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相似文献
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1.
目的:探讨在不同成熟状态下树突状细胞(dendritic cell,DC)分泌的外泌体(exosomes,Dex)的制备、提取及体外功能鉴定。方法:F344大鼠骨髓来源DC培养6后分为2组,一组为未成熟树突状细胞组(immature DC,imDC):直接收集上清;一组为成熟树突状细胞组(mature DC,mDC):每孔加入终浓度为1μg/ml的LPS培养48h后,收集上清。然后用多步离心法分离得到Dex,流式细胞术检测两组Dex的表型,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测两组Dex与Wistar大鼠骨髓来源的imDC共培养上清的白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12p70)的含量,混合淋巴细胞实验(MLR)检测共培养DCs刺激T细胞增殖能力。结果:与mDC分泌的exosomes相比,imDC分泌的exosomes表面中度表达MHC-Ⅱ类分子、低表达CD80、CD86、CD40共刺激分子,而且与Wistar大鼠骨髓来源的imDC共培养后刺激IL-12p70分泌能力较低(P<0.05),刺激T淋巴细胞增殖的能力也较mDC分泌的exosomes组弱(P<0.05)。结论:不同成熟状态下的DC分泌...  相似文献   

2.
热休克蛋白60对小鼠树突状细胞成熟及免疫功能的影响   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 探讨动脉粥样硬化中重要炎性物质——热休克蛋白60(HSP60)体外对小鼠树突状细胞(mDC)功能的影响。方法 从近交系C57BL/6J小鼠骨髓中提取mDC.体外培养成熟后分别与3、10/μg/ml mHSP60或PBS孵育24h.观察其形态改变;流式细胞仪检测mDC表面标志;混合淋巴细胞反应(MLR)测定mDC刺激功能;ELISA法测定MLR上清液中细胞因子浓度。结果 mHSP60处理组较对照组.mDC突起增加明显;CD80及CD86表型显著增加;淋巴细胞刺激功能明显增强;上清液细胞因子IL-12、IFN-γ增加(P<0.01)而IL-4增加不明显(P〉0.05).IFN-γ/IL-4比值升高。以上变化mHSP60高剂量处理组较低剂量处理组更明显。结论 mHSP60体外可以促进mDC功能.且作用呈剂量依赖性。  相似文献   

3.
Wang KL  Guo L  Shi RF  Wang JL  Dong SH 《中华医学杂志》2011,91(45):3225-3228
目的 研究小鼠骨髓成熟树突状细胞(mDC)与未成熟树突状细胞(imDC)的生物免疫学特性.方法 体外诱导培养小鼠骨髓imDC,经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激获得mDC.用小鼠CD11c免疫磁珠纯化DC.电镜观察DC的细胞形态.流式细胞术(FCM)检测细胞表面分子MHCⅡ、CD80、CD86的表达.用细胞增殖检测试剂(CCK-8)检测混合淋巴细胞反应(MLR)中DC刺激同种异基因T细胞的增殖能力.实时荧光定量PCR(QPCR)检测DC上细胞因子mRNA的表达.ELISA检测DC培养上清中的细胞因子表达.结果 电镜观察:imDC比mDC细胞突起少、短.胞质内有更多吞饮泡及溶酶体.FCM检测imDC上MHC-Ⅱ(27.2%)、CD80(27.6%)、CD86(29.5%)的表达水平均显著低于mDC MHC-Ⅱ(97.7%)、CD80(97.2%)、CD86(96.4%).MLR中相同反应比例imDC刺激T细胞的增殖能力,1∶5(1.63±0.04),1∶10(1.50±0.08),1∶20(1.28±0.07),1∶40(1.19±0.04),显著低于mDC 1∶5(2.21±0.09),1∶10(1.92 ±0.02),1∶20(1.64±0.01),1∶40(1.45±0.06),两组间差异均有统计学意义(均P<0.01).QPCR检测imDC上IL12p35(0.66±0.13)、IL12p40(0.57±0.10)、IFN-γ(0.74±0.08)mRNA相对表达量(mDC为对照)显著低于mDC(1.00±0.00,P<0.05),而TGF-β(1.35±0.09)显著高于mDC(1.00±0.00,P<0.05).ELISA法检测imDC分泌IL12p70(6 ±4)、IFN-γ(56±15)显著低于mDC IL12p70(120±22)、I FN-γ(90±15,P<0.05),而TGF-β(176±23)显著高于mDC TGF-β(55±18,P<0.05).结论 imDC低表达共刺激分子、MHC-Ⅱ和Th1类细胞因子,高表达TGF-β,不能活化T细胞,具有耐受原性.mDC高表达共刺激分子、MHC-Ⅱ和Th1类细胞因子,可激活初始T细胞,具有免疫原性.  相似文献   

4.
Serrate1基因转染对小鼠树突状细胞生物学特性的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 探讨Serratel基因转染对小鼠树突状细胞生物学特性的影响。方法 将Serratel基因体外转染小鼠DCs,经G418筛选后,Western blot检测DCs Serratel的表达,流式细胞仪检测转染后DCs表面共刺激分子的表达,混合淋巴细胞反应观察DCs对T淋巴细胞增殖的影响。结果 Serratel基因转染的树突状细胞Serratel的表达较未转染组明显增高,转染Serratel基因的DCs表面CD80、CD86等共刺激分子的表达与对照组比较无明显改变(P〉0.05);在混合淋巴细胞反应中,转染DCs对T细胞的增殖有抑制作用,而空载体pcDNA3.1(+)对照组与未转染组的树突状细胞具有强烈的激发T细胞增殖的能力。结论 Serratel基因转染能在不影响DCs表面共刺激分子表达的情况下显著抑制T细胞活化。  相似文献   

5.
血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的构建含日本血吸虫相对分子质量为26000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应。方法用RT—PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因。利用重组PCR技术,在Sj26基因的5’端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3’端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26。将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT—PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达。用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群。结果经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达。免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P〈0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P〈0.05);CD8^+细胞百分比高于空白对照组和空载体组(均P%0.05),CD4^+细胞百分比没有显著变化(P〉0.05)。结论成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26,表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上。pIRES—Sj26疫苗能增强BALB/c小鼠的免疫应答反应。  相似文献   

6.
目的探讨小干扰RNA(siRNA)对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达及干扰后的T细胞的功能的影响。方法设计针对目标基因的siRNA,转染大鼠T淋巴细胞,逆转录.聚合酶链反应(RT-7PCR)方法检测CD28mRNA水平,MLR检测转染后的T淋巴细胞的增殖能力,ELISA法检测细胞因子水平。结果siRNA转染大鼠T淋巴细胞后,抑制CD28分子的表达,半定量RT-PCR检测显示T淋巴细胞CD28的mRNA均有明显的下降,siRNA转染48h后,siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4组CD28基因表达均受到抑制,其抑制率最高为(88.56±4.70)%,T细胞增殖能力、IL2,IFN-γ水平明显低于对照组。结论siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的转录和表达,降低大鼠T细胞的增殖能力,抑制了IL-2,IFN-γ细胞因子的分泌水平。[第一段]  相似文献   

7.
目的:观察腺病毒介导人白介素-10(hIL-10)转基因对大鼠同种异体移植血管IL-2、TNF-α的影响及其可能的作用机制。方法:以Wistar大鼠为供体,SD为受体,采用颈动脉显微外科原位吻合技术,将经直接浸泡法转染腺病毒介导hIL-10的离体供血管植入受体血管。随机分为3组:I组(空白对照组,n=9),II组(空载体组,n=10),III组(基因转染组,n=10)。移植后5d,观察移植物病理组织学变化及免疫排斥级别;RT-PCR、ELISA、免疫组化染色检测移植血管hIL-10基因产物;免疫组化染色检测IL-2、TNF-α。结果:基因转染组移植血管有效地表达特异性hIL-10基因产物。与对照组比较,急性排斥级别降低(P<0.01);IL-2、TNF-α的表达量明显下降(P<0.01)。结论:腺病毒介导人白介素-10转基因能有效地下调IL-2、TNF-α表达,诱导移植血管局部免疫抑制状态,抑制同种异体移植血管的急性排斥反应。  相似文献   

8.
目的:观察腺病毒介导入白介素-10(hIL-10)转基因对大鼠同种异体移植血管IL-2、TNF-a的影响及其可能的作用机制.方法:以Wistar大鼠为供体,SD为受体,采用颈动脉显微外科原位吻合技术,将经直接浸泡法转染腺病毒介导hIL-10的离体供血管植入受体血管.随机分为3组:Ⅰ组(空白对照组,n=9),Ⅱ组(空载体组,n=10),Ⅲ组(基因转染组,n=10).移植后5d,观察移植物病理组织学变化及免疫排斥级别;RT-PCR、ELISA、免疫组化染色检测移植血管hIL-10基因产物;免疫组化染色检测IL-2、TNF-a.结果:基因转染组移植血管有效地表达特异性hIL-10基因产物.与对照组比较,急性排斥级别降低(P<0.01);IL-2、TNF-a的表达量明显下降(P<0.01).结论:腺病毒介导入白介素-10转基因能有效地下调IL-2、TNF-a表达,诱导移植血管局部免疫抑制状态,抑制同种异体移植血管的急性排斥反应.  相似文献   

9.
目的探讨Serrate1基因转染对小鼠树突状细胞生物学特性的影响.方法将Serrate1基因体外转染小鼠DCs,经G418筛选后,Western blot检测DCs Serrate1的表达,流式细胞仪检测转染后DCs表面共刺激分子的表达,混合淋巴细胞反应观察DCs对T淋巴细胞增殖的影响.结果Serrate1基因转染的树突状细胞Serrate1的表达较未转染组明显增高,转染Serrate1基因的DCs表面CD80、CD86等共刺激分子的表达与对照组比较无明显改变(P>0.05);在混合淋巴细胞反应中,转染DCs对T细胞的增殖有抑制作用,而空载体pcDNA 3.1( )对照组与未转染组的树突状细胞具有强烈的激发T细胞增殖的能力.结论Serrate1基因转染能在不影响DCs表面共刺激分子表达的情况下显著抑制T细胞活化.  相似文献   

10.
目的 建立转染人白细胞介素-24(hIL-24)基因的喉癌细胞株,并研究hIL-24的表达情况.方法 将携带人白细胞介素-24的质粒peDNA3.1( )-hIL-24转导入人喉表皮样癌细胞Hep-2中,G418筛选阳性克隆,RT-PCR、Western blot和ELISA法对hIL-24的表达进行检测.结果 IL-24基因成功地转导入Hep-2细胞中并能高效表达.RT-PCR电泳结果显示hIL-24基因在mRNA水平有表达;ELISA法测得106个转染阳性细胞24h内培养上清液中hIL-24的含量为162.8±15.4 pg/mL,空载体转染及未转染的细胞未检测到hIL-24.结论 hIL-24基因成功转染人喉癌细胞系Hep-2细胞且能持续大量表达.  相似文献   

11.
Ⅰ型糖尿病是由于胰岛β细胞被自身免疫系统攻击、破坏,不能正常释放胰岛素,导致血糖升高.患者需终生注射胰岛素,由于给药过程缺乏理想的血糖感应系统,常导致糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、神经病变及糖尿病足等慢性并发症的发生,是糖尿病死亡的主要原因[1].为了有效控制血糖,防止糖尿病并发症的发生,提高糖尿病患者的生存质量,目前主要采用两种治疗策略来改进胰岛素的治疗,一是胰岛素输入方式的改进:临床上广泛应用的胰岛素泵就是通过24 h不停地向患者体内输入微量胰岛素,模拟正常胰岛素分泌模式,控制血糖水平,减少并发症的发生.其次是寻找方法替代被患者自身免疫系统破坏的胰岛素分泌细胞,包括胰腺或胰岛移植、对非β细胞进行基因修饰以及对干细胞的诱导分化.70年代初,Lacy等成功地证明了移植胰岛细胞能够改善糖尿病大鼠的高血糖状态,胰岛细胞移植开始蓬勃开展起来.  相似文献   

12.
大鼠骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的初步研究   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的体外分离培养骨髓间充质干细胞,并探索表皮细胞生长因子诱导MSCs分化的潜能及条件.方法采用直接贴壁法,分离培养大鼠股骨和胫骨骨髓间充质干细胞,应用免疫细胞化学法检测细胞CD44、CD106、CD29、CD90、CD34等,对分离的细胞进行鉴定.以10~40 ng/ml的表皮生长因子处理第3代MSCs,观察细胞角蛋白的表达.用Western blot方法摸索integrin β1的表达与MSCs分化状态的关系.结果原代培养的骨髓间充质细胞CD44、CD106、CD29、CD90免疫细胞化学染色为阳性,CD34为阴性,符合骨髓间充质干细胞特征.MSCs经不同浓度的EGF体外诱导7 d后,免疫细胞化学结果显示,EGF浓度为30 ng/ml和40 ng/ml时,细胞角蛋白出现阳性表达;体外诱导14 d,呈角蛋白染色阳性的细胞比例进一步增加,同时integrin β1表达量下降.结论体外培养的MSCs在EGF诱导下,具有分化为表皮细胞的倾向,同时integrin β1可能在MSCs分化中具有一定的作用.  相似文献   

13.
髓性白血病存在着骨髓基质细胞的异常。本文从基质细胞对骨髓造血细胞的支持作用、基质细胞异常与髓性白血病的关系、基质细胞对髓性白血病细胞株的促分化作用以及细胞因子对髓性白血病的促分化作用等几个方面对国内外文献进行了综述,阐明基质细胞对髓性白血病细胞的促分化作用,并描述基质细胞的应用前景。  相似文献   

14.
目的:分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法:利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。 结果:诱导24 h后,细胞胞体收缩呈锥形或球形,有突起长出,细胞间突起相互连接,交错成网,为典型的神经元样形态。免疫细胞化学结果显示,经诱导培养后的神经元样细胞的胞体及部分突起NSE和NF染色呈强阳性表达,而GFAP 染色呈阴性。诱导组出现NSE阳性的细胞率为(79.5±3.2)%,而对照组出现NSE阳性的细胞率为(12.1±2.0)%,两组之间比较差异有显著性 (P<0.01)。诱导组出现NF阳性的细胞率为(41.2±2.4)%,而对照组为阴性。结论:鼠胶质瘤细胞上清液可以诱导MSCs向神经元样细胞分化。  相似文献   

15.
目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后对胃癌MKN-28细胞株的杀伤作用。方法取正常人外周血,分离出外周血单个核细胞(PBMC),加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,共培养成DC-CIK细胞,以MTS法测定不同组CIK细胞对MKN-28杀伤活性。结果与单纯CIK细胞相比较,DC-CIK组细胞增殖速率明显提高(P<0.05);具有更强的杀伤胃癌MKN-28细胞株的活性(P<0.05),效靶比为20.0∶1时,DC-CIK组对MKN-28的杀伤活性为(38.02±2.06)%,>CIK组的(29.78±1.84)%,差异有统计学意义。结论 DC-CIK细胞是一种增殖活性和细胞毒作用均高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。  相似文献   

16.
Background Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood and immune cells and are used in clinical transplantation protocols to treat a wide variety of refractory diseases, but the amplification of HSCs has been difficult to achieve in vitro. In the present study, the expansive effects of aorta-gonad-mesonephros (AGM) region derived stromal cells on HSCs were explored, attempting to improve the efficiency of HSC transplantation in clinical practice.Methods The murine stromal cells were isolated from the AGM region of 12 days postcoitum (dpc) murine embryos and bone marrow(BM)of 6 weeks old mice, respectively. After identification with flow cytometry and immunocytochemistry, the stromal cells were co-cultured with ESCs-derived, cytokines-induced HSCs. The maintenance and expansion of ESCs-derived HSCs were evaluated by detecting the population of CD34+ and CD34+Sca-1+cells with flow cytometry and the blast colony-forming cells (BL-CFCs), high proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFCs) by using semi-solid medium colonial culture. Finally, the homing and hematopoietic reconstruction abilities of HSCs were evaluated using a murine model of HSC transplantation in vivo.Results AGM and BM-derived stromal cells were morphologically and phenotypically similar, and had the features of stromal cells. When co-cultured with AGM or BM stromal cells, more primitive progenitor cells (HPP-CFCs ) could be detected in ESCs derived hematopoietic precursor cells, but BL-CFC’s expansion could be detected only when co-cultured with AGM-derived stromal cells. The population of CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells were expanded 3 times,but no significant expansion in the population of CD34+Sca-1+ cells was noted when co-cultured with BM stromal cells. While both CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells and CD34+Sca-1+ cells were expanded 4 to 5 times respectively when co-cultured with AGM stromal cells. AGM region-derived stromal cells, like BM-derived stromal cells, could promote hematopoietic reconstruction and HSCs’ homing to BM in vivo.Conclusions AGM-derived stromal cells in comparison with the BM-derived stromal cells could not only support the expansion of HSCs but also maintain the self-renewal and multi-lineage differentiation more effectively. They are promising in HSC transplantation. Chin Med J 2005; 118(23):1979-1986  相似文献   

17.
目的探讨哺乳动物内耳再生毛细胞前体细胞的可能来源。方法取出生1d大鼠的椭圆囊,嗜热菌蛋白酶处理,消化法原代培养。在倒置显微镜下,对椭圆囊感觉上皮细胞(USEC)的形态、生长特征进行观察;透射电镜及免疫细胞化学法检测细胞角蛋白18、波形蛋白;免疫细胞化学法及RT—PCR检测支持细胞标记物p27kipl mRNA及毛细胞的特征性标记物Brn3a、Calretinin及AchRa9、Myosin Vlla mRNA的表达,进而鉴定USEC上皮细胞来源。结果原代培养的USEC呈扁平、多角形、核大而圆的上皮细胞形态,细胞问连接紧密,形成单层时呈“铺路石样”外观,可见“dome”结构;表达细胞角蛋白,但不表达波形蛋白,细胞微绒毛丰富,细胞问连接紧密。原代培养的USEC表达支持细胞标记物p27kipl mRNA及毛细胞的特征性标志物Brn3a、Calretinin及AchRa9、Myosin Vlla mRNA。结论原代培养的USEC可以产生毛细胞样细胞,而且能表达支持细胞标记物,表明其来源为支持细胞。椭圆囊感觉上皮的支持细胞可能是毛细胞再生的前体细胞之一。  相似文献   

18.
随着干细胞研究领域发展的日趋成熟,科学家们发现干细胞的这一特性和癌细胞之间有惊人的相似性.肿瘤可能起源于正常干细胞的转化,相似的信号通路可能既调节干细胞也调节癌细胞的自我更新,且癌细胞中可能含有"肿瘤干细胞".本文阐述了目前研究较少的肝癌干细胞的最新研究进展.  相似文献   

19.
Summary: To explore the possibility and condition of differentiation of bone marrow mesenchymal ceils (BMSCs) to neural ceils in vitro, BMSCs from whole bone marrow of rats were cultured. The BMSCs of passage 3 were identified with immunocytochemical staining of CD44 ( + ), CD71 ( + ) and CD45(-), There were type I and type H ceils in BMSCs. Type I BMSCs were spindlehaped and strong positive in immunocytochemical staining of CD44 and CD71, whereas flat and big type H BMSCs were lightly stained. The BMSCs of same passage were induced to differentiate into neural ceils by β-mercaptoethanol (BME). After induction by BME, the type I BMSCs withdrew to form neuron-like round soma and axon-like and dendrite-like processes, and were stained positively for neurofilament (NF). The type H BMSCs did not change in the BME medium and were negatively or slightly stained of NF.  相似文献   

20.
肝干细胞--肝卵圆细胞的研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
甘向阳  滕皋军 《现代医学》2005,33(2):129-131
对于肝卵圆细胞的研究已有一定时间,但近几年才明确其属于干细胞范畴,笔者简要综述了肝卵圆细胞的特征、来源、调控分化及与肝病的关系。  相似文献   

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