪MSTN基因5’调控区进行了PCR—RFLP多态性研究。结果1、不同猪种之间的基因型频率和等位基因频率有显著性差异（P=0．000），西藏小型猪的MSTN基因表现出3种基因型TT（9．52％）、AA（61．90％）、TA（28．57％），T和A的频率分别为23．81％和76．19％；五指山小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（82．35％）、AA（17．65％），T和A的频率分别为82．35％和17．65％；贵州香猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（81、82％）、TA（18．18％），T和A的频率分别为90．91％和9．09％；巴马小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（71．43％）和TA（28.57％），T和A的频率为85．71％和14．29％。2、不同MSTN基因型的西藏小型猪的初生重（P=0．761）和离乳重（P=0．319）无显著性差异。结论西藏小型猪、五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪的MSTN基因5’调控区存在多态性，但暂不能把MSTN基因做为西藏小型猪繁殖性能的分子标记。     

广西巴马小型猪2型糖尿病模型骨骼肌糖代谢及能量代谢相关基因的表达差异

目的 本实验通过比较T2DM猪、非T2DM猪的糖代谢及能量代谢等关键调控基因（PGC-1α、Glut-4、ERRα、NRF-1、TFAM和线粒体基因）,探讨这些基因在T2DM发生中所起到的作用。方法 以广西巴马小型猪T2DM模型建立的发病组和未发病组的背最长肌为实验材料,利用QRT-PCR实时荧光定量的方法对糖代谢及能量代谢相关基因mRNA和线粒体基因的表达情况进行检测。结果 在广西巴马小型猪背最长肌中,T2DM组PGC-1α、Glut-4、ERRα和NRF-1的相对表达量均显著高于非T2DM组,TFAM和线粒体基因的相对表达量则稍低于非T2DM组。结论 在T2DM巴马小型猪骨骼肌中,上调PGC-1α及其下游基因Glut-4、ERRα和NRF-1的表达水平,有利于改善葡萄糖代谢;而线粒体合成不足,致使ATP合成量不够,或引起胰岛素抵抗,进而导致2型糖尿病的发生。     

四个品种小型猪血液学指标测定及比较

目的 分析比较四个品种小型猪的血液学生物学特性.方法 分别选取上海地区饲养的巴马小型猪、贵州小型猪和版纳小型猪及陆川小型猪,每个品种雌雄各20头,3～6月龄,测量其血液生理、血清生化与血凝指标,然后进行单因素方差分析,并进行数据比较.结果 四个品种的小型猪血液生理14个指标差异有统计学意义(P＜0.05),血清生化12个指标组间差异有统计学意义(P＜0.05),血凝4个指标差异都有统计学意义(P＜0.05).分别对各品种群体数据进行比较分析,巴马小型猪群体雌雄间血液常规、血清生化和血凝指标差异显著(P＜0.05)的指标分别有6项、4项和3项,而贵州小型猪、版纳小型猪和陆川小型猪雌雄间差异指标较少或差异不显著.四品种小型猪相同性别间比较,也有较多指标差异显著.结论 测定和比较的巴马小型猪、贵州小型猪、版纳小型猪和陆川小型猪在血液学、血清生化和血凝等方面数据,为应用和选择小型猪开展相关生物医学和药物研究提供了基础数据.     

巴马小型香猪口服洛伐他汀的药代动力学研究

目的建立巴马小型香猪的药物代谢研究模型,了解巴马小型香猪机体对药物的作用。方法选择抗动脉粥样硬化的HMG-CoA还原酶抑制剂型药物洛伐他汀(LV)为模型药,给6月龄雄性巴马小型香猪二组共8头,单剂量(6.0 mg/kg,2.4 mg/kg)灌胃,采用RP-HPLC法检测LV的血药浓度,并计算药代动力学参数。结果LV在巴马小型香猪的处置符合一室开放模型;Tmax分别为(2.54±0.18),(2.82±0.44)h;T1/2α分别为(1.53±0.05),(1.52±0.44)h;T1/2β分别为(2.04±0.32),(2.77±0.89);Cmax分别为(28.86±3.76),(10.93±1.77)ng/mL;AUC分别为(202.76±41.98)和(104.86±16.44)(ng/mL)×h。结论LV在巴马小型香猪的吸收速度约为正常人的0.5倍,消除速度为正常人的1.5~2倍,但整个代谢过程类似正常人,均属一室开放模型,提示巴马小型香猪可作为心血管系统药物LV药代研究的良好模型。     

三明治培养新生实验小型猪肝细胞的功能与形态

目的 探索双层胶原夹心猪肝细胞的方法，观察培养猪肝细胞的功能与形态特征。方法 将两步法分离的新生中国实验小型猪肝细胞接种于胶原被覆的培养板常规培养，24h后，肝细胞上再加一层胶原形成双层胶原夹心（三明治）培养，观察培养猪肝细胞的白蛋白分泌、形态学特征和乳酸脱氢酶（LDH）漏出量。结果 成功将新生实验小型猪肝细胞固定于双层胶原中，形成三明治状。培养1周内，用SDS／PAGE可检测出猪肝细胞分泌的白蛋白，倒置相差显微镜下观察到典型的形态特征，培养期内LDH漏出量较少。结论 可用双层胶原对新生乳猪肝细胞进行三明治样培养，为肝细胞提供更接近体内的培养环境，有助于维持特殊的肝功能和形态学特征。     

实验用五指山小型猪生长发育测定

目的 对初生至12月龄的实验用五指山小型猪的生长发育进行测定和分析.方法 按常规育种要求的方法,测定普通级实验用五指山小型猪生长发育相关的表型特征,并通过SAS软件进行统计分析.结果 五指山小型猪生长缓慢,体重轻,体型矮小,6月龄体重、体高、体长、胸围、腹围、臀长、管围、胸深、胸宽、臀宽、头长、额宽、颌距、尾长和尾围分别为：12.11±2.99kg、50.93±5.02 cm、32.64±3.81 cm、52.13±5.43 cm、50.64±5.77 cm、58.30±5.88 cm、18.77±2.29 cm、8.51±0.74 cm、16.80±2.09 cm、13.95±1.61 cm、11.95±1.31 cm、17.75±1.47 cm、7.93±0.54 cm、9.74±0.90 cm、14.90±2.40 cm和5.10±0.68 cm.结论 五指山小型猪生长发育稳定,对不同的气候条件有较大的适应性,适合在华南乃至我国广大地区饲养繁育.     

五指山小型猪下颌骨的测量及分析

目的研究不同性别、不同年龄核因子相关因子2（Nrf2）基因敲除小鼠（ICR-Nrf2）主要脏器重量和脏器系数。方法分别取1、3、6月龄Nrf2敲除及正常ICR小鼠雌雄各15只,用Sartorius电子天平分别测定体重和主要脏器重量,计算脏器系数,并进行多因素分析分析。结果基因型、年龄和性别因素分别对体重的影响和两两交互作用均有差异（P〈0．05）。基因型和年龄分别对几乎所有脏器的重量和系数都有影响（P〈0．01或0．05）,而性别因素的影响则因脏器而不同。结论Nrf2可能在ICR小鼠的生长和发育过程中起着重要作用。     

不同品系小型猪胫骨缺损模型及修复的麻醉观察

目的 通过建立不同品系猪胫骨缺损模型及修复手术中的麻醉观察,探讨不同品系小型猪适宜的麻醉方法.方法 贵州香猪和广西巴马猪各10只,分为A、B两组给予麻醉用药:A组:速眠新Ⅱ联合氯胺酮肌注;B组:3%戊巴比妥钠,静脉注射,术中酌情给予氯胺酮肌注.观察麻醉持续时间,镇痛效果,术后苏醒时间并监测麻醉过程中呼吸、心率以及血氧和二氧化碳的变化.结果 猪胫骨缺损模型建立及缺损修复手术时间平均(64±11)min.贵州香猪A组用药量小,术中麻醉效果好,术后苏醒时间短;B组麻醉效果相对较差.广西巴马猪用药量较贵州香猪明显增多(P＜0.05),B组较A组麻醉效果好.两种猪麻醉用药对呼吸,血氧和二氧化碳分压的影响B组更明显(P＜0.05).结论 贵州香猪联用氯胺酮和速眠新Ⅱ可获较好麻醉效果,广西巴马猪使用戊巴比妥钠辅以氯胺酮效果佳.     

SD大鼠与巴马小型猪的皮肤组织学比较

目的研究及观察SD大鼠和巴马小型猪皮肤的正常比较组织学。方法取SD大鼠和巴马小型猪不同部位的皮肤进行石蜡切片、HE染色,光学显微镜观察。结果两种动物的皮肤组织学结构在以下方面存在着显著差异:1.SD大鼠的毛囊成簇分布,平均3～9成群,而巴马小型猪的毛囊较稀少;2.SD大鼠表皮较薄,没有透明层,基底细胞缺乏异质性,真皮与表皮连接面平坦,没有皮钉;而在巴马小型猪皮肤表皮和真皮连接区,有上下交错的表皮皮钉和真皮乳头;3.SD大鼠的真皮结构相对松散,真皮血管系统不发达,而巴马小型猪皮肤的真皮网织层和乳头层交界的地方,水平分布着很多的浅表小静脉和小动脉丛,这种血管分布的方式与人类皮肤中的血管分布极为类似;4.SD大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤,汗腺上皮只有一种细胞类型,腺细胞呈立方形或矮柱状,胞核圆形,导管短而弯曲,由两层上皮细胞组成。而巴马小型猪皮肤的汗腺是顶泌汗腺,分布于真皮和脂肪相接的真皮深层,分泌部为粗管,管腔大,盘曲成团。腺细胞呈立方形或扁平,胞核圆形或长梭形。腺细胞与基膜之间也有肌上皮细胞。导管较细而直,开口于毛囊上段。     

西双版纳小耳猪群体遗传结构的RFLP分析

目的　对西双版纳小耳猪的群体遗传结构进行RFLP分析。方法　采用ECL核酸直接标记和检测系统，以HRP标记ɑ-珠蛋白-3’HVR多基因座小卫星探针，对西双版纳小耳猪的Hinf Ⅰ或HaeⅢ酶切片段进行Southern杂交，以化学发光法进行检测，获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图谱。结果　2　kb以上的谱带数在6～15条之间，HinfⅠ酶切产生的图带数低于HaeⅢ。JB亚系内805、807家系和JS亚系内111、121、121、151家系不同个体间的相似系数分别为0.94±0.09、0.85±0.08、0.84±1.7、0.78±1.6、0.83±0.42、0.87±0.07，显著高于各家系间的相似系数，JB亚系内的805家系和JS亚系内的151家系不同个体间相似系数较大，分别为0.94和0.87。结论　西双版纳小耳猪近交程度较高，个体间差异较小，均一性较强。     

西藏小型猪胰岛细胞体外分离和纯化方法

的确定成体西藏小型猪胰岛细胞体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛细胞。方法对比不同质量浓度的胶原酶（1mg／ml,2mg／ml,3mg／ml,4mg／m1）和同一质量浓度不同时间点（0min,15min,30min,45min,60min,75min,90min）分离获得胰岛细胞的数量和效果;使用Ficoll400密度梯度离心、淋巴分离液分离、离心和静置4种方法纯化胰岛细胞悬液,比较最终收集到的胰岛细胞数量和效果;用DTZ染色计算胰岛细胞的纯度;用AO／PI染色计算胰岛细胞存活率。结果确定了不同质量浓度的胶原酶获取胰岛细胞的最佳时间,胶原酶lmg／ml和2mg／ml组为45min,3mg／ml和4mg／ml组为30min,各组在最佳时间点获得胰岛细胞的数量最多的为1mg／ml组,胰岛细胞形态完整;4种纯化方法中,收集的胰岛细胞数量由多到少依次为静置组〉Ficoll400密度梯度离心组〉离心组〉淋巴分离液离心组。经AO／PI染色后检测胰岛细胞的存活率为95．00％以上。结论在组织块剪碎消化的情况下,胶原酶质量浓度lmg／ml、消化时间45min的分离条件可获得数量较多的胰岛细胞,Ficoll400密度梯度离心的纯化手段收集到的胰岛细胞效果最好。