近红外荧光染料在胃癌人源性肿瘤组织异种移植模型研究中的应用

【摘要】 目的 建立人胃癌PDX裸鼠移植模型,探讨近红外荧光染料IR-783在胃癌PDX模型活体成像研究中的应用。方法 取临床胃癌新鲜手术切除标本,裸鼠肾包膜移植建立PDX模型,HE染色比较移植肿瘤组织与病人肿瘤组织形态结构的一致性。将移植肿瘤组织裸鼠皮下接种,20天后,荷瘤小鼠腹腔注射近红外荧光染料IR-783（10nmol/mouse）,活体成像连续测定肿瘤部位近红外荧光强度并分析肿瘤体积与荧光强度的相关性;免疫组织化学检测移植肿瘤组织中HIF1?与OATP1B3的表达强度。结果 成功建立了3个人胃癌PDX模型,移植肿瘤组织较好的保持了原发肿瘤的特征,近红外荧光活体成像早期检测到肾包膜部位荧光信号。PDX模型中肿瘤体积与荧光强度的相关性均在98%以上。移植肿瘤组织中HIF1?与OATP1B3表达呈强阳性。结论 近红外荧光染料IR-783可在PDX模型肿瘤部位特异性聚集,用于PDX模型的早期检测,这种肿瘤靶向性可能与HIF1?和OATP1B3的表达相关。     

近红外荧光染料IR-783介导的肿瘤成像

目的 评估近红外荧光染料IR-783在肿瘤中的特异性成像作用及体内安全性。方法 将IR-783染料注入SD大鼠和荷瘤裸鼠体内,分别检测IR-783的毒性和代谢周期,在此基础上,将IR-783染料注入自发肿瘤犬体内,5d后手术切除肿瘤组织,分别进行荧光成像、HE病理切片、冰冻切片荧光观察。结果 IR-783染料（0.1mmol/kg）腹腔注射SD大鼠代谢14d,脏器未见任何病理变化; IR-783（5μmol/kg）腹腔注射荷瘤裸鼠8d后,通过活体成像可以观察到移植瘤部位仍有较强的荧光。IR-783静脉注射（1.5μmol/kg）自发肿瘤犬5d后,肿瘤组织中仍可检测到较强的荧光。结论 近红外荧光染料IR-783能特异性的靶向肿瘤组织,同时具有信号稳定、无任何病理损伤等特点,具有重要的临床应用前景。     

七甲川菁近红外荧光染料对胃癌原位移植模型的靶向识别

目的 研究七甲川菁近红外荧光（NIRF）染料在胃癌原位移植模型活体成像中的应用效果。方法 将标记荧光酶素的人胃癌细胞系HepG2原位移植裸鼠建立肿瘤模型,同时诱发制备胃溃疡模型;对上述模型分别采用生物发光成像和NIRF成像,观察胃癌组织对近红外荧光染料的吸收;探索缺氧和阴离子转运肽（OATP）对胃癌组织吸收NIRF染料的影响,明确NIRF染料靶向识别肿瘤细胞的特异性。结果 NIRF信号与生物发光信号在胃癌原位移植模型活体成像中具有较好的相关性。胃癌组织部位可获得较强的NIRF荧光信号,而胃溃疡部位未检测到荧光信号。缺氧能够增强胃癌细胞对NIRF染料的吸收,而阴离子转运肽特异性抑制剂磺溴酞钠（BSP）能够显著降低肿瘤细胞对NIRF染料的吸收。结论 七甲川菁近红外荧光染料能够靶向识别胃癌原位移植模型。     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α治疗骨肉瘤的实验研究

目的　观察靶向缺氧诱导因子 (HIF)- 1α的短发夹状小干扰RNA基因转染对骨肉瘤生长的影响。方法　针对HIF- 1α构建短发夹状siRNA真核表达载体 (pSilencer) HIF并转染骨肉瘤细胞系(SaOS) 2。骨肉瘤细胞置于缺氧诱导培养基中培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)和免疫印迹沉淀观察HIF -1α的基因沉默效果。四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色分析检测细胞体外增殖活力,透射电镜,原位末端标记TUNEL法,AnnexinV/PI双标记法检测细胞的凋亡。同时,通过裸鼠移植瘤模型观察HIF- 1α基因沉默后对骨肉瘤体内治疗效果。结果　测序证实成功构建HIF- 1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer HIF,转染骨肉瘤细胞后,HIF -1α基因表达显著抑制 ( 90% )。与对照组比较,pSilencer HIF转染组骨肉瘤细胞缺氧状态下的增殖活性显著降低。缺氧培养 72h后,透射电镜、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征,AnnexinV/PI双标检测转染组细胞凋亡率为 18. 71% ±0. 98%,明显高于pSilencer neo空载体转染组和未转染组 (P< 0 .01 )。裸鼠移植瘤实验显示pSilencer HIF转染组肿瘤生长减慢,成瘤率下降,肿瘤组织中可见大量坏死组织。结论　靶向HIF- 1α基因的短发夹状siRNA可以有效阻断骨肉瘤缺氧耐受转导通路,抑制骨肉瘤细胞的生长。     

FTS与NIRF共轭化合物用于小鼠肿瘤模型的成像和治疗

目的 研究法尼基硫代水杨酸（farnesylthiosalicylic Acid，FTS）与七甲川菁（heptamethine carbocyanine）近红外（near infrared，NIR）荧光染料共轭化合物的肿瘤靶向性及其在活体成像中的应用，明确该化合物对肿瘤生长的抑制作用。方法 将人乳腺癌细胞MCF-7、胶质瘤细胞U251和前列腺癌细胞PC3培养至对数生长期后，分别加入不同浓度的FTS和FTS-IR783，观察两种化合物对肿瘤细胞的生长抑制作用；培养的三种肿瘤细胞中加入FTS-IR783（20 μmol/L），荧光显微镜下观察荧光染料在肿瘤细胞中的聚集；将三种肿瘤细胞（每只1×10⁶个）皮下移植裸鼠，两周后荷瘤鼠腹腔注射FTS-IR783（每只10 nmol/L），活体成像分别测定肿瘤部位近红外荧光信号和肿瘤体积的相关性。结果 与FTS相比较，FTS-IR783可显著抑制MCF-7、U251和PC3的生长；三种肿瘤细胞可特异性识别FTS-IR783，呈现近红外荧光集聚；皮下荷瘤模型注射FTS-IR783后，活体成像显示肿瘤部位荧光强度与生物发光强度相关性分别达到0.987，0.998和0.971。结论 FTS与近红外荧光染料IR-783共轭结合后可特异性识别肿瘤细胞，用于肿瘤模型的活体成像，同时该化合物具有的肿瘤靶向性可显著抑制肿瘤细胞的生长，有望成为新型的靶向药物。     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α治疗骨肉瘤的实验研究

为观察靶向缺氧诱导因子(HIF)1α的短发夹状小干扰RNA基因转染对骨肉瘤生长的影响,特针对HIF1α构建短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer HIF并转染骨肉瘤细胞系(SaOS)2。将骨肉瘤细胞置于缺氧诱导培养基中培养,采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和免疫印迹沉淀观察HIF1α的基因沉默效果。以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析检测细胞体外增殖活力,透射电镜、原位末端标记TUNEL法、AnnexinV/PI双标记法检测细胞的凋亡。同时,通过裸鼠移植瘤模型观察HIF1α基因沉默后对骨肉瘤体内治疗效果。测序证实成功构建了HIF1α的短发夹状si…     

IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤效应研究

目的 探讨七甲川花菁类荧光小分子IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤作用.方法 利用CCK-8试剂盒检测不同浓度IR-780(0、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000.μmol/L)及IR-780联合阿霉素(0、0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 μmol/L)对4种不同肝癌细胞(QGY-7703、SMMC-7721、Huh-7和HepG2)的杀伤效应,并确定后续实验IR-780和阿霉素的浓度,采用细胞划痕实验检测IR-780联合阿霉素对肝癌细胞迁移能力的影响;采用无血清悬浮培养的方法从Huh-7细胞株中分离并鉴定出具有干细胞特性的肿瘤细胞,检测IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤作用及迁移能力的影响;在裸鼠皮下荷瘤模型中观察IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞生长的抑制作用.结果 低浓度的IR-780对肝癌细胞无明显杀伤作用;采用1.250 μmol/L的IR-780联合阿霉素可对多种肝癌细胞产生较强的杀伤作用,其中半数致死浓度LC50较单药阿霉素降低25％;采用无血清悬浮培养的方法培养出Huh-7细胞肿瘤球,比较其与贴壁细胞的克隆形成能力、致瘤能力和细胞周期分布,证明悬浮培养的肿瘤细胞具有肿瘤干细胞特性;IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞具有较强的杀伤作用,单用阿霉素和IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的LC50差异有统计学意义[(0.30±0.02)vs (0.22±0.04) μmol/L,P＜0.05];IR-780联合阿霉素可明显抑制肝癌干细胞样细胞的迁移能力和裸鼠皮下肿瘤的生长.结论 IR-780可增强阿霉素的抗肿瘤作用,提高对肝癌干细胞样细胞的杀伤效应.     

七甲川菁荧光染料在肝细胞癌移植模型活体成像中的应用

目的探索七甲川菁近红外(NIR)荧光染料MHI-148在肝癌移植模型中的代谢特征,明确其识别肝细胞癌(HCC)细胞的特异性。方法体外培养人HCC细胞系Hep3B,荧光显微镜下观察荧光染料MHI-148在肿瘤细胞中富集强度;裸小鼠皮下注射Hep3B细胞建立移植模型,2周后,荷瘤鼠腹腔注射MHI-148溶液,NIR荧光活体成像检测不同时间点肿瘤部位和裸小鼠脏器中荧光强度的变化;连续检测肿瘤部位荧光强度(tumor,T)和临近正常组织荧光强度(background,B),计算最大T/B值。结果 MHI-148染料可特异性集聚于体外培养的HCC细胞,识别绿色荧光蛋白(GFP)标记的Hep3B细胞;肝癌皮下荷瘤鼠注射MHI-148,24 h后肿瘤部位荧光强度可达8.35×109/cm2,而小鼠其他脏器较少有荧光聚集;T/B值逐渐增加,并在24 h达到峰值。结论七甲川菁染料MHI-148可特异性识别人HCC细胞系Hep3B,通过NIR荧光成像或可检测到肝癌的发生。     

乙型肝炎病毒X蛋白诱导p16~(INK4A)基因启动子甲基化及其机制研究

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对p16~(INK4A)基因启动子甲基化的影响及机制。方法以Hep G2细胞和稳定表达GFP/HBx融合蛋白的Hep G2/GFP-HBx为实验细胞,Hep G2/GFP、Hep G2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤;设计合成靶向HBV X的si RNA(X-si RNA)和对照si RNA,用X-si RNA、5-N-2-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)单独或联合处理细胞及裸鼠;甲基化PCR检测细胞及移植瘤组织p16~(INK4A)基因甲基化;RT-PCR法测定DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的m RNA表达。结果甲基化PCR检测显示Hep G2/GFP-HBx组细胞及移植瘤组织均存在p16~(INK4A)甲基化而Hep G2/GFP组均未检出p16甲基化;X-si RNA、5-Aza-Cd R处理的细胞及移植瘤组织中p16~(INK4A)基因甲基化均减低;RT-PCR检测显示GFP-HBx/Hep G2组DNMT1、DNMT3A较Hep G2组显著升高,差异有统计学意义(P=0.000 2、P=0.000 5),较GFP/Hep G2细胞组也显著升高,差异有统计学意义(P=0.001 1、P=0.000 5),而DNMT3B在Hep G2、GFP/Hep G2、GFP-HBx/Hep G2细胞组组间检测值差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBX蛋白可能通过上调DNMT1、DNMT3A m RNA的转录表达而诱导p16~(INK4A)基因启动子的甲基化。     

紫杉醇联合表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合紫杉醇对肝癌Hep G2细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。方法将Hep G2细胞分为对照组、EGCG组、紫杉醇组、EGCG联合紫杉醇组。噻唑蓝法观察不同药物干预对Hep G2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测Hep G2细胞凋亡。构建肝癌细胞体外肿瘤球,比较各组药物对肿瘤球生长的抑制作用。构建裸鼠肝癌异位肿瘤模型,比较各组裸鼠肿瘤生长抑制率。结果给药24、48 h后,EGCG组、紫杉醇组、EGCG联合紫杉醇组Hep G2细胞增殖抑制率显著高于对照组(P<0.01),EGCG联合紫杉醇组Hep G2细胞增殖抑制率显著高于EGCG组和紫杉醇组(P<0.01)。EGCG组、紫杉醇组、EGCG联合紫杉醇组Hep G2细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),EGCG联合紫杉醇组Hep G2细胞凋亡率显著高于EGCG组和紫杉醇组(P<0.01)。EGCG组、紫杉醇组、EGCG联合紫杉醇组Hep G2细胞肿瘤球生长抑制显著高于对照组(P<0.01),EGCG联合紫杉醇组Hep G2细胞肿瘤球生长抑制显著高于EGCG组和紫杉醇组(P<0.01)。EGCG组、紫杉醇组、EGCG联合紫杉醇组荷瘤裸鼠肿瘤质量显著低于对照组(P<0.01),EGCG联合紫杉醇组荷瘤裸鼠肿瘤质量显著低于EGCG组和紫杉醇组(P<0.01)。EGCG组、紫杉醇组、EGCG联合紫杉醇组荷瘤裸鼠肿瘤生长抑制率显著高于对照组(P<0.01),EGCG联合紫杉醇组荷瘤裸鼠肿瘤生长抑制率显著高于EGCG组和紫杉醇组(P<0.01)。结论 EGCG联合紫杉醇能够有效抑制肝癌细胞的增殖和肿瘤的生长。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

十二指肠损伤的治疗体会

目的：提高十二指肠损伤的诊治水平，方法：回顾总结该院1999年－2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果：合并其他腹部脏器损伤86％（6／7），单纯十二指肠损伤14％（1／7）。损伤部位以十二指肠降部为多占71％（5／7），水平部和球部各占14％（1／7），术后并发症发生率28％（2／7）、病死率14％（1／7）。结论：掌握十二指肠损伤的特点，早诊断、早手术、术中认真探查，掌握好检查指征，选择合理恰当术式，加强术后管理，可提高治愈率。